全 文 ：of Seven Main Triterpenoid Saponins in Radix et Rhizoma Clema-
tidis by LC-ELSD［J］． Chromatographia，2009，69(3) :437-442．
［4］ 杨 蕊，苏乐群，黄 欣． 微乳在药剂学中的研究进展及应用
［J］． 中国医院药学杂志，2007，27 (8) :1141-1144．
［5］ 陆 彬，张正全． 用三角相图法研究药用微乳的形成条件
［J］． 药学学报，2001，36 (1) :58-62．
［6］ Gauldie S D，McQueen D S，Clarke C J． et al． A robust model of
adjuvant-induced chronic unilateRAl arthritis in two mouse strains
［J］． J Neurosci Methods，2004，139:281-291．
［7］ 郑召岭，商 玮，赵智明，等． 甲氨蝶呤对佐剂性关节炎大鼠
免疫器官重量的影响［J］． 徐州医学院学报，2009，29 (1) :
29-30．
［8］ Chillingworth N L，Donaldson L F． Characterisation of a Freund＇s
complete adjuvant-induced model of chronic arthritis in mice［J］．
J Neurosci Methods，2003，128:45-52．
［9］ 鲁 莹，蒋雪涛，曾仁杰． 卵磷脂微乳的制备与理化性质考察
［J］． 药学学报，2000，35 (1) :52 ～ 55．
［10］ 柳大烈，潘 葵，王渭滨． 盐酸罂粟碱 2 卵磷脂微乳的制备与
透皮吸收［J］． 医药导报，2007，26(12) :1482-1485．
［11］ 韩 旻，傅 韶，方晓玲． 三七总皂苷油包水微乳的处方筛选
及体内外评价［J］． 药学学报，2007，42 (7) :780 -786．
［12］ Corswant C V，Engstrom S，Soderman O． Microemulsions based
on soybean phosphatidylcholine and triglycerids． Phase behavior
and microstructure［J］． Langmuir，1997，13:061-5070．
［13］ 张源潮，孙红胜，潘正论，等． 白芍总苷在风湿免疫病中的研
究进展［J］． 世界临床药物，2010，31(8) :449-453．
大孔吸附树脂富集纯化竹节参总皂苷工艺条件优选
欧阳丽娜1，2， 吴 雪1，3， 李兰林1， 孙晓博1， 向大雄1*
(1．中南大学湘雅二医院天然药物研究室，湖南 长沙 410011;2． 岳阳市一人民医院药剂科，湖南 岳阳
414000;3．北京市积水潭医院，北京，100035)
收稿日期:2010-09-17
基金项目:湖南省中医药科研计划项目(2009062)
作者简介:欧阳丽娜(1984—) ，女，主要从事药物新资源及新课型的开发。Tel:(0731)5292093，E-mail:ouyanglina410@ 126． com
* 通信作者:向大雄，Tel:(0731)5292093，E-mail:xiangdaxiong@ 163． com
摘要:目的 研究大孔吸附树脂富集纯化竹节参中总皂苷的工艺条件及参数。方法 以竹节参总皂苷的吸附量和洗脱
率为指标，筛选大孔吸附树脂，并研究所选树脂富集纯化竹节参总皂苷的吸附和洗脱条件。结果 D101 树脂对竹节参
总皂苷有较好的吸附分离性能。最佳工艺条件为上样质量浓度为 0． 2 g生药 /mL，以 3BV 70%乙醇溶液洗脱，吸附及洗
脱体积流量均为 1 mL /min，洗脱液蒸干，即得纯化的竹节参总皂苷提取物。纯化后竹节参总皂苷质量分数为 82． 53%，
精制度达 338． 81%。结论 D101 大孔吸附树脂富集纯化竹节参中总皂苷是可行的。
关键词:竹节参;总皂苷;大孔吸附树脂;纯化
