全 文 ：基金项目:云南省教育厅基金重点项目(2013Z153) ;大理学院 2012 年应用开发基金资助项目;大理学院 2011 年中青年学术带头人培养项目
作者简介:张琳，女，硕士研究生 研究方向:天然药物活性成分及质量控制 * 通讯作者:李海峰，男，教授，硕士生导师 研究方向:药
用植物次生代谢、品质评价及质量控制 Tel /Fax:(0872)2251475 E-mail:lihfzh888@ sina. com
滇龙胆不同居群间品质评价及质量等同性的研究
张琳，罗智渊，冯丽丽，李海峰* (大理学院药学与化学学院，云南 大理 671000)
摘要:目的 建立滇龙胆不同居群间品质评价及质量等同性的研究方法。方法 采用高效液相色谱法测定滇龙胆根中活性
成分龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量，建立其 HPLC指纹图谱，并用单因素方差分析、聚类分析和主成分分析对其品质及
质量等同性进行评价。结果 大理白族自治州滇龙胆不同居群间整体品质较好，龙胆苦苷含量较低的巍山居群龙胆的龙胆
苦苷含量是国家标准的 2 倍以上，滇龙胆不同居群间根中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷含量( P ＜ 0. 01) 具有极显著差异;
对不同居群间质量等同性进行分析，确定 HPLC指纹图谱中 11 个共有峰，共有峰 HPLC指纹图谱相似度均在 0. 988 以上，指认
其中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷 3 个与活性相关的特征峰，不同居群间质量等同性基本一致;不同居群间龙胆苦苷、獐牙
菜苦苷、獐牙菜苷总含量聚类分析和 HPLC指纹图谱主成分分析结果相似。结论 根据有效成分含量及 HPLC指纹图谱得出
优质种质资源居群为剑川、鹤庆居群;建立滇龙胆不同居群间品质评价及质量等同性的研究方法，为从滇龙胆野生居群中进
一步筛选优质种质资源提供理论依据。
关键词:滇龙胆;高效液相色谱法;含量测定;指纹图谱
doi: 10. 11669 /cpj. 2014. 05. 015 中图分类号:Ｒ284;Q945 文献标志码:A 文章编号:1001 － 2494(2014)05 － 0412 － 07
Quality Evaluation and Quality Equivalence of Gentiana rigescens Franch. from Different Populations
ZHANG Lin，LUO Zhi-yuan，FENG Li-li，LI Hai-feng* (College of Pharmacy and Chemistry，Dali University，Dali 671000，
China)
ABSTＲACT:OBJECTIVE To establish evaluation methods of the quality and quality equivalence of Gentiana rigescens Franch．
from different populations. METHODS The contents of the active ingredients，gentiopicroside，swertiamarin and sweroside in the
roots of Gentiana rigescens Franch.，were determined by HPLC，and the HPLC fingerprint was established. The quality and quality e-
quivalence were evaluated by One-way ANOVA，cluster analysis and principal component analysis(PCA). ＲESULTS The overall
quality of Gentiana rigescens Franch. from different populations in Dali Yunnan was better. The content of gentiopicroside in the sample
from Weishan population was lower than those in the other populations，while it was more than twice the national standard. There was
significant difference(P ＜ 0. 01)in the contents of gentiopicroside，swertiamarin，and sweroside in the roots of Gentiana rigescens
Franch． from different populations. The quality equivalence of Gentiana rigescens Franch. from different populations was analyzed，and
11 common peaks in HPLC fingerprint were selected to evaluate the similarities of the crude drugs. The similarities of the characteristic
peaks were all above 0. 988. The three characteristic peaks of gentiopicroside，swertiamarin and sweroside which were related to the ac-
tivity of Gentiana rigescens Franch were identified，and the qualities of different populations were basically equivalent. The total con-
tents of gentiopicroside，swertiamarin and sweroside of Gentiana rigescens Franch． from different populations were similar as shown by
cluster analysis and PCA of HPLC fingerprint. CONCLUSION Jianchuan and Heqing polulations are quality germplasm populations
according to the contents of effective components and HPLC fingerprint. The evaluation methods of quality and quality equivalence of
Gentiana rigescens Franch. from different populations are established，which would provide the theoretical basis for further filtering of
quality germplasm resources of Gentiana rigescens Franch. from wild populations.
