全 文 ：100:1 的不同比例上样，洗脱剂为石油醚:乙酸乙酯
(19:1)，待流下来的洗脱液有颜色时，开始每隔 20 mL
接样，点样进行薄层色谱跟踪分析，减压浓缩后用高效
液相色谱法测定聚戊烯醇含量，结果见表 3。
从表 3 中可以看出，硅胶:样品 = 50:1 时，效果最
好，样品浓度可提高至 95. 27%。
4 结论
银杏叶中的聚戊烯醇类化合物是一类强亲脂性物
质，易溶于非极性的有机溶剂，如石油醚，因此用石油
醚提取银杏叶聚戊烯醇类化合物，产物得率较高。提
出的聚戊烯醇类化合物包含聚戊烯醇和聚戊烯醇乙酸
酯，以后者居多。用 5% NaOH － CH3OH 溶液进行水
解，可将聚戊烯醇乙酸酯转化为聚戊烯醇，后通过萃
取、水洗，使得大部分的极性杂质去除。经丙酮:乙酸
乙酯(9:1)冷冻除杂及乙醇处理后更利于后续的硅胶
收稿日期:2015 － 12 － 11
基金项目:国家自然科学基金(21261015);内蒙古自然科学基金
(2015MS0221)
作者简介:宝力道(1978 －)，男，内蒙古赤峰人，讲师，博士，研究方向:
材料化学。
通讯作者:赵玉英(1960 －)，女，内蒙古赤峰人，教授，研究方向:蒙药化
学，E － mail:zhaoyy1961@ 126． com。
柱纯化。硅胶柱对聚戊烯醇类化合物具有较好的分离
能力，经硅胶柱层析，可得到浅黄色油状产物，聚戊烯
醇含量达 95%以上。实验结果重现性好，分离、纯化
过程简单，易于工业放大。
参考文献
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DOI∶10． 13192 / j． issn． 1000-1719． 2016． 06． 052
高效液相色谱法同时测定萹蓄中 4 种活性成分的含量
宝力道1，丁海萍2，赵玉英2，乌兰其其格1，宋娟娟2
(1. 赤峰学院口腔医学院，内蒙古 赤峰 024000;2. 内蒙古民族大学分析测试中心 化学化工学院，内蒙古 通辽 028000)
摘 要:目的:建立同时分离测定萹蓄中绿原酸、芦丁、鞣花酸、槲皮素 4 种有效成分含量的高效液相色谱方法。方
法:采用 SHMADZu VP － ODS色谱柱(150 L × 4. 6 mm，20 μm)，以 50%甲醇 － 50%水 － 0. 01%磷酸为流动相进行洗脱;
检测波长为 370 nm，柱温 20 ℃，进样量 10 μL。萹蓄样品以 70%乙醇溶液超声提取，大孔树脂分离，进样分析。结果:在
本实验条件下 4 种有效成分有很好的分离，绿原酸、鞣花酸、芦丁、槲皮素的峰面积与质量浓度分别为 0. 16 ～ 0. 80(r =
0. 9996)，0. 44 ～ 44. 0 (r = 0. 9991) ，0. 03 ～ 0. 18(r = 0. 0. 9990) ，0. 01 ～ 0. 05 mg·L －1(r = 0. 9993)，呈良好的线性关系，加
样回收率分别为 90. 12%、111. 16%、110. 64%、114. 92%，ＲSD 值分别为 1. 26%、3. 45%、3. 92%、4. 43%，所测萹蓄药品
中绿原酸、芦丁、鞣花酸、槲皮素的平均质量分数分别为 1. 25 μg /mL、1. 11 μg /mL、2. 46 μg /mL、0. 55 μg /mL。结论:本方
法简便易行、快速、准确，重复性好，可同时测定萹蓄中绿原酸、芦丁、鞣花酸和槲皮素的含量。
关键词:萹蓄;绿原酸;芦丁;鞣花酸;槲皮素;高效液相色谱法
中图分类号:Ｒ927． 2 文献标志码:A 文章编号:1000-1719(2016)06-1266-03
Simultaneous Determination of Four Active Components in Polygonum Aviculare L by HPLC
BAO Lidao1，DING Haiping2，ZHAO Yuying2，WU lanqiqige1，SONG Juanjuan2
(1． Oral Medicine School of Chifeng University，Chifeng 024000，Inner Mongolia，China;
2． Inner Mongolia of Nationality University Center of Analysis＆Measurement，Tongliao 028000，Inner Mongolia，China)
Abstract:Objective:To develop an HPLC method for simultaneous determination of Chlorogenic Acid，Ｒutin，Ellagic Acid and