中图分类号:R284． 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)07-1163-06
Separation and purification of total saponin from Panacis japonici Rhizoma by
macroporous resins
OUYANG Li-na， WU Xue， LI Lan-lin， SUN Xiao-bo， XIANG Da-xiong*
(1． The Second Xiangya Hospital of Central Sounth University，Changsha 410011，China;2． The First People Hospital of Yueyang City，Yueyang 414000，
China;3． Beijing Jishuitan Hospital，Beijing 100035，China)
KEY WORDS:Panacis Japonici Rhizoma;total saponin;macroporous resins;purification
竹节参 Panacis japonici Rhizoma 为五加科 Arali-
aceae植物竹节参 Panax japonicus C． A． Mey．的干燥
呈竹鞭状根茎，广泛分布于日本及中国西南至中部
地区［1］。其性温、味甘、微苦，具有滋补强壮、散瘀
止痛、止血祛痰等功效［2］，兼具我国北药人参和南
药三七的功用，享有“土家族神参”的美誉。现代药
理学研究表明，竹节参中研究最多、功效最显著的为
皂苷类化合物，具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤以及降血
3611
2011 年 7 月
第 33 卷 第 7 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
July 2011
Vol． 33 No． 7
糖等药理活性［3-6］，因此，加强对其开发与利用具有
十分重要的现实意义。
大孔吸附树脂(Macro Absorption Resin)为一种
选择性有机高聚吸附剂，具有吸附快、解吸快、吸附
容量大、易于再生、使用寿命长等优点。近年来已广
泛应用于天然产物的分离与富集，尤其适用于水溶
性化合物，如皂苷、黄酮及生物碱等的分离与富集，
但在竹节参总皂苷(Total saponins of Panax japonicus
C． A． Mey． ，TsPJ)纯化工艺方面尚未见报道。本实
验旨在探讨大孔吸附树脂富集、纯化竹节参总皂苷
的工艺条件和参数，从而确立富集、纯化竹节参总皂
苷的可行方法，为其开发应用提供实验依据。
1 材料及仪器
竹节参药材(购于湖北恩施圣丰药业) ;人参皂
苷 Re对照品(购自中国药品生物制品检定所，批号
为 754-9204) ;乙醇、香草醛、高氯酸、冰醋酸均为分
析纯，水为双蒸水。
HPD-100 型大孔树脂购自沧州宝恩大孔树脂有
限公司;D101、AB-8、LX-68 型大孔树脂购自西安蓝
晓科技有限公司;S-8 型大孔树脂购自南开和成科
技有限公司。
SPECORD50 型紫外-可见分光光度计(德国耶
拿分析仪器股份公司) ，恒温水浴锅(上海医疗器械
五厂) ，分析天平(METTLER 公司) ，RE52-98 旋转
蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂) ，NJL07-3 型微波提
取器(南京杰全微波设备有限公司) ，YB-Z 真空恒
温干燥箱(天津药典标准仪器厂)。
2 方法与结果
2． 1 竹节参总皂苷的测定
2． 1． 1 标准曲线的绘制［7-8］
精密称定人参皂苷 Re 对照品 4． 59 mg，加甲醇
溶解，定容至 5 mL，得 0． 918 mg /mL的对照品溶液。
用 20 ～ 200 μL 可调微量取样器吸取制备好的
人参皂苷 Re 标准溶液 40、80、120、160、200 μL 于