KEY WOＲDS:Gentiana rigescens Franch.;HPLC;content determination;fingerprint
滇龙胆(Gentiana rigescens Franch. )又称坚龙
胆、滇龙胆草，为龙胆科(Gentianaceae)龙胆属多年
生宿根草本植物，是我国特有物种，云南、贵州、四
川、广西壮族自治区等省均有分布［1］。滇龙胆在云
南药用历史悠久，被历版《中国药典》收录，为传统
中药材龙胆的植物来源之一［2］。滇龙胆根及根茎
具有保肝、护肝、抗炎、抗肿瘤、治疗神经退行性疾
病、抗病毒、健胃、抗癌等多种功效［3-5］，近来药理学
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研究表明有抗呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial
virus，ＲSV)、降血糖等功效［6-7］。滇龙胆的主要有
效成分是裂环烯醚萜类物质，其功效与龙胆苦苷、獐
牙菜苦苷、獐牙菜苷等 3 种裂环烯醚萜密切相关。
随着药厂对滇龙胆需求量的日益增加，长期无
序采挖，导致野生资源濒临枯竭［8］。在大理等滇龙
胆原料药来源地已经很难找到成年植株，野生种质
资源的枯竭必将导致资源更新和再生成为无本之
木。因此，本实验拟利用高效液相色谱法(HPLC)
对云南大理滇龙胆 11 个居群根中龙胆苦苷、獐牙菜
苦苷、獐牙菜苷含量进行测定，并建立其 HPLC 指纹
图谱。用单因素方差分析、聚类分析和主成分分析
(principal pomponent analysis，PCA)对其品质及质
量等同性进行评价，探讨滇龙胆优质种质资源在大
理白族自治州的分布情况，为滇龙胆野生优质种质
资源筛选、收集、保存、规范化种植(good agricultural
practices，GAP)及质量控制提供依据。
1 材料与设备
1. 1 原料与试剂
滇龙胆采样点选择与样品采集:2012 年 11 月，
在云南省大理白族自治州范围内选择滇龙胆野生资
源分布较丰富的 11 个县(市) ，每个县(市)采集 1
个野生居群，居群间距离大于 100 km，采样点生境
以土壤类型为红壤的荒山向阳坡草地上的居群，每
个居群随机采集无病虫害的开花期植株 30 株，采集
植株之间的株距不小于 3 m，采集的植株自然干燥，
经大理学院李海峰教授鉴定为龙胆科滇龙胆(Genti-
ana rigescens Franch. ) ，样品信息见表 1。在滇龙胆
不同居群间根中龙胆苦苷含量测定时，从每个居群
中随机选取根质量在 2. 6 ～ 3. 0 g 之间的植株 9 株
混合作为样品。
表 1 滇龙胆药材信息
Tab. 1 Information of Gentiana rigescens Franch. samples
No. Species Sample source Batch number Collected time Description
S1 G. Ｒigesciens Gantong，Dali 121101 December，2012 Wild
S2 G. Ｒigescens Eryuan，Dali 121102 December，2012 Wild
S3 G. Ｒigesciens Weishan，Dali 121103 December，2012 Wild
S4 G. Ｒigesciens Yunlong，Dali 121104 December，2012 Wild
S5 G. Ｒigesciens Nanjian，Dali 121105 December，2012 Wild
S6 G. Ｒigesciens Jianchuan，Dali 121106 December，2012 Wild
S7 G. Ｒigesciens Heqing，Dali 121107 December，2012 Wild
S8 G. Ｒigesciens Xiangyun，Dali 121108 December，2012 Wild
S9 G. Ｒigesciens Binchuan，Dali 121109 December，2012 Wild
S10 G. Ｒigesciens Midu，Dali 121110 December，2012 Wild
S11 G. Ｒigesciens Yangbi，Dali 121111 December，2012 Wild
龙胆苦苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号:
110770-201013，含量以 96. 9%计) ，獐牙菜苦苷对照
品(中国药品生物制品检定所，批号:0785-200203，
供鉴别用) ，獐牙菜苷对照品(贵州迪大生物有限公
司，GAS NO:14215-86-2，纯度≥98%)。甲醇(色谱
纯) ，水为 UP水(Millipore纯水处理系统制)。
1. 2 仪器与设备
美国惠普公司 AgiLent1200 高效液相色谱仪，
包括 G1313A ALS 自动进样器、G1315A /B DAD 检
测器、AgiLent ChemStation 色谱工作站;SK5200H 型
超声波清洗仪(上海科导超声仪器有限公司) ;梅特
勒电子天平 AE240(瑞士) ;FY135 型中草药粉碎机
(天津市泰斯特仪器有限公司) ;Millipore 纯水处理
系统等。
2 方 法
2. 1 不同居群间滇龙胆根中龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷、獐牙菜苷含量测定
2. 1. 1 色谱条件 色谱柱:Thermore C18 (4. 6
mm ×250 mm，5 μm) ;流动相为甲醇-0. 1%磷酸水
(27∶ 73，V /V) ;龙胆苦苷检测波长 274 nm、獐牙菜苦
苷和獐牙菜苷检测波长 243 nm;柱温:25 ℃;流速:
1 mL·min －1。
2. 1. 2 对照品溶液的制备 分别精密称取龙胆苦
苷 3. 270 0 mg、獐牙菜苦苷 5. 000 0 mg、獐牙菜苷
4. 460 0 mg，分别置于 5、10、5 mL量瓶中，用甲醇溶
解并稀释至刻度，摇匀，分别配成 0. 654 0、0. 500 0、
0. 892 0 mg·mL －1溶液。
2. 1. 3 供试品溶液的制备 取滇龙胆样品粉碎，过
100 目筛，30 ℃烘箱中干燥直到恒重，精密称取药材
粉末 0. 1 g(万分之一电子天平)于 50 mL 三角瓶