Quercetin in Polygonum Aviculare L． Methods:After ultrasonic extraction with 70% ethanol solution，the ethanol － extract of Po-
lygonum Aviculare L was analyzed on an SHMADZu VP － ODS column(150 L × 4． 6 mm，20 μm)using gradient elution of 50%
methanol － 50% ultrapure water － 0． 01% phosphoric acid at a flow rate of 0． 5 mL·min －1 and detection wavelength was at 370
nm． The column temperature was set at 20 ℃ and injection volume was 10 uL． Ｒesults:The 4 alkaloids were well separated by this
·6621· 辽宁中医杂志 2016 年第 43 卷第 6 期
HPLC method． Chlorogenic Acid，Ｒutin，Ellagic Acid and Quercetin were good in the ranges of 0． 16 － 0． 80(r = 0． 9996)，0． 44 －
44． 0 (r = 0． 9991) ，0． 03 － 0． 18(r = 0． 09990) ，0． 01 － 0． 05 mg·L －1(r = 0． 9993)respectively． The calibration curves of all
analytes were linear． The recoveries were 90． 12%，111． 16%，110． 64% and 114． 92% with ＲSD values were 1． 26%，3． 45%，
3． 92% and 4． 43%，respectively． The contents of Chlorogenic Acid，Ｒutin，Ellagic Acid and Quercetin in Polygonum Aviculare L．
were 1． 25 μg /mg，1． 11 μg /mg，0． 26 μg /mg and 0． 55 μg /mg，respectively． Conclusion:The described method is sensitive，con-
venient and accurate and is suitable for the simultaneous determination of Chlorogenic Acid，Ｒutin，Ellagic Acid and Quercetin in
Polygonum Aviculare L．
Keywords:Polygonum Aviculare L;Chlorogenic Acid;Ｒutin;Ellagic Acid;Quercetin;HPLC
萹蓄为蓼科植物(Polygonum Aviculare L. )的干燥
地上部分，分布于全国大部分地区，夏季叶茂盛时采
收，出去根和杂质，晒干。萹蓄始载于《神农本草经》，
载入 2011 年版《中华人民共和国药典》，功能与主治
为利尿通淋、杀虫、止痒、热淋等症［1 － 2］。有人已从萹
蓄全草中提取了没食子酸甲酯、β － 胡萝卜苷、山柰
酚、槲皮素、没食子酸、萹蓄苷、槲皮苷、绿原酸、咖啡酸
等多种化学成分，并发现某些化学成分能抑制肿瘤、抗
菌消炎、抗病毒、降糖、降脂、保肝利胆以及提高人体免
疫力等多种生物活性［3 － 4］。黄酮类化合物是当前抗感
染领域的主要研究对象之一，经研究显示槲皮素、芦丁
等黄酮类化合物有很强的抗菌活性，对大部分细菌均
有显著抑制作用，绿原酸、鞣花酸等酸类化合物同样具
有抗菌、抗炎以及抗癌作用［5］。近些年采用 HPLC 测
定药材中同类成分含量的文献报道较多［6 － 7］，但同时
测定一种药材中理化性质相差较大的几种活性组分含
量的研究报道较少。为了全面控制萹蓄的质量，本研
究采 HPLC法，首次建立了 1 次进样，同时测定萹蓄药
材中绿原酸、鞣花酸、槲皮素、芦丁 4 种成分含量的方
法，为同时测定一种药材中多种活性成分提供依据，同
时可为萹蓄质量控制提供技术支持。
