全 文 ：卷柏属 7种药用植物的提取物抑制
黄嘌呤氧化酶的活性研究
黎　莉1, 2 ,陈科力 1 ,朱田密 1 ,范小磊 1
(1.湖北中医学院药学院 ,湖北武汉 430061;2.武汉工程大学化工与制药学院 ,湖北武汉 430073)
　　摘要　目的:研究并比较卷柏属 7种药用植物的 28种提取物在体外对黄嘌呤氧化酶的抑制活性。方法:用带
有酶动力学分析软件的紫外分光光度计 ,测定 28种提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制活性 , 波长 290 nm、黄嘌呤氧化
酶 8.32×10-3U/ml, 黄嘌呤 0.05 mmol/L, 反应时间为 1 min。结果:卷柏属 7种药用植物的乙酸乙酯提取物和 95%
乙醇提取物对黄嘌呤氧化酶显示出一定的抑制活性。结论:乙酸乙酯提取物和 95%乙醇提取物是卷柏属药用植物
抑制黄嘌呤氧化酶活性部分 ,可进一步分离纯化得到有效化合物。
关键词　卷柏属;黄嘌呤氧化酶;动力学分光光度法
中图分类号:R285　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)04-0445-03
基金项目:国家自然科学基金项目(30470193)＊通讯作者:陈科力 ,教授 ,博士生导师。 Tel:(027)62326589, E-mail:kelichen@ 126.com。
　　据调查 ,湖北省卷柏科卷柏属(Selaginela)药用
植物共有 14种 ,全草入药 ,多具有清热解毒 、舒筋活
络 、活血止血等作用 ,广泛用于治疗癌症 、病毒性肝
炎等多种疾病〔1〕。药理研究证实 ,卷柏属药用植物
具有广泛的药理活性 ,尤其在抗肿瘤 、抗病毒 、降血
糖 、抑菌与抗炎方面的功能较为显著 〔2〕。并且在该
属植物中已发现了具有抗肿瘤 、抗病毒作用的活性
成分〔3 ～ 5〕。
黄嘌呤氧化酶(XOD)能催化黄嘌呤和次黄嘌
呤的氧化生成尿酸 ,并产生过氧化物自由基 。尿酸
在人体内的过度积累可引起痛风 ,而自由基涉及到
炎症 、硬化 、癌症和衰老等病理过程〔6〕。因此 , XOD
抑制剂可以减少自由基造成的应激反应和对组织的
伤害 ,有望在临床上用于治疗痛风及过氧化物自由
基导致的疾病。
据我们的前期研究 ,已发现卷柏属一种植物的
提取物具有很强的抗氧化 、清除自由基的活性 〔7〕。
根据亲缘关系相近植物活性成分和功效类似的原
则 ,我们对分布于湖北省的 6种和产于江西庐山的
1种卷柏属药用植物的不同提取物 ,进行体外抑制
黄嘌呤氧化酶活性的实验研究 ,筛选有效部位 ,为进
一步分离纯化活性成分 、寻找新的黄嘌呤氧化酶抑
制剂 ,以及为卷柏属药用植物的开发利用提供实验
依据。
1 　材料
1.1 　植物材料　卷柏属 7种药用植物的实验材料
来源见表 1。这 7种材料的原植物均经中南民族大
学万定荣教授鉴定 ,药材标本留存于湖北中医学院
标本室 〔1〕。
　表 1 　卷柏属植物样品来源
编号 植物来源 采集时间和地点 穗花杉双黄酮含量 /%
2
薄叶卷柏 S.delicatut(Desv.)Alston. 2003.8 于湖 北恩施鹤峰 0.271
4
翠云草 S.uncinata(Desv.)Spring. 2004.8 于湖 北宜昌雾渡河 — ＊
6
垫状卷柏 S.pulvina-ta(Hook.etGrev.)Maxim.
