全 文 ： 中国现代应用药学 2012年 4月第 29卷第 4期 Chin JMAP, 2012 April, Vol.29 No.4 ·323·
青海产小叶黑柴胡中皂苷类成分的含量分析

曹纬国 1a,1c，陶燕铎 2，张有金 1b，张艳辉 1b，郭延垒 1b，于超 1b*(1.重庆医科大学，a.中医药学院；b.生命科学院；c.中
医药实验教学中心，重庆 400016；2.中国科学院西北高原生物研究所，西宁 810000)

摘要：目的 测定青海产小叶黑柴胡中总皂苷、柴胡皂苷 a 及柴胡皂苷 d 的含量，为其质量评价和开发利用提供参考。
方法 采用分光光度法测定小叶黑柴胡中总皂苷的含量；采用高效液相色谱法测定小叶黑柴胡中柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷
d的含量。结果 小叶黑柴胡中总皂苷含量>2.77%，柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d的含量分别高于 0.54%和 0.14%，其中柴胡
皂苷 a 和柴胡皂苷 d 的含量远高于中国药典中柴胡含量项下的标准。结论 本方法简便快速，结果准确、稳定，适用于
小叶黑柴胡中皂苷类成分的含量测定。青海产小叶黑柴胡具有较高的药用价值。
关键词：小叶黑柴胡；柴胡总皂苷；柴胡皂苷 a；柴胡皂苷 d；高效液相色谱法
中图分类号：R917.101 文献标志码：B 文章编号：1007-7693(2012)04-0323-04

Content Analysis on Saponins in Bupleurum Smithii Wolff var. Parvifolium Shan et Y. Li

CAO Weiguo1a,1c, TAO Yanduo2, ZHANG Youjin1b, ZHANG Yanhui1b, GUO Yanlei1b, YU Chao1b*(1.Chongqing
Medical University, a.Traditional Chinese Medicine College; b.Institute of Life Sciences; c.Traditional Chinese Medicin
Experimental Teaching Center, Chongqing 400016, China; 2.The Northwest Institute of Plateau Biology, Chinese Academic of
Sciences, Xining 810000, China)

ABSTRACT: OBJECTIVE To provide reference for exploitation and the quality evaluation of Bupleurum smithii Wolff var.
parvifolium Shan et Y. Li in Qinghai province, and to determine the content of total saponins, saikoside a and saikoside d in it.
METHODS The content of total saponins was determined by spectrophotometry. The content of saikoside a and saikoside d
were determined by HPLC. RESULTS The content of total saponins, saikoside a and saikoside d in Bupleurum smithii Wolff
var. parvifolium Shan et Y. Li were more than 2.77%, 0.54%, 0.14%, respectively. The content of saikoside a and saikoside d
were higher than quality criteria in China Pharmacopeia. CONCLUSION The method is simple, rapid and accurate. The
mothod is suitable for quality analysis of total saponins, saikoside a and saikoside d in Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium
Shan et Y. Li in Qinghai province which possess high medicinal value.
KEY WORDS: Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et Y. Li; total saponins; saikoside a; saikoside d; HPLC