10 mL具塞试管中，70 ℃水浴蒸干，于每个试管中
加新配制的 5%香草醛-冰醋酸溶液 0． 2 mL，高氯酸
0． 8 mL，摇匀，置 60 ℃水浴上加热 15 min，流水冷
却，准确加入冰醋酸 5 mL，摇匀，以分光光度计在
552 nm波长测定吸光度值(A)。以吸光度值(X)为
横坐标，以人参皂苷 Re 的量(Y)为纵坐标，绘制标
准曲线，得回归方程 Y = 0． 272 3X + 0． 001 6，相关系
数 R2 = 0． 999 3，表明人参皂苷 Re 在 55． 08 ～
219． 44 μg与吸光度的线性关系良好。
2． 1． 2 样品液的制备与总皂苷的测定
取竹节参药材粉末 1 000 g，预先浸渍 12 h，以
80 %乙醇为提取溶剂，料液比为 1 ∶ 18，功率为 300
W提取 4 次，每次 5 min，趁热过滤，合并提取液，回
收乙醇。向提取液中加入适量活性炭，使其浓度达
到 1 %左右，加热并保持 75 ℃，磁力搅拌 30 min 进
行脱色处理，趁热过滤，将滤液用蒸馏水定容至
5 000 mL作为储备上样液(0． 2 g 生药 /mL) ，放置
冰箱冷藏。
精密吸取竹节参样品液 5 mL，用水饱和正丁醇
萃取 3 次，每次 5 mL，合并正丁醇层，水浴挥干，甲
醇溶解并定容至 50 mL，精密吸取上述溶液 50 μL，
按 2． 1． 1 项下操作，测定吸收值，计算总皂苷量，结
果平均为 24． 32 mg /mL，RSD为 2． 54% (n = 6)。
2． 2 大孔树脂型号选择
取预处理好的湿树脂抽滤，除去水分后，精确称
取 5． 00 g，置于具塞三角瓶中，准确加入用贮备液稀
释所得竹节参总皂苷样品溶液(0． 1 g 生药 /mL)50
mL，室温放置，每隔 10 min振摇 1 次，持续 4 h，使树
脂充分吸附 TsPJ，过滤，测定滤液中 TsPJ浓度，计算
各种树脂的静态饱和吸附量。同时将吸附饱和的树
脂滤除水分，放入具塞三角瓶中，准确加入 50 mL
95% 的乙醇，室温放置，每隔 10 min振摇 1 次，持续
4 h，使 TsPJ充分解析，过滤，测定滤液中 TsPJ浓度，
并计算各种树脂的静态解析率，结果见表 1。
虽然 S-8 型大孔树脂静态吸附量较 D101 型大
孔树脂大，但解析率却不及后者;相比于其它类型大
孔吸附树脂，D101 树脂对 TsPJ 有着相对较高静态
吸附量和静态解析率，故选择 D101 大孔树脂进行
动态吸附-洗脱性能的研究。
表 1 不同树脂静态吸附量和解析率的比较
Tab． 1 Adsorption and desorption of iridoid with different
marcroporous resin
树脂型号 静态吸附量 Qe /(mg /g树脂)静态解析率 D /%
D101 60． 56 97． 71
HPD-100 53． 89 96． 36
AB-8 54． 09 95． 69
S-8 61． 38 45． 31
LX-68 26． 39 89． 87
2． 3 D101 型大孔吸附树脂对 TsPJ 动态吸附洗脱
参数考察
2． 3． 1 上样液质量浓度对吸附的影响
精确称取 20． 00 g 已处理好的树脂装柱，径高
比约 1 ∶ 10。分别配制一系列不同质量浓度的竹节
参总皂苷样品溶液，将之以不同的体积分别加到树
4611
2011 年 7 月
第 33 卷 第 7 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
July 2011
Vol． 33 No． 7
脂柱中，收集过柱残液和水洗液，测定其中皂苷的
量，计算比吸附量，结果见表 2，确定最佳上样质量
浓度为 0． 2 g生药 /mL。
表 2 上样液质量浓度对比吸附量的影响 (n =3)
Tab． 2 The effect of concentration of feed on adsorption
amount
上样液
/(g生药 /mL)
上样体积
/mL
过柱液总皂苷
/(mg /mL)
水洗液总皂苷