1 仪器和试药
KQ －100DA型数控超声波清洗器(昆山市超声仪
器有限公司);SPD － 10A VP 检测器(日本岛津);LC
－10AT VP 液相色谱泵(日本岛津公司);色谱柱为
SHMADZu VP － ODS 柱 (150 L × 4. 6 mm，20 μL);
N3000 双通道色谱工作站(浙江大学智达信息工程有
限公司)。
绿原酸(Chlirogenic Acid，批号 10083 － 200907)，
芦丁(Ｒutin，批号 0080 － 200301)，槲皮素(Quercetin，
批号 10081 － 200907)，均购自中国药品生物制品检定
所;鞣花酸(Ellagic Acid，批号 091205 － 200303 纯度≥
98%，上海融合医药科技有限公司);大孔树脂 D5320，
天津光复精细化工研究所;甲醇为色谱纯，乙醇、磷酸
为分析纯，超纯水。
萹蓄药材产自河北(批号 090322)购自通辽蒙王
医药有限责任公司药店，经内蒙古民族大学蒙医药学
院药材鉴定研究室布赫巴特教授鉴定为萹蓄药材的干
燥全草。样品经干燥、粉碎过 60 目筛。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 SHMADZu VP － ODS 色谱柱(150 L
× 4. 6 mm，20 μL)，检测波长 370 nm，柱温 20 ℃，进样
量 10 μL，以 50%甲醇 － 50%水 － 0. 01%磷酸为流动
相进行洗脱。
2. 2 对照品贮备液制备 精密称取绿原酸、芦丁、鞣
花酸、槲皮素对照品 0. 20 mg、0. 21 mg、2. 35 mg、0. 13
mg，分别置于 5 mL容量瓶中，各对照品用甲醇溶解并
稀释至刻度，摇匀，分别得浓度为 40. 00 μg /mL、43. 60
μg /mL、470. 00 μg /mL、26. 70 μg /mL 的绿原酸、鞣花
酸、槲皮素、芦丁四种对照品储备溶液，于 5 ℃冰箱贮
存。
2. 3 供试品溶液制备 精密称取萹蓄粉末 0. 3 g 置
于烧杯中，加入 40 mL70%乙醇溶液超声提取 28 min，
过滤得滤液置于 50 mL容量瓶中，再用 70%乙醇定容
到 50 mL，从中取 10 mL 用大孔树脂吸附，用 0. 1%乙
酸和 70%乙醇混合液洗脱，定容至 10 mL作为供试品
溶液。将对照品和供试品按 2. 2 方法进样，色谱图见
图 1。
1. 绿原酸(Chlirogenic Acid);2. 芦丁(Ｒutin);
3. 鞣花酸(Ellagic Acid);4. 槲皮素(Quercetin)
图 1 混合对照品(A)与萹蓄样品(B)的 HPLC谱图
2. 4 标准曲线、线性范围和定量线 分别精密配置绿
原酸、芦丁、鞣花酸、槲皮素对照品储备液的梯度浓度
对照品溶液，按 2. 2 方法进行测定。以对照品峰面积
积分值(Y)为纵坐标，对照品浓度(X，μg /mL)为横坐
标，计算绿原酸、芦丁、鞣花酸、槲皮素的回归方程，结
果表明各化合物的峰面积与质量浓度之间均呈良好的
线性关系，结果见表 1。
2. 5 精密度、重复性及稳定性试验 日内精密度:以
标准品溶液每 3 h 进样 1 次连续进样 5 次，计算各峰
面积的 ＲSD。结果，绿原酸为 1. 30%，芦丁为 3. 50%，
鞣花酸为 2. 60%，槲皮素为 4. 30%。日间精密度:每
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天 1 次，以标准品溶液连续进样 5 d，计算各峰面积的
ＲSD，结果为绿原酸为 1. 30%，芦丁为 3. 50%，鞣花酸
为 2. 60%，槲皮素为 4. 30%，表明仪器性能稳定。
表 1 回归方程及相关系数
化合物 标准曲线 Ｒ2
线性范围
(mg·L －1)
定量限
(mg·L －1)
绿原酸 Y =2. 467 × 106X +0. 0337 × 106 0. 9996 0. 16 ～ 0. 80 0. 40
芦丁 Y =13735X +22. 984 0. 9991 0. 44 ～ 44. 00 22. 00
鞣花酸 Y =1006800X －40176 0. 9990 0. 03 ～ 0. 18 0. 10
槲皮素 Y =13538X －666. 83 0. 9993 0. 01 ～ 0. 05 0. 03
重复性:取同一批萹蓄药材样品 5 份，按“2. 3”方
法制备供试品溶液并测定，计算得各待测成分含量的
ＲSD，为绿原酸 0. 28%，芦丁 3. 5%，鞣花酸 2. 23%，槲