中，加入 2 mL 甲醇，于 40 kHz、40 ℃超声处理 20
min，滤纸过滤，滤渣用 2 mL甲醇按此步骤重复处理
1 次，合并 2 次提取滤液至 5 mL 量瓶中，冷却至室
温，加甲醇溶液至刻度，混匀，定容，即得供试品
溶液。
2. 1. 4 方法专属性 在“2. 1. 1”色谱条件下，分别
取对照品溶液和供试品溶液进样测定，得到特征峰，
供试品溶液与杂质分离良好，无干扰(图 1，2)。
2. 1. 5 线性关系 将龙胆苦苷对照品溶液依次稀
释成 0. 654 0，0. 261 6、0. 209 3、0. 104 6、0. 065 40、
0. 026 16 mg·mL －1溶液，獐牙菜苦苷对照品溶液依
次稀释成 0. 500 0、0. 200 0、0. 160 0、0. 080 00、
0. 040 00、0. 0200 0 mg·mL －1溶液，獐牙菜苷对照品
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溶液依次稀释成 0. 892 0、0. 356 8、0. 285 4、0. 142 7、
0. 071 36、0. 035 68 mg·mL －1溶液，在“2. 1. 1”色谱条
件下，每次进样 10 μL，分别测定龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷、獐牙菜苷对照品峰面积，再分别以进样浓度对峰
面积进行回归，得回归方程，同时以信噪比 3 和 10 为
标准考察检测限(LOD)和定量限(LOQ)，结果见表 2。
2. 1. 6 精密度实验 取 0. 104 6 mg·mL －1龙胆苦
苷、0. 02 mg·mL －1獐牙菜苦苷和 0. 356 8 mg·mL －1
獐牙菜苷对照品溶液，在“2. 1. 1”色谱条件下，每次进
样 10 μL，重复进样 6 次，测得平均峰面积分别为
1 095、177. 7、368 0，ＲSD 分 别 为 0. 959 4%、
0. 985 4%、0. 143 5%(n =6) ，结果表明精密度良好。
2. 1. 7 重现性实验 精密称取同一批样品 6 份，按
“2. 1. 3”方法分别制备 6份供试样品溶液，在“2. 1. 1”
项下色谱条件下，每次进样 10 μL，测定龙胆苦苷、獐
牙菜苦苷、獐牙菜苷含量变化，分别测得平均峰面积
为5 200、188. 4、67. 40，ＲSD分别为2. 459%、2. 741%、
1. 577%(n =6) ，表明实验重现性较好。
2. 1. 8 回收率实验 精密称取同一批次的滇龙胆
根样品约 0. 1 g 4 份，其中 3 份精密加入獐牙菜苦苷
对照品 0. 080 0 mg，另一份作为空白，按“2. 1. 3”样
品溶液制备方法和“2. 1. 1”色谱条件测定峰面积;
另精密称取同一批次的滇龙胆根及根茎样品约
0. 05 g，共 6 份，其中 3 份精密加入龙胆苦苷对照品
0. 261 6 mg，另 3 份加入獐牙菜苷 0. 017 84 mg，按
“2. 1. 3”溶液制备方法和“2. 1. 1”色谱条件测定峰
面积，结果见表 3。
图 1 龙胆苦苷对照品(A)及样品(B)色谱图
1 －龙胆苦苷
Fig. 1 HPLC Chromatograms of gentiopicroside reference sub-
stance(A)and sample(B)
1 － gentiopicroside
图 2 獐牙菜苦苷对照品(A)、獐牙菜苷对照品(B)及样品
(C)色谱图
1 －獐牙菜苦苷;2 －獐牙菜苷
Fig. 2 HPLC Chromatograms of swertiamarin reference sub-
stance(A) ，sweroside reference substance(B)and sample(C)
1 － swertiamarin;2 － sweroside
表 2 滇龙胆中 3 种对照品标准曲线、检测限与定量限
Tab. 2 Calibration curves，LODs and LOQs of three reference substances of Gentiana rigescens Franch．
Substance Ｒegression equation r Linear range /μg LOD /μg LOQ /μg
Gentiopicroside Y =1 046X －16. 832 0. 999 8 0. 261 6 － 6. 540 0. 116 5 0. 363 5
Swertiamarin Y =917. 56X －57. 832 0. 999 4 0. 200 0 － 5. 000 0. 150 8 0. 370 2
Sweroside Y =1 005. 5X +31. 517 0. 999 2 0. 356 8 － 8. 920 0. 108 8 0. 386 6
表 3 滇龙胆中 3 种指标成分的加样回收率实验结果． n = 3
Tab. 3 Ｒesult of recovery tests of three index components in Gentiana rigescens Franch． n = 3
Component
m(Background)
/mg
m(Added)
/mg
m(Found)
/mg
Ｒecovery
/%
Average
recovery /%
ＲSD
/%
Gentiopicroside 0. 290 3 0. 261 6 0. 576 0 104. 4
0. 290 3 0. 261 6 0. 557 3 101. 0 101. 4 2. 821
0. 291 5 0. 261 6 0. 545 8 98. 69
Swertiamarin 0. 125 2 0. 080 0 0. 198 9 96. 93
0. 125 2 0. 080 0 0. 198 1 96. 51 96. 85 0. 3144
0. 125 1 0. 080 0 0. 199 1 97. 10
Sweroside 0. 022 2 0. 017 8 0. 043 2 108. 1
0. 022 1 0. 017 8 0. 043 1 107. 8 106. 8 1. 824
0. 022 1 0. 017 8 0. 041 8 104. 6
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2. 1. 9 稳定性实验 取供试样品溶液 1 份，在