/(mg /mL)
比吸附量
/(mg /g)
0． 1 100 1． 01 0． 36 53． 89
0． 2 50 0． 95 0． 35 54． 32
0． 3 33． 3 1． 22 0． 33 52． 80
0． 4 25 1． 58 0． 35 51． 09
2． 3． 2 吸附流量对吸附容量的影响
精确称取 20． 00 g 已处理好的树脂装柱，径高
比约 1 ∶ 10。分别控制不同上样流量，收集过柱残
液和水洗液，并测定其中皂苷的量，计算比吸附量，
结果见表 3。确定样液的最佳吸附流速为 1 mL /
min。
表 3 吸附流量对比吸附量的影响 (n =3)
Tab． 3 The effect of feed rate on adsorption amount
(n =3)
吸附流量
/(mL /min)
过柱液总皂苷
/(mg /mL)
水洗液总皂苷
/(mg /mL)
比吸附量
/(mg /g)
0． 5 1． 17 0． 36 56． 06
1． 0 0． 85 0． 35 56． 93
1． 5 1． 57 0． 33 55． 19
2． 0 3． 02 0． 34 51． 51
2． 5 3． 47 0． 36 50． 33
2． 3． 3 上样液 pH值对吸附的影响
精确称取 20． 00 g 已处理好的树脂装柱，径高
比约 1 ∶ 10。上样液的 pH 值分别调为 4、5、6、7、8，
收集过柱残液和水洗液，测定其中皂苷的质量浓度，
计算比吸附量，结果见表 4。三萜皂苷作为一种弱
酸性化合物，在弱酸性溶液中以分子形式存在，有利
于树脂的吸附。因此上样液的 pH 值宜控制在 6 左
右。
表 4 上样液 pH值对比吸附量的影响 (n =3)
Tab． 4 The effect of feed pH value on adsorption amount
(n =3)
上样液
pH值
过柱液总皂苷
/(mg /mL)
水洗液总皂苷
/(mg /mL)
比吸附量
/(mg /g)
4 2． 40 0． 36 52． 98
5 1． 31 0． 34 55． 78
6 1． 03 0． 33 56． 55
7 1． 23 0． 35 55． 93
8 1． 37 0． 35 55． 57
2． 3． 4 泄漏曲线的考察
精密吸取 250 mL 上样液进行上柱。分段收集
流出液，每 25 mL收集，收集 10 份。测定过柱液中
皂苷质量浓度，结果见图 1。
图 1 泄漏曲线的考察
Fig． 1 The leak of sample
从图中可知，当过柱液体积增加到 50 mL 时，
D101 大孔吸附树脂对 TsPJ 的吸附逐渐趋于饱和，
TsPJ开始明显泄漏。故认为样液的最佳上样体积
不超过 50 mL，即上样比不超过 60． 79 mg /g树脂。
2． 3． 5 洗脱溶媒的选择
根据已确定的最佳动态吸附条件，吸取样液上
柱。预吸附 1h，然后用水洗除糖等杂质至 Molish 反
应呈阴性，然后分别用蒸馏水、30%乙醇、50%乙醇、
70%乙醇、95%乙醇各 5BV 上柱洗脱，流量控制为
1． 0 mL /min，蒸馏水每管收集 50 mL，乙醇每管收集
30 mL(即 1BV) ，分别测定 TsPJ水平，并绘制洗脱曲
线如图 2。
从图中洗脱曲线所示可知，TsPJ 主要集中在
50%和 70%的乙醇洗脱液中，占全部乙醇洗脱液中
总皂苷的 80． 61%，继续加入 95%乙醇进行洗脱，洗
脱液总皂苷量无明显变化。此外，综合考虑生产成
本、洗脱效率即真空浓缩工艺等，选择 70%乙醇为
洗脱溶媒更为合适。故在洗脱过程中，先用蒸馏水
洗去水溶性杂质，再用 70%乙醇对 TsPJ进行洗脱。
图 2 D101 大孔树脂洗脱曲线
Fig． 2 The elution curve of D101 macroporous resin
试管编号:1-3．蒸馏水洗脱液 4-8． 30%乙醇洗脱液 9-13． 50%乙
醇洗脱液 14-18． 70%乙醇洗脱液 19-23． 95%乙醇洗脱液
5611
2011 年 7 月
