全 文 ：第 44 卷第 11 期
2016 年 6 月
广 州 化 工
Guangzhou Chemical Industry
Vol. 44 No. 11
June. 2016
分析测试
高效液相色谱法测定萹蓄中绿原酸含量*
邓仕任，朱夏敏，王 鑫，王春娇，夏林波
(辽宁中医药大学药学院，辽宁 大连 116600)
摘 要:建立了高效液相色谱测定萹蓄药材中绿原酸含量的方法，为萹蓄的合理质量控制提供依据。用伊力特 Hypersil ODS2
色谱柱(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，流动相乙腈 －水(12∶88，V∶V) ，检测波长 325 nm。结果显示绿原酸在 0. 125 ～ 1. 25 mg /mL范
围内线性关系良好，r =0. 9995(n =6)，加样回收率 101. 0%，ＲSD =1. 62%(n =6);3批萹蓄药材中绿原酸的含量为 0. 11 ～0. 19 mg/g。绿
原酸为萹蓄药材中的特征活性成分，所建立的含测方法操作简便，结果可靠，可作为萹蓄药材质量控制的指标性成分之一。
关键词:萹蓄;绿原酸;高效液相色谱;含量测定
中图分类号:Ｒ284. 1 文献标志码:A 文章编号:1001 －9677(2016)011 －0152 －02
* 基金项目:国家自然科学基金项目 (81202857) ;辽宁省自然科学基金 (2015020713) ;辽宁省高等学校优秀人才支持计划 (LJQ2015070)。
第一作者:邓仕任 (1979 －) ，男，博士，副教授。
通讯作者:夏林波 (1977 －) ，女，博士，副教授，研究方向为中药分析。
HPLC Method for Determination of Chlorogenic Acid
in Polygonum aviculare L． *
DENG Shi － ren，ZHU Xia －min，WANG Xin，WANG Chun － jiao，XIA Lin － bo
(College of Medicine，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Liaoning Dalian 116600，China)
Abstract:An HPLC method for determination of chlorogenic acid in Polygonum aviculare L. was developed，to
provide a quality control method for Polygonum aviculare L. The chromatography was carried out on an Elite Hypersil
ODS2 column (4. 6 × 250 mm，5 μm)with acetonitrile － water (12∶88，V∶V)as the mobile phase，the detection
wavelength was set at 325 nm. Chlorogenic acid could be successfully determined and the linear rang was 0. 125 ～
1. 25 mg /mL (r = 0. 9995)． The average recoveries (n = 6)of the chlorogenic acid was 101. 0%，ＲSD =1. 62%. The
content of chlorogenic acid in 3 batches was 0. 11 ～ 0. 19 mg /g. Chlorogenic acid was the specific ingredient in
Polygonum aviculare L. The method is accurate，reliable and sensitive for quality control of Polygonum aviculare L.
Key words:Polygonum aviculare L. ;chlorogenic acid;HPLC;determination
萹蓄为蓼科植物萹蓄 Polygonum aviculare L. 的干燥地上部
分，始载于《神农本草经》，味苦、性微寒，归膀胱经，具有
利尿通淋，杀虫止痒的功效，常用于热淋涩痛，小便赤短，虫
积腹痛，皮肤湿疹等症［1］，是一味常用中草药。现代研究表
明，萹蓄具有利尿、降压、止血、抑菌、抗氧化和保肝等药理
作用，临床上用于治疗泌尿系统疾病、肠道系统疾病及糖尿病
等［2］。我们的前期研究表明，萹蓄的乙醇提物对 α －葡萄糖苷
酶具有较好的体外抑制活性，这可能是其治疗糖尿病的作用机
制之一。萹蓄的主要化学成分有黄酮类、酚酸类、苯丙素类、
生物碱类、萜类等［3］。目前，对萹蓄的质量控制研究主要集中
在黄酮类化合物中［4 － 5］，尚未见基于酚酸类成分展开的质量控
制研究。绿原酸为萹蓄中的特征酚酸类成分，其具有降压、抗
菌、保肝、抗病毒、抗氧化等多方面药理活性［6 － 7］，为萹蓄的
药效活性成分之一。本实验拟以绿原酸为指标成分，以十八烷
基硅烷键合硅胶为固定相，建立萹蓄药材中绿原酸的 HPLC 分
析方法，以期为萹蓄药材的合理质量控制提供相关科学依据。
1 实验仪器与试药
Agilent 1100高效液相色谱仪，美国安捷伦;METTLEＲ AE
－240 型十万分之一分析天，瑞士梅特勒;FA1004B 电子天平，
上海精密科学仪器有限公司;KQ － 250DB 型数控超声清洗器，
昆山市超声仪器有限公司。
绿原酸对照品，购自中国食品药品检定研究院;甲醇(分
析纯)、乙腈(色谱纯) ，天津市大茂化学试剂厂;水为娃哈哈
纯净水。
3 批萹蓄药材采集自辽宁鞍山千山地区，经辽宁中医药大
学药用植物教研室王冰教授鉴定为蓼科植物萹蓄 Polygonum
aviculare L. 的干燥地上部分
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