2003.10于湖北宜昌雾渡河　 1.64
7
卷柏 S.tamariscina(Beauv.)Spring. 2003.8 于湖 北宜昌雾渡河 1.15
8 细叶卷柏 S.labordeiHieron.exChrist. 2003.7 于江 西庐山 0.295
9
疏叶卷柏 S.remoti-foliaSpring. 2004.8 于湖 北宜昌车溪 1.10
13 江南卷柏 S.moellen-dorfiHierom. 2004.8 于湖 北宜昌雾渡河 1.33
　　注:＊含量低于测定下限 ,没能测出
1.2　仪器和试剂　DU640分光光度计 (Beckman
Inc.USA),带有动力学 /时间软件 。黄嘌呤氧化酶
(Sigma, lot024K3783),黄嘌呤(Sigma, lot85H71952);
槲皮素(中国药品生物制品检定所 , 10081-9906);二
甲亚砜(Amresco),其余试剂均为分析纯 。
1.3　卷柏属植物材料的指纹特征和含量测定　为
了确定这些用于实验的卷柏属植物材料的化学属
性 ,对这些不同来源的植物材料进行了指纹特征分
析(研究论文另发)和穗花杉双黄酮的含量测定。
样品中穗花杉双黄酮的含量见表 1 ,含量测定方法
参照文献 〔8〕进行 。
·445·中藥材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 4期 2007年 4月
1.4 　植物提取物的制备　将采集的新鲜植物材料
晒干 ,去除杂质 ,粉碎成粗粉。分别称取各种材料
50.0g,依次用石油醚 、乙酸乙酯 、95%乙醇和水进
行提取 ,每种溶剂连续提取 3次 ,过滤 ,合并滤液 。
滤液用旋转蒸发器回收溶剂 ,干燥剩余物 ,分别得到
石油醚提取物 、乙酸乙酯提取物 、95%乙醇提取物和
水提取物。
2 　方法
2.1 　底物溶液　由 0.2mmol/L黄嘌呤溶液和 0.2
mol/L磷酸钾盐缓冲液(pH7.5,含 1 mmol/LED-
TA)组成。
2.2 　XOD活力测定　在黄嘌呤氧化酶的催化下 ,
底物黄嘌呤被氧化成尿酸 ,即发生下列反应:
Xanthine+O2 XODUricacid+O-2
XOD活力由检测产物尿酸的特征吸收峰(λ=
290nm)处的光度值确定。实验方法参照 Cos等 〔9〕
描述的方法 ,在 290 nm处用分光光度法测定 。每隔
5 s在 290 nm处记录吸光度及吸光度增长的数值 ,
共计 5min。在任意一个适当长的时间段内 ,吸光度
随时间呈线性增加 ,斜率为反应速率(dA/min),斜
率越大 ,说明酶的活力越强 。
2.3 　样品测定　把植物提取物溶解在二甲亚砜
(DMSO)中 ,得到不同浓度的样品溶液(DMSO最终
浓度 <1%)。取适量加到石英比色皿中。重复上
述操作 ,每隔 5sec在 290 nm处记录吸光度增长的
数值 ,共计 1 min。每个样品平行操作 3次 ,分别记
录反应速率 ,取平均值计算样品的抑制率 。
2.4　空白对照　重复上述操作 ,不加样品和 XOD,
但加与样品同样体积的 DMSO,记录吸光度的变化 ,
作为空白对照。
2.5 　XOD对照品测定　方法与样品测定相同 ,只
是不加样品 。
2.6 　阳性对照品　为了核对实验结果的可信性 ,
取槲皮素溶解在二甲亚砜中得到不同浓度的溶液 ,
重复上述实验 ,计算 IC50。
3 　结果
采用 SPSS13.0统计软件包进行数据处理 ,先
根据下列公式计算样品对 XOD的抑制率 .