“2. 1. 1”色谱条件下，每次进样 10 μL，分别在 0、2、
4、6、8、10、12 h 进样，考察供试样品溶液中龙胆苦
苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量变化，测得平均峰面
积为 5 189、188. 4、68. 01，ＲSD 分别为 0. 661 1%、
2. 000%、2. 942%(n = 6) ，结果表明，供试样品溶液
在 12 h内稳定。
2. 1. 10 样品测定 分别测定 11 个居群滇龙胆根
中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷含量，每个居群
均做 3 组平行实验，所得数据用 SPSS13. 0 统计软件
进行单因素方差分析。结果见表 4。
2. 2 大理白族自治州不同居群间滇龙胆根指纹图
谱的建立
2. 2. 1 色谱条件 色谱柱:BDSHYPEＲSIL C18(4. 6
mm ×250 mm，5 μm) ;流动相 A 为甲醇;B 为 0. 1%
磷酸水;线性梯度洗脱:0 ～ 65 min，15% ～ 95% A;检
测波长:235 nm;柱温:25 ℃;流速:0. 8 mg·mL －1。
2. 2. 2 对照品溶液的制备 同“2. 1. 2”龙胆苦苷、
獐牙菜苦苷、獐牙菜苷对照品溶液的制备。
2. 2. 3 供试品溶液的制备 同“2. 1. 3”样品溶液
的制备。
2. 2. 4 稳定性实验 取同一批次的样品，制备供试
品溶液，分别考察 0、2、4、6、8、12 h 的各共有峰的相
对峰面积和相对保留时间，采用“中药色谱指纹图
谱相似度评价系统 A 版”计算，得到相对保留时间
的 ＲSD均小于 0. 998 7%，相对峰面积的 ＲSD 均小
于 2. 870%，符合指纹图谱的要求，稳定性良好。
2. 2. 5 精密度实验 取同一批次的样品，制备供试
品溶液，连续进样 6 次的各共有峰的相对峰面积和
相对保留时间，采用“中药色谱指纹图谱相似度评
价系统 A版”计算，得到相对保留时间的 ＲSD均小
于 1. 022%，相对峰面积的 ＲSD 均小于 2. 353%，符
合指纹图谱的要求，精密度良好。
2. 2. 6 重现性实验 取同一批次的样品，称取 6
份，制备供试品溶液，所得的各共有峰的相对峰面积
和相对保留时间，采用“中药色谱指纹图谱相似度
评价系统 A 版”计算，相对保留时间的 ＲSD 均小于
1. 110%，相对峰面积的 ＲSD 均小于 2. 053%，符合
指纹图谱的要求，重现性良好。
2. 2. 7 样品的测定 取 11 个居群滇龙胆样品，按
“2. 1. 3”项下方法制备样品，测定 11 个居群的
HPLC指纹图谱，用“中药色谱指纹图谱相似度评价
系统 2004A版”进行分析。
2. 3 共有模式的建立
取 11 个居群滇龙胆样品，按照“2. 1. 3”项下方
法制备样品，用“中药色谱指纹图谱相似度评价系
统 2004A版”以 S4 为参照图谱，经过多点校正，自
动匹配，以中位数法，生成对照图谱 Ｒ，由匹配数据
的输出结果得到共有峰 11 个，经过与对照品保留时
间比较，确认 4 号峰为獐牙菜苦苷，5 号峰为獐龙胆
苦苷，6 号峰为獐牙菜苷，其中龙胆苦苷的峰面积比
例较大，分离度能够达到要求，是龙胆药材的药效成
分，因此选作参照峰，建立滇龙胆 HPLC 指纹图谱共
有模式见图 3。
3 结果与分析
3. 1 不同居群间滇龙胆根中龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷、獐牙菜苷含量比较分析
不同居群间滇龙胆根中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、
獐芽菜苷含量见表 4。大理白族自治州不同居群间
滇龙胆根中龙胆苦苷含量整体较高，含量较低的巍
山居群中龙胆苦苷含量也是国家标准的 2 倍多［3］。
对不同居群间滇龙胆根中龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐
芽菜苷及其总含量进行显著性检验，结果表明，鹤庆
居群、南涧居群、剑川居群滇龙胆根中龙胆苦苷含量
(P ＜ 0. 01)极显著高于其他居群;感通居群、洱源居
群、南涧居群、鹤庆居群、南涧居群、剑川居群滇龙胆
根中獐芽菜苦苷含量(P ＜ 0. 01)极显著高于其他居
群;宾川居群滇龙胆根中獐芽菜苷含量(P ＜ 0. 01)
极显著高其他居群;南涧居群、鹤庆居群滇龙胆根中
龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷及其总含量(P ＜
0. 01)极显著高于其他居群。
3. 2 聚类分析
参照文献［9］的方法，以表 4 中滇龙胆根中龙
胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷总含量为依据，通过
SPSS17. 0 软件平方欧式距离计算样品间的相似系
数，并用 Ward法进行系统聚类。树状聚类结果(图
3) ，根据滇龙胆根中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜
苷总含量可以将其分为 4 类。第一类为 S5(大理南
涧)、S6(大理剑川)、S7(大理鹤庆) ，第二类为 S1
(大理感通)、S4(大理云龙)、S8(大理祥云)、S10
(大理弥渡) ，第三类为 S2(大理洱源)、S9(大理宾
川)、S11(大理漾濞) ，第四类为 S3(大理巍山)。
第一类与第二类距离较近，说明第一类样品与第
二类样品总含量相接近。从表 4 3 种成分的总含
量可知第一类含量最高，二类、三类、四类总含量
依次降低。
3. 3 指纹图谱共有模式的建立及相似度评价
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表 4 滇龙胆不同居群间根中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷的含量比较分析 . n = 3，珋x ± s
Tab. 4 Comparison analysis of the contents of gentiopicroside，swertiamarin and sweroside in the roots of different Gentiana Ｒigescens