皮素 2. 34%，表明本方法重复性稳定。稳定性:取供
试品溶液 1 份，在 0，2，4，8，16，24 h 分别进样分析，测
定各待测成分峰面积，计算 ＲSD，分别为绿原酸
2. 91%，芦丁 4. 70%，鞣花酸 0. 94%，槲皮素 0. 82%，
表明本方法稳定性良好。芦丁、鞣花酸，槲皮素在对照
品溶液中至少 5 d 内保持稳定，在样品溶液中至少 10
d内保持稳定。绿原酸在较高温度、溶液状态下不稳
定，易分解。
2. 6 加样回收率试验 取 5 份已知相同含量的萹蓄
药材样品，分别加入相应量的绿原酸、芦丁、鞣花酸、槲
皮素对照品，按“2. 3”方法制备供试品溶液并测定，计
算回收率，有关数据见表 2。
表 2 4 种被测成分加样回收率试验(n = 5)
被测成分
药材中量
(μg)
加入量
(μg)
测得量
(μg)
回收率
(%)
平均值
(%)
ＲSD
(%)
绿原酸 0. 0385 0. 2000 0. 2194 92. 0 90. 12 1. 26
0. 0377 0. 2000 0. 2136 89. 8
0. 0392 0. 2000 0. 2140 89. 4
0. 0378 0. 2000 0. 2131 89. 6
0. 0371 0. 2000 0. 2129 89. 8
芦丁 0. 0334 0. 2180 0. 2689 107. 0 111. 16 3. 45
0. 0315 0. 2180 0. 2709 108. 7
0. 0332 0. 2180 0. 2773 110. 4
0. 0337 0. 2180 0. 2930 116. 4
0. 0307 0. 2180 0. 2817 113. 3
鞣花酸 7. 85 2. 35 11. 50 112. 7 110. 64 3. 92
8. 22 2. 35 10. 89 103. 0
7. 75 2. 35 11. 36 112. 5
7. 89 2. 35 11. 43 111. 6
7. 94 2. 35 11. 67 113. 4
槲皮素 0. 0160 0. 01335 0. 1699 113. 6 114. 92 4. 43
0. 0162 0. 01335 0. 1814 121. 2
0. 0169 0. 01335 0. 1612 107. 2
0. 0163 0. 01335 0. 1758 117. 4
0. 0167 0. 01335 0. 1731 115. 2
2. 7 样品含量测定 用 2. 3 制备的供试品溶液，按
2. 1 条件进行 HPLC 分析，测定各指标。成分的峰面
积并计算含量，有关数据见表 3。
表 3 萹蓄中 4 种成分的含量(n = 3，μg·mg －1，珋x ± s)
样品 含量 ＲSD(%)
绿原酸 1. 25 ± 0. 07 1. 02
芦丁 1. 11 ± 0. 05 0. 74
鞣花酸 2. 46 ± 0. 09 0. 65
槲皮素 0. 55 ± 0. 06 2. 93
3 讨论
3. 1 流动相的优化 采用不同比例甲醇与水的混合
液作流动相时，4 种组分没有很好分离;又用不同比例
甲醇、水和稀磷酸的混合液作流动相，进行多次条件摸
索，当 50%甲醇 － 50%水 － 0. 01%磷酸作为流动相
时，能使 4 种活性组分得到很好的分离，且峰形良好。
3. 2 色谱条件的优化 本实验中先采用保留时间对
照法进行初步定性，进而用二极管阵列紫外检测技术
在 200 ～ 400 nm范围内采集 4 种活性成分对照品色谱
峰所对应的紫外光谱图，表明绿原酸、鞣花酸、芦丁、槲
皮素在 370 nm时有较强吸收，故选用 370 nm 作为检
测波长。将所得样品图谱的形状、吸收带位置及相对
强度与标准品图谱比较对照定性。
3. 3 样品处理方法的优化 未用大孔树脂处理的供
试品溶液，进行液相色谱分离时 4 种组分没有很好的
分离，且杂峰较多。将供试品溶液用大孔树脂吸附，再
用 0. 1%乙酸和 70%乙醇混合液洗脱后，4 种组分分
离得很好。
为了使被测成分提取完全，本实验对不同提取溶
剂(甲醇和乙醇)配比、料液比、提取时间及提取方法
(超声处理、加热回流)作了比较实验。结果显示，不
同浓度的乙醇和甲醇溶液中，以 70%乙醇和 90%甲醇
对各指标成分的提取效率最高，超声处理 30 min 与热
回流提取 2 次对 4 种目标化合物的提取效率相当，考
虑到绿原酸遇热不稳定的性质，样品处理选择 70%乙
醇为提取液、超声 30 min。
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