柴胡为常用中药，中国药典自 1985年版以来
规定柴胡药材基源仅为柴胡(Bupleurum chinense
DC.)和狭叶柴胡(Bupleurum scorzonerifdium Willd.)，
但柴胡属植物自古药用较多，且各地均有地区习
用药材，较常用的约有 20 种。其中小叶黑柴胡
(Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et
Y. Li)为西北地区习用柴胡药材，主要分布于青海、
宁夏、甘肃、山西和内蒙古等地，资源量较大，为
青海、宁夏等地商品柴胡的主流品种[1]，市场调研
也表明该品种在全国市场流通的柴胡药材占很大
比例，仅次于柴胡品种，具有较大的开发利用价值。
柴胡的质量评价指标为柴胡皂苷 a 和柴胡皂
苷 d，目前关于小叶黑柴胡中黄酮类化合物、木脂素
类化合物及甾醇类化合物的含量测定均有报道[2-4]，
潘胜利等[5-6]测定了宁夏、甘肃产小叶黑柴胡中皂
苷类成分的含量，而青藏高原为小叶黑柴胡的道
地产区之一，目前尚无关于青藏高原产小叶黑柴
胡中皂苷类成分含量的研究报道。本实验拟对青
海产小叶黑柴胡中总皂苷、柴胡皂苷 a及柴胡皂苷
d进行含量分析，为青藏高原小叶黑柴胡的质量评
价及开发利用提供参考。
1 材料
1.1 试剂
柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d(批号分别为
110777-200507，110778-200506，中国药品生物制
品检定所，纯度均≥98%)；乙腈为色谱纯；水为
重蒸水，其余所用试剂均为分析纯。
1.2 仪器
基金项目：重庆市科委自然科学基金(2009BA5083)；重庆市教委科学技术研究项目(KJ110321)
作者简介：曹纬国，男，硕士，副教授 Tel: 13389679838 E-mail: cwgzd2001@sohu.com *通信作者：于超，男，博士，教
授 Tel: (023)68485589 E-mail: yuchaom@163.com
DOI:10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2012.04.011
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LC-2010A 高效液相色谱仪(日本岛津公司)；
CLASS-VP 色谱工作站(日本岛津公司)；UV-1800
紫外可见分光光度计(上海箐华科技仪器有限公
司)；Millipore 溶剂过滤系统(美国密理博公司)；
METTLER TOLEDO XS105DU十万分之一电子分
析天平(瑞士梅特勒公司)。
1.3 药材样品
实验样品采自青海大通县，经中国科学院西
北高原生物研究所梅丽娟副研究员鉴定为小叶黑
柴胡(Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan
et Y. Li)。
2 方法和结果
2.1 总皂苷的含量测定[7]
2.1.1 对照品溶液的制备 精密称取减压干燥至
恒重的柴胡皂苷 a对照品 6.4 mg，置于 10 mL量
瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀即得。
2.1.2 供试品溶液的制备 精密称取小叶黑柴胡
细粉 3 g，置具塞锥形瓶中，精密加入 80%乙醇
100 mL，称定重量，冷浸过夜后超声提取 60 min，
放至室温后称重，用 80%乙醇补足减失的重量，
摇匀后过滤，取续滤液 10 mL浓缩至干后，加甲
醇溶解并定容至 10 mL，作为供试品溶液。
2.1.3 测定波长的选择 取对照品溶液和供试品
溶液各 0.2 mL，分别置于 10 mL具塞比色管中，
挥干溶剂，精密加入 0.2 mL5%香草醛-冰醋酸溶液
和 0.8 mL 高氯酸，摇匀，60 ℃恒温水浴加热
20 min，取出置冰水浴中冷却 15 min，再加入 5 mL
冰醋酸，摇匀，以溶剂为空白对照，在 200~800 nm
波长范围内扫描。结果显色后柴胡皂苷 a对照品和
小叶黑柴胡样品溶液均在 612 nm处有较大吸收，
因此选 612 nm为测定波长。
2.1.4 标准曲线的制备 分别精密量取对照品溶
液 0，0.1，0.2，0.4，0.6，0.8 mL，置 10 mL具塞
比色管中，按“2.1.3”项下方法操作，在 612 nm
波长处以第 1 管做空白对照，分别测定吸光度。
以吸光度值 A 为纵坐标，以对照品浓度 C 为横坐
标，求得回归方程：A=2.237C+0.125，r=0.999 1，
线性范围为 0.064~0.512 mg·mL1。
2.1.5 仪器精密度试验 精密吸取柴胡皂苷 a 对
照品溶液 6份，各 0.2 mL，分别置于 10 mL具塞
比色管中，依“2.1.3”项下方法显色后，于 612 nm
波长处测定吸光度，计算吸光度的 RSD为 2.33%，
表明仪器精密度良好。
2.1.6 重复性试验 取同一批小叶黑柴胡药材细
粉 6份，每份 3 g，分别按照“2.1.2”项下方法制
备供试品溶液，各吸取供试品溶液 0.5 mL置于 10
mL具塞比色管中，依“2.1.4”项下方法显色后测
定吸光度并计算柴胡总皂苷的含量，RSD 为
4.09%，表明重现性较好。
2.1.7 稳定性试验 精密吸取同一份供试品溶液
6次，每次 0.2 mL，置于 10 mL具塞比色管中，
分别于 0，2，4，6，8，12 h时，依“2.1.4”项下