Franch populations. n = 3，珋x ± s
PopuLations
Contents /%
Gentiopicroside Swertiamarin Sweroside
Total contents /% Similarity
Gantong，Dali1 5． 994 ± 0． 072 4 2)3 0． 2978 ± 0． 010 01)1 ND 6． 292 ± 0． 066 23)4)3 1． 000
Eryuan，Dali 4． 816 ± 0． 158 63)4 0． 2953 ± 0． 009 01)1 0． 03888 ± 0． 001 22)3)23 5． 137 ± 0． 166 75)5 0． 988
Weishan，Dali 3． 449 ± 0． 042 34)5 0． 1243 ± 0． 003 76)5 0． 03209 ± 0． 001 12)3)4)234 3． 606 ± 0． 044 686)6 0． 994
Yunlong，Dali 5． 598 ± 0． 248 62)3 0． 2176 ± 0． 011 34)5)3 0． 01779 ± 0． 000 64)4 5． 834 ± 0． 249 24)4 0． 992
Nanjian，Dali 7． 045 ± 0． 186 91)12 0． 2890 ± 0． 018 72 1)1 0． 02145 ± 0． 000 73)4)4 7． 355 ± 0． 200 61)2)1 0． 997
Jianchuan，Dali 6． 725 ± 0． 098 01)2 0． 2558 ± 0． 011 62)32 0． 04289 ± 0． 001 32)2 7． 024 ± 0． 106 32)2 0． 994
Heqing，Dali 7． 251 ± 0． 122 81)12 0． 2772 ± 0． 016 71)2)1 0． 03847 ± 0． 016 32)3)23 7． 567 ± 0． 148 51)1 0． 996
Xiangyun，Dali 5． 696 ± 0． 153 1 2)23 0． 2248 ± 0． 008 84)3 0． 02416 ± 0． 003 72)3)4)34 5． 945 ± 0． 163 03)4)4 0． 996
Binchuan，Dali 4． 908 ± 0． 166 73)4 0． 1913 ± 0． 007 55)4 0． 06620 ± 0． 005 31)1 5． 165 ± 0． 166 75)5 0． 992
Midu，Dali 5． 964 ± 0． 578 92)3 0． 2384 ± 0． 004 53)4)23 0． 07119 ± 0． 003 31)1 6． 433 ± 0． 361 53)3 0． 996
Yangbi，Dali 4． 797 ± 0． 136 63)4 0． 1413 ± 0． 013 86)5 ND 4． 946 ± 0． 154 65)5 0． 989
注:采用最小显著差异法进行方差分析，不同 1)、2)、3)、4)、5)、6)表示差异极显著(P ＜0. 01) ，不同 1、2、3、4、5、6表示差异显著(P ＜0. 05)。ND表示未检出。
龙胆苦苷含量:与感通、云龙、祥云、弥渡居群比较1)P ＜ 0. 01，具有极显著差异;与洱源、宾川、漾濞居群比较2)P ＜ 0. 01，具有极显著差异;与巍山居群比较3)P ＜
0. 01，具有极显著差异;与南涧、剑川、鹤庆、祥云居群比较1P ＜0. 05，具有显著性差异;与感通、云龙、祥云、弥渡居群比较2P ＜ 0. 05，具有显著性差异;与洱源、宾
川、漾濞居群比较3P ＜0. 05，具有显著性差异;獐牙菜苦苷含量:与剑川居群比较1)P ＜0. 01，具有极显著差异;弥渡居群比较2)P ＜ 0. 01，具有极显著差异;与云龙、
祥云、弥渡居群比较3)P ＜0. 01，具有极显著差异;与云龙、宾川居群比较4)P ＜0. 01，具有极显著差异(P ＜0. 01) ;与巍山、漾濞居群比较5)P ＜0. 01，具有极显著差异
(P ＜0. 01) ;与剑川、弥渡居群比较1P ＜0. 05，具有显著性差异;与云龙、剑川、祥云、弥渡居群比较2P ＜ 0. 05，具有显著性差异;与宾川居群比较3P ＜ 0. 05，具有显
著性差异;与巍山、漾濞居群比较4P ＜ 0. 05，具有显著性差异;獐牙菜苷含量:与洱源、巍山、剑川、鹤庆、祥云居群比较1)P ＜ 0. 01，具有极显著差异;与洱源、巍山、
南涧、鹤庆、祥云居群比较2)P ＜0. 01，具有极显著差异;与巍山、云龙、南涧、祥云居群比较3)P ＜0. 01，具有极显著差异;与感通、漾濞居群比较4)P ＜ 0. 01，具有极显
著差异;与洱源、巍山、剑川、鹤庆居群比较1P ＜0. 05，具有显著性差异;与洱源、巍山、鹤庆、祥云居群比较2P ＜ 0. 05，具有显著性差异;与巍山、云龙、南涧、祥云居
群比较3P ＜0. 05，具有显著性差异;与感通、漾濞居群比较4P ＜0. 05，具有显著性差异;总含量:与剑川、南涧居群比较1)P ＜ 0. 01，具有极显著差异;与感通、祥云、
弥渡居群比较2)P ＜0. 01，具有极显著差异;与感通、云龙、祥云居群比较3)P ＜0. 01，具有极显著差异;与洱源、宾川、漾濞居群比较4)P ＜ 0. 01，具有极显著差异;与
巍山居群比较5)P ＜0. 01，具有极显著差异;与剑川居群比较1P ＜0. 05，具有显著性差异;与感通、弥渡居群比较2P ＜ 0. 05，具有显著性差异;与云龙、祥云居群比
较3P ＜0. 05，具有显著性差异;与洱源、宾川、漾濞居群比较4P ＜0. 05，具有显著性差异;与巍山居群比较5P ＜0. 05，具有显著性差异
Note:1)2)3)4)5)6) ，123456significant differences in LSD at the 0. 01 and 0. 05 level. ND represents no detected.;The contents of Gentiopicroside:compared with
Gantong，Yunlong，Xiangyun，Midu，the difference being extremely significant，1)P ＜0. 01;compared with Eryuan，Binchuan，Yangbi，the difference being extremely sig-