第 33 卷 第 7 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
July 2011
Vol． 33 No． 7
2． 3． 6 洗脱溶媒用量的考察
根据以上实验选定的吸附条件和洗脱溶媒，上
样吸附后进行洗脱。蒸馏水用量分别选择 5BV(条
件 l)、4BV(条件 2)、3BV(条件 3) ，洗脱溶媒 5BV，
依次洗脱，并将体积流量控制在 1． 0 mL /min。分段
收集洗脱液，测定其总皂苷。前 3BV 乙醇洗脱液水
浴挥干并置于烘箱恒质量，计算总固物质量和总皂
苷，结果见表 5。
表 5 D101大孔树脂不同条件洗脱参数考察
Tab． 5 The elution paraments of D101 macroporous resin on the differente conditions
项目
条件 1
洗脱量 /mg 洗脱率 /%
条件 2
洗脱量 /mg 洗脱率 /%
条件 3
洗脱量 /mg 洗脱率 /%
蒸馏水洗脱液 37． 57 3． 56 37． 29 3． 54 36． 20 3． 47
70%乙醇 3BV 922． 82 87． 55 918． 65 87． 16 934． 47 88． 86
洗脱液 1BV 43． 30 4． 11 38． 65 3． 67 33． 91 3． 22
1BV 12． 96 1． 23 13． 40 1． 27 11． 04 1． 05
总固物 /mg 108． 94 107． 32 109． 52
总固物中 TsPJ量 /% 80． 37 81． 21 80． 95
3 种洗脱条件所得总固物量接近，且总皂苷量
均在 80 %左右，从成本和节能考虑选择 3BV 蒸馏
水洗去杂质。用 70 %乙醇洗脱 TsPJ 时，前 3BV 洗
脱率将近 90 %，而后 2BV洗脱率不到 6 %，并且各
不同条件下洗脱所得总固物和总皂苷无明显差异，
故选择 3BV 70 %乙醇为洗脱溶媒。
2． 3． 7 正交实验优选大孔吸附树脂纯化工艺参数
以单因素实验的结果为参考，选取影响效果较
大的径高比、洗脱流量、洗脱溶剂用量进行 L9(3
4)
正交实验，并采用 TsPJ转移率和纯度为指标进行综
合评分，优选纯化条件。实验水平表及分析结果分
别见表 6、表 7 和表 8。
表 6 正交实验因素水平
Tab． 6 Factors and levels orthogonal test
水平 A 径高比
B体积流量
/(mL /min)
C洗脱溶剂
用量 /BV
D误差项
1 1 ∶ 5 0． 5 3
2 1 ∶ 8 1 4
3 1 ∶ 10 1． 5 5
由表 7 的极差可知，各因素对 TsPJ 转移率影响
大小顺序为 C(洗脱溶剂用量)＞ A(径高比)＞ B
(体积流量)。表 8 的方差分析表明，径高比、流量
均对 TsPJ的纯化过程具有显著影响，洗脱溶剂用量
具有极显著影响。从实验结果来看，大孔吸附树脂
纯化 TsPJ的最佳工艺条件为 A3B2C1，即:径高比为
1 ∶ 10，体积流量为 1． 0 mL /min，洗脱溶剂用量为
3BV。
2． 3． 8 工艺重复验证实验
为考察 TsPJ的纯化率和精制度，根据单因素和
正交实验结果，按最佳吸附和洗脱条件进行验证，平
表 7 L9(3
4)正交实验设计方案及结果 (n =3)
Tab． 7 L9(3
4)orthogonal test and results
实验号 A B C D
TsPJ
纯度
TsPJ
转移率
综合
评分
1 1 1 1 1 62． 35 68． 95 76． 62
2 1 2 2 2 54． 98 57． 96 65． 95
3 1 3 3 3 46． 03 38． 13 49． 34
4 2 1 2 3 43． 87 45． 83 52． 39
5 2 2 3 1 47． 43 48． 26 55． 91
6 2 3 1 2 60． 97 68． 86 75． 73
7 3 1 3 2 50． 02 56． 97 62． 40
8 3 2 1 3 82． 90 88． 37 100． 00
