全 文 ：中南药学 2012 年 10 月 第 10 卷 第 10 期　Central South Pharmacy. October 2012, Vol. 10 No. 10
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（收稿日期： 2012-09-01； 修回日期： 2012-09-20）
萹蓄高效液相色谱指纹图谱研究
贺凡珍，童欣，刘孟华，苏薇薇 * （中山大学生命科学学院，广州 510275）
摘要：目的　采用 HPLC法建立萹蓄药材的指纹图谱。方法　采用 CAPCELL PAK C18 MG（250 mm×4.6 mm，
5 μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.1%磷酸溶液（B）为流动相，线性梯度洗脱；检测波长 340 nm；柱温 30 ℃；流速
1.0 mL • min－ 1。结果　构建的指纹图谱有 18个共有峰，确认了其中 8个峰的成分分别为绿原酸、杨梅苷、金丝桃苷、
木犀草苷、扁蓄苷、槲皮苷、胡桃宁、木犀草素。结论　本研究为萹蓄药材的质量控制提供了新方法。
关键词：萹蓄；高效液相色谱法；指纹图谱
中图分类号：O658　　　　文献标识码：A　　　　文章编号：1672-2981(2012)10-0773-03
doi:10.3969/j.issn. 1672.2981.2012.10.016
HPLC f ingerprint of Polygonum aviculare L.
HE Fan-zhen, TONG Xin, LIU Meng-hua, SU Wei-wei* (School of Life Sciences, Sun Yat-sen University, Guangzhou
510275)
Abstract: Objective To establish an HPLC f ingerprint of Polygonum aviculare L.. Methods HPLC fi ngerprint was
established with CAPCELL PAK C18 MG (250 mm×4.6 mm, 5 μm) column. Acetonitrile (A) and 0.1% phosphoric acid
(B) were used as the mobile phase at 1.0 mL • min－ 1. The detection wavelength and column temperature were 340 nm
and 30 ℃ respectively. Results In this fi ngerprint, 18 characteristic peaks were selected as the fi ngerprint peaks. Eight
of these characteristic peaks were identifi ed as chlorogenic acid, myricitrin, hyperoside, luteoloside, avicularin, quercitrin,
juglanin, luteolin. Conclusion The method can be used for the quality control of Polygonum aviculare L..

基金项目：广东省科技计划资助项目 (编号：2010B050100013)。
作者简介：贺凡珍，女，硕士研究生，主要从事天然药物分析研究，Tel：13751835935，E-mail：hefanzhen1986@126.com * 通讯作者：
苏薇薇，女，博士，主要从事中药质量标准化研究，Tel：（020）84112398，E-mail：lsssww@126.com
Central South Pharmacy. October 2012, Vol. 10 No. 10　中南药学 2012 年 10 月 第 10 卷 第 10 期
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萹蓄为蓼科植物萹蓄（Polygonum aviculare L.）的干燥
地上部分，性微寒味苦，归膀胱经，具有利尿通淋，杀虫止
痒的功效 [1]，临床多用于治疗泌尿系统感染、细菌性痢疾、
非胰岛素依赖性糖尿病、肾炎、结石、牙痛等疾病 [2-3] 。据
文献报道 [4-5] ，黄酮类成分是萹蓄抗菌消炎的主要活性成分。
目前，萹蓄多以 1～ 3个黄酮类化合物作为其质量控制的指
标成分 [4，6-7] ，不能从整体上反映萹蓄药材的质量，而中药
色谱指纹图谱能从整体上反映中药的质量 [8-10]。鉴于此，本
研究构建了萹蓄 HPLC指纹图谱，并采用 HPLC-ESI/MS/MS
技术确定了其中 8个峰的归属，现报道如下。
1 仪器与试药
Dionex Ultimate 3000 DGLC高效液相色谱仪（美国戴
安公司，DGP-3600SD双三元泵、SRD-3600脱气机、WPS-
3000SL自动进样器、TCC3000-RS柱温箱、DAD检测器
及 Chromeleon工作站）；Agilent 高效液相色谱 -质谱联