nificant，2)P ＜0. 01;compared with Weishan，the difference being extremely significant，3)P ＜0. 01;compared with Nanjian，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，the difference
being extremely significant，1P ＜0. 05;compared with Gantong，Yunlong，Xiangyun，Midu，the difference being extremely significant，2P ＜0. 05;compared with Eryuan，
Binchuan，Yangbi，the difference being extremely significant，3P ＜ 0. 05;compared with Weishan，the difference being extremely significant，4P ＜ 0. 05;The contents of
Swertiamarin:compared with Jianchuan，the difference being significant，1)P ＜ 0. 01;compared with Midu，the difference being significant，2)P ＜ 0. 01;compared with
Yunlong，Xiangyun，Midu，the difference being significant，3)P ＜ 0. 01;compared with Yunlong，Binchuan，the difference being significant，4)P ＜ 0. 01;compared with
Weishan，Yangbi，the difference being significant，5)P ＜0. 01;compared with Jianchuan，Midu，the difference being significant，1P ＜0. 05;compared with Yunlong，Jian-
chuan，Xiangyun，Midu，the difference being significant，2P ＜0. 05;compared withBinchuan，the difference being significant，3P ＜0. 05;compared with Weishan，Yang-
bi，the difference being significant，4P ＜0. 05;The contents of Sweroside:compared with Eryuan，Weishan，Jianchuan，Heqing，Xiangyun，the difference being signifi-
cant，1)P ＜0. 01;compared with Eryuan，Weishan，Nanjian，Heqing，Xiangyun，the difference being significant，2)P ＜0. 01;compared with Weishan，Yunlong，Nanjian，
Xiangyun，the difference being significant，3)P ＜0. 01;compared with Gantong，Yangbi，the difference being significant，4)P ＜ 0. 01;compared with Eryuan，Weishan，
Jianchuan，Heqing，the difference being significant，1P ＜0. 05;compared with Eryuan，Weishan，Heqing，Xiangyun，the difference being significant，2P ＜ 0. 05;com-
pared with Weishan，Yunlong，Nanjian，Xiangyun，the difference being significant，3P ＜ 0. 05;compared with Gantong，Yangbi，the difference being significant，4P ＜
0. 05;Total contents:compared with Jianchuan，Nanjian，the difference being significant，1)P ＜0. 01;compared with Gantong，Xiangyun，Midu，the difference being signif-
icant，2)P ＜0. 01;compared with Gantong，Yunlong，Xiangyun，the difference being significant，3)P ＜0. 01;compared with Eryuan，Binchuan，Yangbi，the difference be-
ing significant，4)P ＜0. 01;compared with Weishan，the difference being significant，5)P ＜ 0. 01;compared with Jianchuan，the difference being significant，1P ＜ 0. 05;
compared with Gantong，Midu，the difference being significant，2P ＜0. 05;compared with Yunlong，Xiangyun，the difference being significant，3P ＜0. 05;compared with
Eryuan，Binchuan，Yangbi，the difference being significant，4P ＜0. 05;compared with Weishan，the difference being significant，5P ＜0. 05
本实验在做指纹图谱时考虑到在 235 nm 时各
居群出峰数目最多，且 3 种有效成分的峰面积整体
较大，故不选择 3 种有效成分各自的最大吸收波长，
而选择 235 nm作为指纹图谱的检测波长。对 11 个
居群滇龙胆样品测定结果及数据进行分析，用“中