9 3 3 2 1 65． 02 64． 76 75． 86
K1 191． 91 191． 41 252． 35 208． 39
K2 184． 03 221． 87 194． 20 204． 09
K3 238． 26 200． 93 167． 65 201． 73
R 18． 08 10． 15 28． 23 2． 22
注［9］:综合评分 = (纯度 /纯度考察结果最大者)× 100 × 权重
(50%)+(转移率 /转移率考察结果最大者)× 100 ×权重(50%)
表 8 方差分析
Tab． 8 Variance analysis
方差来源 离差平方和 自由度 均方 F值 P值
A 572． 32 2． 00 286． 16 75． 26 ＜ 0． 05
B 161． 88 2． 00 80． 94 21． 29 ＜ 0． 05
C 1251． 20 2． 00 625． 60 164． 54 ＜ 0． 01
D 误差 7． 60 2． 00 3． 80
注:F0． 05(2，2)= 19，F0． 01(2，2)= 99
行 3 份，结果见表 9。由表 9 可知，纯化后 TsPJ占总
固物的 82． 53%，精制度达到 338． 81%，转移率达到
88． 02%。表明用 D101 大孔吸附树脂纯化 TsPJ 的
工艺较为稳定可靠，且纯化效果较好。
2． 3． 9 树脂重复使用周期的考察
取新的 D101 大孔吸附树脂柱 3 根，根据已确
定的最佳吸附及洗脱条件，在同一根树脂柱上反复
6611
2011 年 7 月
第 33 卷 第 7 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
July 2011
Vol． 33 No． 7
表 9 工艺参数验证实验结果
Tab． 9 The experiment of technique validation
实验编号 纯度 /% 转移率 /% 精制度 /%
1 81． 79 87． 25 335． 76
2 82． 65 88． 15 339． 29
3 83． 16 88． 66 341． 38
平均值 82． 53 88． 02 338． 81
RSD /% 0． 84 0． 81 0． 84
进行吸附和洗脱实验，结果见表 10。
表 10 D101 大孔吸附树脂的重复使用周期考察 (n =3)
Tab． 10 The review of reusing cycles D101 macroporous
resin (n =3)
树脂循环
使用次数
过柱液总皂苷
/(mg /mL)
水洗液总皂苷
/(mg /mL)
比吸附量
/(mg /g)
1 1． 17 0． 34 56． 18
2 1． 35 0． 35 55． 72
3 1． 61 0． 35 55． 06
4 2． 10 0． 37 53． 84
结果表明，新的 D101 型大孔吸附树脂的比吸
附量与用过 1 次、2 次、3 次后的比吸附量差别不大，
但是树脂重复使用 4 次后，吸附性能较之新树脂有
所下降，可能与其上样时容易出现结板和气泡有关。
实验中，新树脂使用后颜色变深，用 95%的乙醇浸
泡 24h以上，用乙醇和蒸馏水反复洗脱后颜色会变
浅，说明其再生利用的效果较好。
3 讨论
皂苷是一类相对分子质量较大、极性较大的苷
类化合物，药材中共存的鞣质及糖类等成分的影响
使得皂苷类成分难以分离提纯。大孔树脂作为一类
新型非离子型高分子化合物，近年来已广泛应用于
天然药物有效部位的分离与纯化。D101、HPD100、
LX-68 及 AB-8 均为球形非极性或弱极性聚合物多
孔吸附剂，对皂苷类成分有特殊的选择性，适合从水
溶液中提取皂苷类成分;而 S-8 虽然是苯乙烯型极
性共聚体，也作为考察指标之一进行综合评价。实
验结果标明，相比于其它类型大孔吸附树脂，D101
树脂对 TsPJ有着相对较高静态吸附量和静态解析
率。
而到目前为止，我国仍然没有一套由权威机构
制订的使用考察方案，各个使用单位在树脂考察方
面也是不尽相同。本实验根据大孔树脂的吸附、洗
脱两个特点，以提取液上样浓度、上样液 pH 值、上