用仪（Agilent 1200RRLC-6410三重四级杆串联质谱仪）；
CAPCELL PAK C18 MG（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；
Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18（50 mm×4.6 mm，1.8 μm）
色谱柱；十万分之一电子分析天平（BP211D，德国 Sartorius
公司）；旋转蒸发仪（4001型，德国 Laborota公司）；超
声波清洗器（KQ-250DE型数控超声波清洗器，昆山超声仪
器有限公司）。
萹蓄药材样品均由中山大学副主任药师彭维鉴定为蓼科
植物萹蓄（Polygonum aviculare L.）的干燥地上部分，10批
样品中，1～ 2来源于安徽，3来源于福州，4来源于湖南，
5来源于广西，6来源于广东，7来源于河南，8来源于云南，
9来源于浙江，10来源于湖北。绿原酸（批号：110753-
200212）、金丝桃苷（批号：111521-200303）、木犀草苷（批
号：111720-200603）、槲皮苷（批号：111538-200403）、
木犀草素（批号：111720-200603）对照品（均购自中国药
品生物制品检定所，纯度均≥ 98.0%）；杨梅苷对照品（批
号：10020821，纯度≥ 98.0%，上海同田生物技术有限公司）。
乙腈为色谱纯（美国 Burdick&Jackson）、磷酸（天津科密
欧化学试剂有限公司） ；甲醇为分析纯（广东光华化学厂
有限公司）；水为超纯水。
2 方法与结果
2.1 溶液的制备
2.1.1 对照品溶液的制备 取绿原酸、杨梅苷、金丝桃苷、
木犀草苷、槲皮苷、木犀草素各约 1 mg，精密称定，置 10
mL量瓶中，用 60%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 取萹蓄药材粉末（过 4号筛）
约 1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入 60%甲醇
50 mL，称定重量，冷浸 8 h，超声处理（功率 300 w，频
率 40 kHz）30 min，冷却至室温，再称定重量，用 60%
甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，药渣用 60% 甲醇适
量洗涤，合并滤液和洗涤液，回收溶剂至干，残渣加 60%
甲醇溶解，转移至 5 mL量瓶中，加 60%甲醇至刻度，摇
匀，滤过，取续滤液，即得。
2.2 色谱条件
CAPCELL PAK C18 MG（250 mm×4.6 mm，5 μm）色
谱柱；以乙腈为流动相 A，0.1%磷酸溶液为流动相 B，线性
梯度洗脱：0～ 80 min，10% → 30% A；检测波长：340 nm；
柱温：30 ℃；流速：1.0 mL • min－ 1；进样量：10 μL。
2.3 方法学考察
2.3.1 精密度试验 取同一份萹蓄药材的供试品溶液，连续
进样 6次，以保留时间 36 min峰面积较大、较稳定的指标
成分杨梅苷作为参照峰（S），考察特征峰相对保留时间及
相对峰面积的 RSD。结果各主要色谱峰相对保留时间及相对
峰面积的 RSD均＜ 3.0%；采用《中药色谱指纹图谱相似度
评价系统 2004A版》进行评价，相似度均＞ 0.99，表明仪
器精密度良好（见图 1）。
2.3.2 稳定性试验 取同一份萹蓄药材的供试品溶液分别
在 0、2、4、6、8、10、12、24 h进样分析，以杨梅苷色谱
峰为参照峰（S），考察特征峰相对保留时间及相对峰面积
的 RSD。结果各主要色谱峰相对保留时间及相对峰面积的
RSD均＜ 3.0%；采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统
2004A版》进行评价，相似度均＞ 0.99，表明供试品溶液在
放置 24 h内稳定性良好（见图 2）。
图 1 精密度试验结果
Fig 1 Precision test
s
0.00 11.59 23.19 34.78 46.38 57.97 69.57 81.16
S6
S5
S4
S3
S2
S1
516.40
387.29
258.19
129.08
-0.03 t/min
图 2 稳定性试验结果
Fig 2 Stability test
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
0.00 11.59 23.19 34.78 46.38 57.97 69.57 81.16
t/min
s
519.27
389.44
259.62
129.79
-0.03
2.3.3 重复性试验 取同一批萹蓄药材按“2.1.2”项下方法
平行操作，制备 6份供试品溶液，分别进样分析，以杨梅苷
色谱峰为参照峰（S），考察特征峰相对保留时间及相对峰
面积的 RSD。结果各主要色谱峰相对保留时间及相对峰面积
的 RSD均＜ 3.0%，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系
统 2004A版》进行评价，相似度均＞ 0.99，表明该方法重
复性良好（见图 3）。
2.4 指纹图谱的构建与分析