药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版”以 S4
为参照图谱，经过多点校正，自动匹配，以中位数法，
生成对照图谱 Ｒ，有匹配数据的输出结果得到共有
峰 11 个，经过与对照品保留时间比较，确认 4 号峰
为獐牙菜苦苷，5 号峰为獐龙胆苦苷，6 号峰为獐牙
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菜苷，其中龙胆苦苷的峰面积比例较大，分离度能够
达到要求，是龙胆药材的药效成分，因此选作参照
峰，建立滇龙胆 HPLC 指纹图谱共有模式见图 4。
再将 11 个居群指纹图谱的 AIA 格式的原始数据导
入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统 2004A 版”
软件系统，设定 S4 为参照图谱，选取“时间窗宽度”
为 0. 1 min，对照图谱的生成方法为“中位数”，选定
11 个特征峰进行多点校正，自动匹配，进行相似度
分析(见表 4) ，11 个居群间相似度均在 0. 988 以上，
不同居群间指纹图谱相似性较好。
图 3 滇龙胆的 HPLC指纹图谱共有模式
6 －獐牙菜苦苷;7 －龙胆苦苷;8 －獐牙菜苷
Fig. 3 Mutual mode of HPLC fingerprints of Gentiana rigesiens
Franch
6 － swertiamarin;7 － gentiopicroside;8 － sweroside
图 4 滇龙胆根中龙胆苦苷、獐牙菜苦苷、獐牙菜苷总含量
的聚类树状图
Fig. 4 Cluster tree total content of gentiopicroside and swer-
tiamarin and sweroside in the roots of Gentiana rigesiens
Franch．
3. 4 指纹图谱的主成分分析
参照文献［10］的方法，将滇龙胆 11 个居群
HPLC 图谱各共有峰的峰面积相对药材称样量之
比，即单位质量药材峰面积进行量化，得到 11 × 11
阶的数据矩阵，应用 SPSS17. 0 统计分析软件对其进
行主成分分析。以特征值大于 1 为提取标准，得到
3 个主成分，累积贡献率达到 83. 96%。其中，第一
主成分λ = 5. 98，方差贡献率为 54. 37%，贡献率最
大，包含的信息最多。第二主成分 λ = 2. 00，方差贡
献率为 18. 22%。第三主成分 λ = 1. 25，方差贡献率
为 11. 37%。3 个主成分得分图见图 5。从图 5 可
见，11 个主成分被分为 3 组结果显示，第Ⅰ组的 8
个成分好于第Ⅲ组的 2 个(成分 5 和成分 10)及第
Ⅲ组的一个(成分 9) ，主成分得分系数矩阵，
见表 5。
图 5 不同居群间滇龙胆根中主成分得分图
Fig. 5 PCA scores of Gentiana rigesiens Franch. roots from dif-
ferent populations
表 5 不同居群间滇龙胆根中主成分得分系数矩阵
Tab. 5 Score coefficient matrix of principal components of dif-
ferent Gentiana rigesiens Franch. populations
Peak No.
Component
1 2 3
1 0. 143 0. 087 － 0. 140
2 0. 110 － 0. 040 － 0. 439
3 0. 134 0. 023 0. 363
4 0. 148 － 0. 022 0. 040
5 0. 015 0. 466 0. 239
6 0. 164 0. 043 － 0. 081
7 0. 162 0. 014 0. 023
8 0. 132 － 0. 016 － 0. 015
9 0. 030 － 0. 173 0. 623
10 － 0. 024 0. 489 － 0. 027
11 0. 151 － 0. 032 0. 011
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中国药学杂志 2014 年 3 月第 49 卷第 5 期 Chin Pharm J，2014 March，Vol. 49 No. 5
将 SPSS软件给出的主成分得分系数前面乘以
主成分相对应的特征值平方根，便得到 2 个主成分
中每个指标所对应的系数，表达式如下:
prin1 = 0. 853X1 + 0. 656X2 + 0. 800X3 + 0. 887X4 +
0. 089X5 + 0. 979X6 + 0. 971X7 + 0. 787X8 + 0. 182X9 －
0. 146X10 +0. 903X11
prin2 = 0. 174X1 － 0. 081X2 + 0. 045X3 － 0. 044X4 +
0. 933X5 + 0. 086X6 + 0. 029X7 － 0. 032X8 － 0. 347X9 +
0. 979X10 －0. 063X11
prin3 = － 0. 175X1 － 0. 549X2 + 0. 455X3 + 0. 050
X4 + 0. 299X5 － 0. 101X6 + 0. 029X7 － 0. 018X8 + 0. 780
X9 －0. 033X10 +0. 014X11
3 个主成分中，第一主成分贡献最大，而第一主
成分中系数最大的为 X6，从图 4 中可知，峰 6 为獐
牙菜苦苷，说明獐牙菜苦苷的量在滇龙胆的质量控
制中起着较重要的作用。
4 讨 论
本实验从活性成分含量测定和 HPLC 指纹图谱
技术方面同时对大理州滇龙胆不同居群间品质及质
量等同性进行评价。结果表明，大理州滇龙胆不同
居群间根中龙胆苦苷含量整体较高，含量相对较低
的巍山居群中龙胆苦苷含量也是国家标准的 2 倍
多［2］，虽然《中国药典》2010 年版对滇龙胆根中獐芽
菜苦苷、獐芽菜苷含量未作具体要求，但是，滇龙胆
的功效与獐芽菜苦苷、獐芽菜苷等环烯醚萜类物质
紧密相关［11］，大理州滇龙胆不同居群间獐芽菜苦
苷、獐芽菜苷含量高于沈涛等［12］报道的(0. 135 ±
0. 033)%和(0. 053 ± 0. 028)%。我们以龙胆苦苷
含量超过国家标准［2］的 4 倍作为优质种质资源的居
群，由表 4 可以看出南涧、剑川、鹤庆居群为优质种
质资源居群;若兼顾獐牙菜苦苷、獐牙菜含量，则剑