样量、上样体积流量、洗脱体积流量、洗脱溶剂选择
及用量等为主要考察项目，逐一进行单因素考察，然
后再参照单因素考察结果，将未列入单因素考察项
目的树脂柱径高比和单因素实验中影响较大的体积
流量、洗脱溶剂用量进行正交实验设计，最后将考察
结果列入树脂纯化工艺参数，比较全面地制订了一
套比较实用的树脂工艺考察方案。并确立了 D101
型大孔树脂分离 TsPJ 的纯化工艺:上样浓度 0． 2 g
生药 /mL，pH值 6，径高比为 1 ∶ 10，以 3BV 70%乙
醇溶液洗脱，吸附及洗脱体积流量均为 1 mL /min。
研究结果表明，未纯化前总固物中总皂苷的质量分
数为 24． 36%，纯化后总固物中的 TsPJ 质量分数为
82． 53%，精制度达 338． 81%，且转移率达 88． 02%。
从精制度、转移率等方面考虑，该工艺适宜于 TsPJ
的分离及纯化。
层析柱的粗细会影响分离效果，当柱子太细，洗
脱时，树脂易结块，壁上易产生气泡，体积流量会逐
渐降为零，因此不能选择过细的柱子，避免造成较大
误差。而较小的树脂粒径和较低的树脂高度有利于
增大吸附速度，但同时也使单柱的吸附量有所降低，
所以树脂柱最佳径高比一般选择在 1 ∶ 7 ～ 1 ∶ 10 范
围内。
吸附过程为一放热过程，故还应考虑上样液的
温度，有文献报道，低温有利于提高中药成分的比上
柱量［10］，建议在上样前将样品液冷藏处理。提取液
在上柱前，必须进行抽滤或离心等预处理以除去沉
淀和杂质，上样液越澄清，所得产物的纯度越高，亦
能提高树脂的使用寿命，通过预实验考察可知用活
性碳进行脱色处理后的样品液通过树脂柱后所得产
物纯度较未进行脱色处理时高，而且树脂再生更为
容易。
参考文献:
［1］ Zou K，Zhu Shu，Tohda C，et al． Dammarane-type triterpene sapo-
nins from Panax japonicus［J］． J Nat Prod，2002，65:346-351．
［2］ 林先明，谢玲玲，由金文，等． 竹节参名称及基原考［J］． 中药
材，2007，30(6) :742-743．
［3］ 左 锐，袁 丁． 竹节参化学成份与药理活性的研究进展
［J］．时珍国医国药，2005，16(9) :833-834．
［4］ 吴 瑕，陈东辉，雷 玲，等． 竹节人参抗炎镇痛作用研究
［J］．中药药理与临床，2007，23(1) :43-45．
［5］ 肖本见，谭志鑫，朱敏英，等．竹节人参对小鼠低氧 /复氧损伤
的保护作用［J］．中国公共卫生，2006，22(4) :473-473．
［6］ 袁 丁，左 锐，张长城．竹节参总皂苷抑制小鼠肿瘤生长的
实验研究［J］．时珍国医国药，2007，18(2) :277-278．
［7］ 袁 丁，何毓敏，鲁科明，等． 竹节参中总皂苷和三萜苷元齐
墩果酸的测定［J］．华西药学杂志，2008，23(6) :692-694．
［8］ 袁 丁，何毓敏，鲁科明，等． 中药竹节参中总皂苷和齐墩果
酸的含量测定［J］．西北药学杂志，2008，23(5) :278-280．
7611
2011 年 7 月
第 33 卷 第 7 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
July 2011
Vol． 33 No． 7
［9］ 魏 莉，周 浩．大孔吸附树脂分离纯化三七花蕾总皂苷的
研究［J］．中药材，2008，31(9) :1418-1421．
［10］ 周 萍，廖庆文，刘绍贵，等． 大孔树脂富集枸骨叶中总皂甙
的研究［J］．湖南中医杂志，2002，18(1) :51-52．
指纹图谱法优选诃子提取工艺的研究
刘雅敏1， 郭丹丹1， 杨 晋2， 张正伟3， 刘延泽1
(1．河南中医学院，河南 郑州 450008;2．北方民族大学化工学院，宁夏 银川 750021;3．洛阳市中心医院，河
南 洛阳 471000)
收稿日期:2010-08-31
基金项目:河南省科技攻关项目(524410076)