抑制率 =[ 1-(Rs-Ro)/(Rp-Ro)] ×100%
式中 Rs、Ro、Rp分别表示样品 、空白对照和 XOD对照
品的反应速率。
　　再以抑制率为因变量 ,以样品浓度为自变量计
算回归方程 。因抑制率与样品浓度呈线性关系 ,故
直接根据回归方程计算抑制率为 50%的样品浓度
IC50。实验结果见表 2。
　表 2　　　　卷柏属药用植物提取物对黄嘌呤氧
化酶的抑制作用(IC50 /μg· ml-1)
品种 石油醚提取物 乙酸乙酯提取物 95%乙醇提取物 水提取物
薄叶卷柏 253.4 10.8 35.8 905.0
翠云草 238.3 4.4 13.9 405.9
垫状卷柏 — ＊＊ 24.2 27.8 675.7
卷柏 673.1 38.9 36.5 296.5
细叶卷柏 472.9 14.4 5.6 935.6
疏叶卷柏 327.4 24.7 9.5 682.3
江南卷柏 1141.1 19.9 12.1 875.2
槲皮素 0.080
　　注:＊＊ 3次不同时间的实验显示该样品随着浓度增加 , XOD反
应速率反呈上升趋势 ,判断该样品可能具有增强 XOD活性的作用
4　讨论
4.1　本文对卷柏属 7种药用植物的 28种提取物
进行了体外抑制黄嘌呤氧化酶活性的实验 ,发现其
中对黄嘌呤氧化酶有抑制活性的成分主要集中在乙
酸乙酯和 95%乙醇提取部位 ,而其石油谜提取物和
水提取物的抑制活性相对较弱 ,同时乙酸乙酯和
95%乙醇提取部位的浓度与抑制率呈较好的线形关
系(相关系数 0.98以上)。因此 ,本实验表明乙酸
乙酯提取部位和 95%提取乙醇部位是卷柏属药用
植物抑制 XOD的活性部位 ,为下一步分离纯化得到
抑制 XOD活性的有效化合物明确了实验方向 。
4.2　在卷柏属药用植物的 28种提取物中 ,翠云草
乙酸乙酯提取物和细叶卷柏 95%乙醇提取物对黄
嘌呤氧化酶的抑制活性较强 ,因此 ,在该属植物中对
黄嘌呤氧化酶的抑制成分的筛选应重点针对这两种
植物 。
4.3　卷柏属药用植物 ,在我国长期用于治疗多种
疾病 ,未见有明显毒性的报道。目前临床上广泛应
用的黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌呤醇 ,存在较大的副
作用 。因此 ,本实验为寻找一类高效低毒的抗痛风
的黄嘌呤氧化酶抑制剂提供了新的探索 。
4.4　在对抗病毒中药进行的筛选研究中 ,我们的
前期研究已经发现卷柏属一种植物的提取物具有很
强的直接清除自由基的活性 ,同时又能较强地抑制
黄嘌呤氧化酶和脂质氧化酶的活性 ,并能显著下调
结肠癌细胞中环氧化酶 Ⅱ基因 , 减少 COX-2的产
生。若进一步对多种卷柏属药用植物进行黄嘌呤氧
化酶 、脂质氧化酶和环氧化酶 Ⅱ的活性实验研究 ,将
有可能发现具有多重作用的活性物质 ,为科学合理
地利用植物资源提供实验依据。
·446· 中藥材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 4期 2007年 4月
致谢:湖北中医学院附属医院冯汉鸽教授指导动力学分光光度
法测试。
参 考 文 献
[ 1] 万定荣 ,陈科力 , 詹亚华 .湖北省卷柏科药用植物调查
与研究 .中国中药杂志 , 2005, 30(19):1507.
[ 2] 毕跃峰 , 郑晓珂 ,史社坡 , 等.卷柏属植物化学成分和药
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[ 3] SunCM, SyuWJ, HuangYT, etal.Selectivecytotocityof
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[ 5] MaSC, ButPP, OoiVE, etal.Antiviralamentoflavone
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peroxidescanvengers.J.Nat.Prod, 1998, 61:6171.