川、鹤庆为优质种质资源居群。用“中药色谱指纹
图谱相似度评价系统 2004A 版”对滇龙胆 11 个居
群间 HPLC指纹图谱共有模式进行分析，从 100 多
个色谱峰中确定 11 个共有峰，指认了共有模式中的
龙胆苦苷、獐牙菜苦苷和獐牙菜苷 3 个与活性相关
的化合物为特征峰，比李莎等［13］确定坚龙胆中 7 个
共有峰、指认了共有模式中的龙胆苦苷 1 个化合物
为特征峰的质量控制标准多 2 个指标性成分和 3 个
共有峰。
滇龙胆 11 个居群间根中龙胆苦苷、獐牙菜苦
苷、獐牙菜苷总含量聚类分析和 11 个共有峰主成分
分析结果基本一致，为从活性成分和“活性物质群”
角度对滇龙胆野生资源分类提供依据;对滇龙胆 11
个居群间指纹图谱相似度进行分析表明，11 个居群
间指纹图谱相似度均在 0. 988 以上，说明不同居群
指纹图谱相似性较好，为来源于大理的滇龙胆药材
“道地性”提供重要依据。但是，从龙胆苦苷、獐牙
菜苦苷、獐牙菜苷含量方差分析表明，不同居群根中
龙胆苦苷、獐芽菜苦苷、獐芽菜苷含量达到显著或极
显著水平，说明野生滇龙胆中存在龙胆苦苷、獐芽菜
苦苷、獐芽菜苷含量较高的优质种质资源。因此，只
有从活性成分含量测定和 HPLC指纹图谱技术 2 方
面才能更好地对滇龙胆品质及质量等同性进行评
价，为滇龙胆野生优质种质资源筛选、收集、保存、规
范化种植及质量控制提供依据。
ＲEFEＲENCES
［1］ The flora republicae popularis sinicae committee of Chinese acad-
emy of sciences． Flora Ｒepublicae Popularis Sinicae(FＲPS) (中
国植物志) ［M］． Vol 62. Beijing:Science Press，1988:100.
［2］ Ch. P(2010)VolI(中国药典2010年版 . 一部)［S］. 2010:89.
［3］ KONDO Y，TAKANO F，HOJO H. Suppression of chemically
and immunologically induced hepatic injuries by gentiopicroside
in mice［J］． Planta Med，1994，60:414.
［4］ PINTO M M M，SOUSA M E，NASCIMENTO M S J. Xanthone
derivatives:New insights in biological activities［J］． Curr Med
Chem，2005，12:2517-2538.
［5］ GAO L J，XIANG L，LUO Y，et al. Gentisides C-K:Nine new
neuritogenic compounds from the traditional Chinese medicine
Gentiana rigescens Franch. ［J］． Bio Med Chem，2010，18:
6995-7000.
［6］ ANONYMOUS. Natural product research;Ｒesearch on natural prod-
uct research discussed by scientists at harbin medical university［J］．
China Weekly News(中国新闻周刊)，2011，16:60-65.
［7］ SHIN M H，SUH H W，LEE K B，et al. Gentiana scabra ex-
tracts stimulate glucagon-like peptide-1 secretion via G protein-
coupled receptor pathway［J］． Bio Chip，2012，6(2) :114-119.
［8］ LI Z M，LIU L，LI W Y，et al. Progress in research and devel-
opment of medicinal resources of Gentiana rigescens Franch［J］．
J Yunnan Univ(云南大学学报) ，2009，31(S1) :485-487.
［9］ WANG Y，BAO J K，JIN Y，et al. Comparative study on mutual
pattern of HPLC fingerprints of rodgersia pinnata hemsl and rodg-
ersia sambucifolia hemsl［J］． Chin Pharm J(中国药学杂志) ，
2012，47(2) :98-101.
［10］ ZHOU G F，LV G Y. Study on HPLC fingerprints of flavone C-
glycosides in Dendrobium officinale leaves and determination of
index component［J］． Chin Pharm J(中国药学杂志) ，2012，
47(11) :889-893.
［11］ SHEN T，YANG M Q，ZHAO Z L，et al. Dynamic changes in
terpenoid contents in Gentiana rigescens［J］． Chin Bull Bot(植物
学报) ，2011，46(8) :652-657.
［12］ SHEN T，JIN H，WAGN Y Z，et al. Secoiridoids contents in
different parts of Gentiana rigescens［J］． Acta Bot Boreal Occident
Sin(西北植物学报) ，2011，31(9) :1886-1890.
［13］ LI S，HAI S，XUE C J，et al. HPLC Characteristic spectrum of
geoherbalism Gentiana rigescens Franch. from Guizhou［J］． J
Chin Med Mater(中药材) ，2011，34(1) :56-58.
(收稿日期:2013-10-16)
·814· Chin Pharm J，2014 March，Vol. 49 No. 5 中国药学杂志 2014 年 3 月第 49 卷第 5 期