全 文 ： 2003, Vol. 24, No. 6 食品科学 ※分析检验122
高效液相色谱法测定西红柿
籽油中的β-胡萝卜素
李红陵，魏沙平
(西南农业大学基础科技学院，重庆 400716)
摘 要：本文用产于新疆地区的成熟西红柿籽中提出的红色籽油，在氮气和还原剂的保护下，经2.0mol/L的KOH
乙醇液皂化处理后，乙醚提以不皂化物，再经柱色谱分离，利用高效液相色谱法，确证西红柿籽油中含有丰富的β-
胡萝卜素并对其进行了准确的定量测定。
关键词：西红柿；籽油；不皂化物；β-胡萝卜素；高效液相色谱
Abstract：β- CAROTENE in the unsaponifiables of the tomato seeds oil was analyzed qualitatively by means of High
Performance Liquid Chromatography (HPLC) for the first time.The method involved alcoholic KOH saponification of the samples,
extraction with ester and determination by HPLC.
Key words：tomato；seed oil；β- CAROTENE；HPLC
中图分类号：S641.2 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2003)06-0122-02
收稿日期：2002-10-12
作者简介：李红陵(1964-)，女，讲师，主要从事食品、环境化学分析工作。
西红柿籽是西红柿在其食品加工过程的废弃物，
目前西红柿籽主要用作农田土壤肥料或动物饲料或作
为废弃物扔掉。从干燥的西红柿籽中提取的籽油中含
有许多对人体有益的成分，β-胡萝卜素就是其中一
种，其含量随品种、产地和成熟度不同而异。本文
研究了西红柿籽油的皂化条件，并采用高效液相色谱
法(HPLC)首次对西红柿籽油中存在丰富的β-胡萝卜
素，说明西红柿籽油具有较高的营养价值，可用于
食品色素、化妆品中。
1 实验部分
1.1 西红柿籽油的提取
用产于新疆地区的成熟西红柿，取其籽，室温
干燥，充分研细后在甲醇中回流2h，过滤，滤液在
减压下蒸去甲醇和水得深红色西红柿籽油。
1.2 不皂化物的提取
称取5.0g西红柿籽油，置于250ml圆底烧瓶中，
加入20ml乙醇，1.0g对苯二酚，5.0ml KOH溶液(浓
度为2.0mol/L)，在氮气保护下加热回流10min冷却
后加入蒸馏水200ml稀释，用乙醚萃取至乙醚层不显
色为止，每次用乙醚50ml。合并乙醚液，用浓度为
0.1mol/L KOH的水溶液洗三次后再用蒸馏水洗至中
性，乙醚液用无水Na2SO4干燥12h，氮气保护下小
心蒸去乙醚，得深红色不皂化物固体0.3g。
1.3 柱色谱分离
取上述不皂化物溶于1ml 乙酸乙酯，进行色谱
柱分离(直径3cm，长45cm，湿法装填30cm高的硅
胶G，青岛海洋化工厂生产)，用乙酸乙酯洗脱，洗
脱液蒸去溶剂后作HPLC分析。
1.4 HPLC分析条件
HPLC分析仪 Varian 5000；紫外检测器 Varian
CDS-401；色谱柱 Micropak MCH-5 15cm×4cm；柱
温35℃；试剂甲醇、二氯甲烷、乙腈、对苯二酚、KOH、
乙醚、无水Na2SO4、乙酸乙酯、标准β-胡萝卜素均
分析纯。
β-胡萝卜素定性分析条件：紫外检测器检测波
长 λ=450nm；流动相 甲醇；流动相流速 0.8ml/min；
进样量 10μl；压力101.3 kPa；检测时间 20min。
β-胡萝卜素定量分析条件：紫外检测器检测波
长λ=450nm；流动相 甲醇；流动相流速 0.8ml/
min；进样量 10μl；压力 101.3kPa；检测时间
15min；样品浓度 35.46mg/ml(溶于甲醇)；标准β-胡
萝卜素浓度0.078ml/ml(溶于甲醇:二氯甲烷=1:1溶液)。
1.5 标准贮备液的配制
准确称取β-胡萝卜素的标准对照品7.8mg，置
于100ml的溶量瓶中，用甲醇:二氯甲烷=1:1溶液释
至刻度，作为β-胡萝卜素的标准贮备液，浓度为
0.078mg/ml。于0～5℃下冷藏备用。
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2 结果与讨论
2.1 β-胡萝卜素的定性分析
HPLC法中流动相极性或组成比例不同使组分的保
留时间发生变化。根据此原理，用标准β-胡萝卜素
为标样，选择适当条件，以二氯甲烷-乙腈-甲醇三
元体系为流动相，变化流动相比例，观察标准β-胡
萝卜素的保留时间和样品的相应峰保留时间的变化，
表1所示结果显示二者的保留时间都能很好的符合，
从而确证了西红柿籽油中β-胡萝卜素的存在。
流动相比例 β-胡萝卜素 样品
(V/V) 流速 标样 相应峰
二氯甲烷-乙 (ml/min)保留时间 保留时间
腈-甲醇 (min) (min)
20:70:10 1 3.22 3.30
10:70:20 1 4.68 4.76
5:70:25 1 6.03 6.14
2:70:28 1 7.31 7.35
0:0:100 0.8 11.45 11.46
表1 β-胡萝卜素的定性分析结果λ=(450nm)
对于同一组分，变化不同的检测波长，在其他
条件相同的情况下，两个不同波长情况下的同一组分
的峰面积的比值应为一恒定值。设S1为λ为450nm时
的峰面积，S2为λ为470nm时的峰面积，则S1/S2。表
2为流动相为甲醇、流速为0.8ml/min，变化检测波长
时样品和β-胡萝卜素标样峰面积变化情况。β-胡
萝卜素标样的S1/S2为52000/1700等于3 .6，二者相
符，进一步说明西红柿籽油中β-胡萝卜素存在。
2.2 β-胡萝卜素的定量分析
检测波长 β-胡萝卜素标样 样品相应峰
(nm)保留时间 峰面积 保留时间 峰面积
(min) (min)
450 11.45 15000011.46 52000
470 10.84 4900 10.81 1700
表2 不同检测波长下标样与样品的峰面积
表3 β-胡萝卜素的定量分析结果
保留时间 峰面积 平均峰 含量
(min) 面积
β-胡萝卜 11.45150000 标样浓度
素标样 11.44149000149000见1.5节
11.40148000
11.4652000 76.57ng
样品 11.445180051870(每100g西红
11.4351800 柿籽油中)
对于β-胡萝卜素的定量分析，本文采用标准
β-胡萝卜素的甲醇和二氯甲烷的溶液做外标，通过
β-胡萝卜素的响应峰面积与样品相应的响应峰面积
比较，从而确定出样品中β-胡萝卜素的含量。标
样和样品分别做三次平行测定，取其响应峰面积的平
均值进行计算，其结果如表3所示。
本文用HPLC法首次对西红柿籽油中的β-胡萝卜
素做了定量分析，经计算每100g西红柿籽油中含有
76.57mg的β-胡萝卜素，结果表明西红柿籽油中含
有较丰富的β-胡萝卜素，具有较高营养值。
2.3 皂化条件的优化
改变皂化的时间(5、8、10、15、20min)和碱
度(0.5、2.0、4.0mol/L)，取测定β-胡萝卜素最大
值度2.0mol/L时，所测得β-胡萝卜素为最大值。综
合分析，本文选用皂化时间为10min，碱浓度为2.
mol/L这一皂化条件。
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