伊力特 Hypersil ODS2 色谱柱 (4. 6 × 250 mm，4. 6 μm) ;
流动相乙腈 －水 (12∶88，V∶V) ;流速 1. 0 mL /min;检测波
长 325 nm;柱温 40 ℃，进样量 20 μL。
2. 2 对照品溶液制备及线性关系考察
取绿原酸对照品适量，精密称定，置 10 mL 量瓶中，加甲
醇溶解，稀释至刻度，得浓度为 0. 125 mg /mL 的对照品储备
第 44 卷第 11 期 邓仕任，等:高效液相色谱法测定萹蓄中绿原酸含量 153
液。将该储备液用甲醇逐级稀释，配成浓度分别为 0. 0125、
0. 025、0. 050、0. 075、0. 100、0. 125 mg /mL 的系列对照品溶
液。将上述对照品溶液依次注入液相色谱仪，进样量为 20 μL。
以峰面积为纵坐标，样品浓度(mg /mL)为横坐标，得回归方程
为 y = 3. 04 × 106x + 366，绿原酸在 0. 0125 ～ 0. 125 mg /mL 范围
内呈良好的线性关系 (r = 0. 9995，n = 6)。
2. 3 供试品溶液的制备
取萹蓄粉末(过 40 目筛)约 2. 0 g，精密称定，置于锥形瓶
中，加入 100 mL 甲醇浸泡过夜，室温超声提取三次，每次
20 min，过滤合并提取液，减压浓缩至干后，以甲醇溶解后转
入 10 mL容量瓶中，定容至刻度，测定前置于 4 ℃保存备用，
进样分析前经 0. 22 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。
2. 4 精密度试验
精密称取同一萹蓄药材按 2. 3 项下方法制成供试品溶液，
连续进样 6 次，测得保留时间 ＲSD = 0. 64%，峰面积 ＲSD =
1. 27%，表明仪器精密度良好。
2. 5 稳定性试验
精密称取同一萹蓄药材按 2. 3项下方法制成供试品溶液，分
别在 0、2、4、8、12、24小时测定峰面积。平均峰面积为 67266，
ＲSD =2. 69% (n =6)。表明供试品溶液在 24 h内基本稳定。
2. 6 重复性试验
精密称取同一萹蓄药材 6 份，按 2. 3 项下方法制成供试品
溶液，测得样品中绿原酸含量的平均值为 0. 11 mg /g，ＲSD =
1. 14%，证明本方法重复性良好。
2. 7 加样回收率试验
取已知绿原酸含量(0. 11 mg /g)的药材 9 份，每份约 2. 0 g，
精密称量，3 份为一组，置具塞锥形瓶中，每组精密加入低、
中、高浓度绿原酸对照品贮备液，按 2. 3 项下方法制备供试品
溶液，结果平均加样回收率 101. 0%，ＲSD = 1. 62%(n = 9)。
表 1 加样回收率试验
Table 1 Ｒesult of recovery experiments
编号
样中
量 /mg
加入
量 /mg
测得
量 /mg
回收
率 /%
平均
值 /%
ＲSD /%
1 0. 221 0. 175 0. 179 102. 3
2 0. 220 0. 175 0. 174 99. 4
3 0. 222 0. 175 0. 178 101. 7
4 0. 220 0. 220 0. 226 102. 7
5 0. 221 0. 220 0. 217 98. 6
6 0. 221 0. 220 0. 225 102. 3
7 0. 222 0. 260 0. 261 100. 4
8 0. 221 0. 260 0. 267 102. 7
9 0. 221 0. 260 0. 258 99. 2
101. 0 1. 62
2. 8 样品含量的测定
图 1 萹蓄药材 HPLC图
Fig. 1 HPLC chromatography of Polygonum aviculare L.
分别取不同批次收集的萹蓄药材约 2 g，精密称定，按 2. 3
项下方法制备供试品溶液，在上述色谱条件下进行分析，其色
谱峰如图 1 所示，记录下峰面积，代入标准曲线，计算出样品
中含有绿原酸的含量，结果如表 2 所示。
表 2 萹蓄药材中绿原酸含量测定结果
Table 2 Ｒesult of chlorogenic acid determination
编号 收集地 绿原酸含量 /(mg /g)
1 辽宁千山 0. 11
2 辽宁千山 0. 17
3 辽宁千山 0. 19
3 讨论与结论
(1)萹蓄萹蓄为一年生草本植物，在播种当年的 7 － 8 月
生长旺盛时采收，齐地割取全株，晒干或鲜用。其又名萹竹、
扁竹蓼、扁猪牙等， 《尔雅》郭璞注:萹蓄似小藜，赤茎节，
好生道傍，可食，又杀虫。其苦降下行，通利膀胱，苦燥又能
杀虫除湿止痒，主要用于淋痛及湿疹，还可治疗蛲虫等寄生虫
病。萹蓄在我国各地均产，以河南、四川、吉林等地产量较
大。在在对辽宁千山地区的道地辽药进行降糖活性的筛选过程
中，我们发现委陵菜具有较强的 α －葡萄糖苷酶体外抑制活性，
提示其可能对二型糖尿病具有一定的治疗作用。
(2)萹蓄中的化学成分主要有黄酮类、酚酸类、苯丙素
类、生物碱类、萜类等、糖类等。目前对萹蓄的含量测定研究
多集中在其黄酮类成分上，如有报道［3］以杨梅苷和槲皮苷等八
种黄酮作为指标成分进行质量控制。然而，对萹蓄中酚酸类成
分的含量研究则相对少见。绿原酸为萹蓄中的一种特征酚酸类
成分，具有抗菌、抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、
降血压、降血脂清除自由基等作用［7］，是许多药材，包括萹蓄
的主要有效成分之一研究绿原酸的含量分布，对于萹蓄药材的
质量控制具有重要意义。
(3)本文首次采取 HPLC法，对 3 批产自辽宁千山地区的
萹蓄药材中的绿原酸进行了含量测定，结果分布在 0. 11 ～
0. 19 mg /g范围内。我们所建立的检测方法简便、稳定、灵敏
度高，可为萹蓄药材的质量评价提供科学依据。
参考文献
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