作者简介:刘雅敏(1960—) ，教授，研究方向:中药固体制剂技术。Tel:(0371)65575822，E-mail:lymll2001@ yahoo． com． cn
摘要:目的 优选诃子有效部位的提取工艺参数。方法 运用正交 L 8(2
7)实验，以各提取实验条件的 HPLC 指纹图谱
色谱峰面积的变化量和相似度为指标，考察提取工艺条件。结果 优化的诃子提取工艺参数为药材粒度 60 目、70%乙
醇、8 倍溶剂量、浸渍提取 3 次，每次 30 min。结论 指纹图谱技术可以作为工艺筛选过程中的有效评价手段。
关键词:诃子;提取工艺;指纹图谱
中图分类号:R944． 2 + 7 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)07-1168-04
诃子为使君子科榄仁属植物诃子 Terminalia
chebula Retz．及其变种绒毛诃子 Terminalia chebula
Retz． var． tomentella Kurt．的干燥成熟果实，具有涩
肠止泻、敛肺止咳、降火利咽、调和药性、解毒等功
效［1］。现代研究显示，诃子具有抗氧化、抗菌、抗病
毒、强心、抗诱变、抗癌、抗阿米巴原虫、抗动脉粥样
硬化以及强心作用等药理作用［2-3］，这些作用主要集
中于可水解丹宁类成分［4］。目前在诃子提取工艺
研究中，多采用总丹宁成分量作为工艺优选指标。
但这类成分化学稳定性差，总丹宁量变化不能全面
反映出工艺因素对药材中丹宁类成分的提取率以及
稳定性的影响，因而无法得出真正的最佳提取工艺
条件，也使制剂质量难以进行标准化控制。目前指
纹图谱被认为是能够较全面地反映药材提取物质量
变化的质控技术。故本实验以选定指纹图谱色谱峰
面积的变化量和相似度为指标，以诃子中的主要有
效成分和特征性成分诃子酸(chebulinic acid)［5］为
参照物，采用多指标综合评分法优选提取工艺参数，
为保证诃子提取物的质量，制备出诃子标准提取物
奠定了基础。
1 实验材料
1． 1 仪器 LC-2010A 高效液相色谱仪(日本岛
津) ;DiamonsilTM C18柱(4． 6 mm × 250 mm，5μ m) ;
工作站:CBM-102(日本岛津) ;检测器:SPD-20A(日
本岛津) ;中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件
(版本 2004A) (中国药典委员会推荐)。
1． 2 试剂 诃子酸对照品由刘延泽教授提供，经光
谱鉴定、HPLC 检测纯度在 95%以上;甲醇为色谱
纯，其它试剂均为分析纯。柱层析用吸附剂 Toyope-
arl HW-40(C)为日本 Tosoh公司产品。
1． 3 药材 诃子，产地云南，由陈随清教授鉴定为
使君子科植物诃子 Terninalia chebula Retz．。
2 实验方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱为 DiamonsilTM C18柱(4． 6
mm ×250 mm，5 μm) ;流动相采用线性梯度洗脱，A
相为甲醇，B相为 0． 5%的冰醋酸水溶液，体积流量
1． 0 mL /min，SPD-20A检测器，柱温 30 ℃，波长 254
nm，分析时间 60 min。线性梯度洗脱程序见表 1。
表 1 线性梯度洗脱程序
梯度时间 /min A甲醇 /% B 0． 5%冰醋酸水溶液 /%
0 5 95
10 20 80
40 40 60
45 50 50
50 5 95
60 5 95
2． 2 提取因素水平的确定 用浸渍法进行提取。
实验因素水平见表 2。
2． 3 正交实验方案设计 采用正交实验表 L8(2
7)
设计实验方案。
2． 4 提取液的制备［5］ 称取诃子粗粉 8 份，每份
10 g，精密称定，分别按照2． 3项条件提取，过滤，合
8611
2011 年 7 月
第 33 卷 第 7 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
July 2011
Vol． 33 No． 7