(2006-11-17收稿)
补肾壮骨中药对去卵巢大鼠骨代谢的相关研究
黎慧萍 1 ,孙　平 3 ,蔡杏粧2 ,吴　筠 3 ,蔡德鸿 3
(1.广东省佛山市中医院功能科 ,广东佛山 528000;2.广东省云浮市妇幼保健院内分泌科 ,广东云浮
527300;3.南方医科大学附属珠江医院药剂科 ,广东广州 510282)
　　摘要　目的:研究补肾壮骨中药(主要由淫羊藿 、续断 、补骨脂等组成)对去卵巢大鼠骨丢失的影响。方法:SPF
级雌性 SD大鼠 36只 , 随机平均分为 3组:假手术对照组(Sham)、手术对照组(OVX)和中药组(CH), 中药组大鼠
给予补肾壮骨中药灌胃(141 mg/kg),其它 2组灌胃等量生理盐水 ,实验期 8 w。采用生化和放免法检测大鼠性激
素和骨代谢指标 , 并采用骨密度测定仪测定大鼠右侧股骨的骨密度(BMI)。结果:OVX组大鼠血清中骨钙素
(BGP)、抗酒石酸酸性磷酶(TRAP)、碱性磷酸酶(ALP)、血清钙 、磷(Ca、P)、性激素(LH、FSH)水平显著高于 Sham
组大鼠相应的指标(P<0.01, P<0.05),性激素(E2)、骨密度(BMD)显著低于 Sham组(P<0.01);CH组大鼠血清
BGP、ALP、血清 Ca、P、性激素(LH、FSH)水平显著低于 OVX组大鼠相应的指标(P<0.01, P<0.05), 而性激素
(E2)、骨密度(BMD)显著高于 Sham组(P<0.01)。结论:补肾壮骨中药能明显降低去势大鼠的骨丢失。
关键词　骨质疏松症;中药;生化指标;骨密度;性激素;大鼠
中图分类号:R285.5　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2007)04-0447-03
　　绝经后骨质疏松症是严重危害人类健康的一种
代谢性骨病 ,其特点是骨量减少和骨组织显微结构
受损 ,进而引起骨骼脆性和骨折危险性增加 。对绝
经后骨质疏松症的临床治疗多采用雌激素替代疗
法 ,虽有明显疗效 ,但副作用较大。补肾壮骨中药
(主要由淫羊藿 、续断 、补骨脂等组成 ,由贵州仙灵
药业有限责任公司提供)在对抗骨质疏松方面 ,具
有一定的前景 ,如淫羊藿既可保护性腺组织而维持
正常性激素水平 ,又是增加骨强度的有效成分 〔1〕。
续断具有类雌激素和孕激素的作用 ,能有效增加钙
的含量 ,促进骨基质的钙化;补肾脂可促进成骨细胞
的增殖从而促进骨形成。我们用雌性大鼠去势建立
绝经后骨质疏松症动物模型 ,探讨补肾壮骨中药对
去势后大鼠骨量丢失的防治作用 ,为其进一步的应
用提供实验依据。
1　材料和方法
1.1　动物模型和实验分组　3月龄 SPF级雌性大
鼠 36只 ,体质量(253±15)g,购于南方医科大学实
验动物中心。适应喂养 7 d后 ,随机平均分为 3组:
假手术对照组(Sham)、手术对照组(OVX)和中药组
(CH), 3组大鼠经 3%戊巴比妥钠(50 mg/kg)腹腔
内麻醉后 ,沿背部肋脊角切口行双侧卵巢切除术 ,假
手术对照组大鼠不切除卵巢仅切除卵巢周围部分脂
肪组织。术后 7 d行阴道涂片检查 ,涂片未呈动情
·447·中藥材 JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 30卷第 4期 2007年 4月