2.4.1 指纹图谱的构建 取 10批萹蓄药材供试品溶液，分别
进样分析，以杨梅苷色谱峰为参照峰（S），采用《中药色
谱指纹图谱相似度评价系统 2004A版》进行匹配，筛选出
18个共有峰并获得共有模式（对照指纹图谱）（见图 4 ）。
Key words: Polygonum aviculare L.; HPLC; fi ngerprint
中南药学 2012 年 10 月 第 10 卷 第 10 期　Central South Pharmacy. October 2012, Vol. 10 No. 10
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分别对 8个已知成分的 DAD光谱图进行叠加，结果在
340 nm的波长处，各已知成分色谱峰有较强吸收；该波长
下各色谱峰峰高及峰面积比例合适，分离度较好，杂质干扰
较少。故选定 340 nm作为检测波长。
3.3 小结
本研究首次采用二元线性梯度洗脱的方法构建了萹蓄
药材高效液相色谱（HPLC）指纹图谱，在波长 340 nm处检
测出 18个共有峰，并鉴定出 1个酸性成分及 7个黄酮类成分。
采用归一化法对 10批样品指纹图谱中的色谱峰进行统计，
已知成分的色谱峰面积之和占共有色谱峰面积总和的 64%
以上，非共有峰面积之和均小于总峰面积的 10%。HPLC指
纹图谱可以较全面地反映样品的内在质量，为萹蓄药材的质
量控制提供了依据。

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(收稿日期： 2012-06-20； 修回日期： 2012-07-09）
s
S6
S5
S4
S3
S2
S1
图 3 重复性试验结果
Fig 3 Repeatability test
0.00 11.59 23.19 34.78 46.38 57.97 69.57 81.16
531.88
398.90
265.92
132.94
-0.04 t/min
10批样品与对照指纹图谱的相似度均＞ 0.90（见图 5）。10
批样品的相似度分别为 1.000、0.999、0.999、0.997、1.000、
0.999、0.982、0.999、0.999、0.999。
图 4 萹蓄药材 HPLC对照指纹图谱
Fig 4 Referential HPLC fi ngerprint of Polygonum aviculare L.
0.00 11.59 23.19 34.78 46.38 57.97 69.57 81.16
194.69
129.78
64.87
-0.04 t/min
图 5 10批萹蓄药材的相似度评价结果
Fig 5 Similarity analysis of 10 batches of Polygonum aviculare L.
0.00 11.59 23.19 34.78 46.38 57.97 69.57 81.16
t/min
519.26
389.43
259.61
129.78
-0.04
S1
S2
S3
S4
S5
S6
S7
S8
S9
S10
R
s
表 1 萹蓄药材指纹图谱化学成分质谱归属
Tab 1 MS data of chemical components in HPLC fi ngerprint of
Polygonum aviculare L.
色谱峰
（peak）
化合物
（compound）
相对分子质量
（relative molecular
mass）
[M-H]－
主要碎片离子
（ main fragment
ions）
2* 绿原酸 354 353 191、135
8* 杨梅苷 464 463 316
9* 金丝桃苷 464 463 300、151
10* 木犀草苷 448 447 284、227、150
11 扁蓄苷 434 433 300、151
12* 槲皮苷 448 447 300、179
14 胡桃宁 418 417 284、255、227
18* 木犀草素 286 285 255、229、187
注（Note）：*为有对照品对照（* stand for reference）。
2.4.2 色谱峰的归属 使用 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-
C18（50 mm×4.6 mm，1.8 μm）色谱柱，以乙腈 -水为流动
相，采用 LC-ESI-MS/MS对萹蓄药材指纹图谱进行分析。ESI-
MS/MS参数：干燥氮气温度 350 ℃，流量 13.0 L • min－ 1，雾
化器压力 40 psi，毛细管电压 4 000 V，扫描质量范围 100～
1 000。黄酮类化合物中的羟基容易形成稳定的氧负离子，
故选用负离子模式以获得较好的信噪比。通过质谱的分子离
子峰、裂解碎片，结合 HPLC-DAD紫外吸收光谱特征、相
关文献 [3-5]及对照品对照，对指纹图谱中的色谱峰进行归属，
确证 6个化学成分，指证 2个化学成分，结果见表 1。
3 讨论
3.1 流动相的考察
实验过程中对比了不同的流动相体系：甲醇 -水、乙腈 -
水、乙腈 - 0.1%磷酸、乙腈 - 0.5%磷酸，其中以乙腈 - 0.1%
磷酸进行梯度洗脱能使各成分得到较好的分离，各色谱峰的
峰形较优，故选用此流动相。
3.2 检测波长的考察