方法显色，测定吸收度，结果吸光度的 RSD 为
4.45%，表明小叶黑柴胡供试品溶液中皂苷类成分
在 12 h内稳定。
2.1.8 加样回收率试验 精密称取已知总皂苷含
量的小叶黑柴胡药材细粉 6份，每份 0.5 g，分别
加入柴胡皂苷 a对照品 13.8 mg，按照“2.1.2”项
下方法制备供试品溶液，依“2.1.4”项下方法显
色后于 612 nm处测定吸光度，计算加样回收率，
结果平均加样回收率为 95.9%，RSD为 4.72%。
2.1.9 样品总皂苷含量测定 精密吸取供试品溶
液 0.5 mL置于 10 mL具塞比色管中，按“2.1.4”
项下方法显色后，于 612 nm处测定吸光度，并计
算样品中总皂苷的含量。
2.2 柴胡皂苷 a与柴胡皂苷 d的含量测定[8]
2.2.1 高效液相色谱条件 色谱柱为大连伊利特
hypersil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相
为乙腈-水，梯度洗脱条件：0 min，乙腈浓度 30%；
10 min，乙腈浓度 38%；20 min，乙腈浓度 40%；
30 min，乙腈浓度 44%；35 min，乙腈浓度 75%；
40 min，乙腈浓度 90%；50 min，乙腈浓度 30%。
检测波长为 210 nm；流速为 1.0 mL·min1；柱温为
室温；进样量为 20 μL，理论板数按柴胡皂苷 d计
不低于 8 000，在此条件下各组分得到良好分离，
HPLC液相色谱图见图 1。
2.2.2 对照品溶液的制备 分别精密称取 120 ℃
减压干燥至恒重的柴胡皂苷 a、柴胡皂苷 d对照品
10.1 mg和 4.3 mg，各置 10 mL量瓶中，加甲醇溶
解并定容，摇匀，即得对照品储备液。
2.2.3 样品溶液的制备 精密称取小叶黑柴胡细
粉约 3 g，置圆底烧瓶中，精密加入 80%乙醇
50 mL，加氨水调 pH值至 9，回流提取提取 2 h，
浓缩提取液至干，加甲醇溶解并定容至 25 mL，摇
匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。
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图 1 高效液相色谱图
A对照品；B小叶黑柴胡；1柴胡皂苷 a；2柴胡皂苷 d
Fig 1 HPLC chromatograms
Areference substance; BBupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et Y. Li; 1saikoside a; 2saikoside d
2.2.4 线性关系考察 精密量取柴胡皂苷 a 和柴
胡皂苷 d 对照品溶液适量，分别加甲醇制成系列
标准溶液，柴胡皂苷 a的浓度分别为 0.101，0.202，
0.404，0.606，0.808，1.01 mg·mL1，柴胡皂苷 d
的浓度分别为 0.043，0.086，0.172，0.258，0.344，
0.43 mg·mL1，进样测定。以色谱峰面积 A对进样
量 M(μg)进行线性回归，柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d
的线性回归方程分别为 A=216 799M+358 466
(r=0.999 6)，A=290 532M+546 880(r=0.999 3)，
结果表明柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 分别在
2.02~20.2 μg和 0.86~8.6 μg内线性关系良好。
2.2.5 仪器精密度试验 分别精密吸取柴胡皂苷
a和柴胡皂苷 d对照品溶液，按“2.2.1”项下色谱
条件，进样 20 μL，重复 6次，测得峰面积，计算
RSD分别为 1.39%和 1.65%，表明仪器精密度良好。
2.2.6 重复性试验 对同一批样品按样品溶液的
制备方法平行制备 6 份，按“2.2.1”项下色谱条
件，分别进样 20 μL，依照样品测定方法测定并计
算，柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d的 RSD分别为 1.98%
和 2.16%。
2.2.7 稳定性实验 按“2.2.1”项下色谱条件，
精密吸取同一供试品溶液 20 μL，在室温下于 0，2，
4，6，8，10 h进样，并测定峰面积，计算得柴胡
皂苷 a 和柴胡皂苷 d的 RSD 为 1.77%和 2.31%，
表明样品溶液在 10 h内稳定。
2.2.8 加样回收率试验 取已知柴胡皂苷 a 含量的
小叶黑柴胡样品细粉 6份，每份约 0.5 g，精密称定，
分别精密加入的柴胡皂苷 a 对照品溶液适量，按
“2.1.2”项下方法制备，并按“2.2.1”项下色谱条
件，分别进样 20 μL测定；取已知柴胡皂苷 d含量
的小叶黑柴胡样品细粉 6份，每份约 2.0 g，精密称
定，分别精密加入柴胡皂苷 d 对照品溶液适量，按
“2.1.2”项下方法制备，并按“2.2.1”项下色谱条件，
分别进样 20 μL测定。计算柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d
的平均加样回收率及 RSD，结果见表 1和表 2。
表 1 小叶黑柴胡中柴胡皂苷 a的加样回收率测定结果(n=6)
Tab 1 Results of recovery rate of saikosaponin a in
Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et Li(n=6)
取样量/
g
原含有
量/mg
加入量/
mg
测得量/
mg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/
%
0.513 2.796 2.700 5.410 96.1
0.498 2.714 2.700 5.356 97.1
0.487 2.654 2.700 5.229 94.9
0.502 2.736 2.700 5.468 101.9
0.517 2.818 2.700 5.493 99.7
0.514 2.801 2.700 5.455 98.8
98.1 2.39
2.2.9 样品测定 分别精密吸取对照品溶液和供
试品溶液各 20 μL，按“2.2.1”项下色谱条件进行
测定，以外标法计算样品中柴胡皂苷 a和柴胡皂苷
d的含量，结果见表 3。
表 2 小叶黑柴胡中柴胡皂苷 d的加样回收率测定结果(n=6)
Tab 2 Results of recovery rate of saikosaponin d in
Bupleurum smithii Wolff var. parvifolium Shan et Li (n=6)
取样量/
g
原含有
量/mg
加入量/
mg
测得量/
mg
回收率/
%
平均回
收率/%
RSD/
%
2.008 2.871 2.800 5.546 95.5
1.987 2.841 2.800 5.713 102.6
1.992 2.849 2.800 5.562 96.9
2.056 2.940 2.800 5.611 95.4
2.025 2.896 2.800 5.585 96.0
2.015 2.881 2.800 5.704 100.8
97.9 2.84
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表 3 样品测定结果
Tab 3 The analytical results of samples
样 品 第 1 批 第 2 批 第 3 批
柴胡总皂苷/mg·g1 27.91 27.74 28.05
柴胡皂苷 a/mg·g1 5.43 5.45 5.48
柴胡皂苷 d/mg·g1 1.46 1.41 1.44
3 讨论
本方法可以快速检测小叶黑柴胡中总皂苷、
柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d的含量，方法简便，结果
准确可靠，为小叶黑柴胡药材中皂苷类成分分析
及质量评价提供参考。
本实验中测得小叶黑柴胡中总皂苷含量高于
2.77%，柴胡皂苷 a 和柴胡皂苷 d 含量分别高于
0.54%和 0.14%，中国药典柴胡项质量标准规定柴
胡中柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d总量不得低于 0.3%，
而小叶黑柴胡中柴胡皂苷 a和柴胡皂苷 d总量约为
0.68%，远高于药典标准；与潘胜利等[5-6]研究结果
相比，青海产小叶黑柴胡中皂苷类成分含量明显
高于宁夏、甘肃所产，可能高原生态环境下小叶
黑柴胡中皂苷类成分含量较高，提示青海产小叶
黑柴胡具有很高的开发价值。
样品的前处理方法是保证含量测定结果准确
的关键，本实验在测定小叶黑柴胡中皂苷类物质
含量之前进行了样品制备方法的研究，针对 2010
版药典中柴胡样品的制备方法进行了优化，主要
考察了 pH 值对小叶黑柴胡中皂苷类物质提取的
影响。分别控制提取溶媒 pH 值为 8，9，10 三个
水平，其中在提取溶媒 pH值为 9时，柴胡皂苷 a
和柴胡皂苷 d 的得率均为最高，因此在样品的制
备过程中，控制提取溶剂的 pH为 9。
在使用高效液相色谱法测定小叶黑柴胡中柴
胡皂苷 a和柴胡皂苷 d时，发现干扰成分相当多，
使用等度液相色谱条件以及药典柴胡色谱条件均
无法实现完全分离。本实验经过摸索比较，发现
在选定条件下可以实现待测成分与干扰成分较好
的分离，本方法适用于小叶黑柴胡中柴胡皂苷 a
和柴胡皂苷 d的含量测定。
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of saikosaponina in different Chailing decoction granules by
HPLC [J]. Chin J Mod Appl Pharm(中国现代应用药学),
2009, 26(4): 300-302.
收稿日期：2011-06-15



均匀试验设计优选青黛提取工艺

段晓颖，高卫芳，张辉，闫艳仓，吴彩丽(河南中医学院第一附属医院，国家中医药管理局中药制剂三级实验室，郑州 450000)

摘要：目的 通过均匀试验优选青黛中靛玉红的最佳提取工艺。方法 以靛玉红提取率为指标，对青黛醇提过程中加醇
量、乙醇浓度、提取时间及提取次数 4 个因素进行筛选。结果 影响靛玉红提取率的各因素作用大小顺序为：乙醇浓度
＞溶剂量＞提取时间＞提取次数，其中乙醇浓度，提取次数，溶剂量与靛玉红提取率呈正相关。结论 青黛最佳提取工
艺为加 90%乙醇 9倍量，提取 2次，每次 0.5 h。
关键词：青黛；靛玉红；均匀试验；提取工艺
基金项目：河南省科技攻关项目(072102330035)
作者简介：段晓颖，女，硕士，主任药师，硕导 Tel: (0371)66233639；13783531353 E-mail: dxy137@sina.com