全 文 ：药物分析杂志 C h i n J ph amr A n a l 200 5
,
2 5 ( 9 ) 14 8 5 一
G C 法测定草澄茄中棕搁酸 、 油酸与亚油酸的含量
于双慧 , 陈晓辉 , 毕开顺 `
(沈阳药科大学药学院 , 沈阳 l or o l6 )
摘要 目的 :建立革澄茄中棕桐酸 、 油酸和亚油酸的含量测定方法 。 方法 : 采用毛细管气相色谱法 , 甲酚化后测定单澄茄中棕
搁酸 、油酸与亚油酸的含量。 采用 D B 一 17 弹性石英毛细管柱 ( 30 m x 0 . 25 m m , 0 . 25 林m ) 为分析柱 ;程序升温 :起始温度 17 0
℃ , 以 5 ℃ · m in 一 `升至 250 ℃ ,保持 or 而;n 进样口温度 : 250 ℃ ;检测器温度 : 2 50 ℃ ;流速 : 1 . Z mL · 而 n 一 ’ ;分流比为 10 :0 ;1
柱压 : 98 . 3 kaP ;载气 : 氮气 。 结果 :棕桐酸线性范围为 0 . 04 0 一 0 . 4 0 m g · m L 一 ’ ;平均回收率 (n = 3) 为 98 . 3% 一 10 2 . 3% , R s D
簇 2 . 0% 。 油酸线性范围为 0 . 06 7 一 0 . 58 4 m g · m L 一 ’ ;平均回收率 (n = 3) 为 97 . 6% 一 or 2 . 2% , R s D 蕊 4 . 1% 。 亚油酸线性范围
为 0 . 0 9 一 0 . 869 m g · mL 一 ’ ;平均回收率 (n 二 3) 为 95
.
7 % 一 9
.
3%
,
R s D 续 1 . 1% 。 结论 :本法灵敏 、准确 ,重复性好 , 可以作为
革澄茄的质量控制方法 。
关键词 :革澄茄 ;棕桐酸 ;油酸 ;亚油酸 ; 气相色谱
中图分类号 : 9R 17 文献标识码 : A 文章编号 : 0254 一 17 93 ( 2 0 0 8 )0 9 一 14 85 一。
G C d e t e r m in a it o n o f P a lm i it c a c id
,
o l e i c a c id a n d
li n o l e i c a c i d in L ist e a c u b e b a ( L o u
r
.
) P e
r s
.
Y U S h u a n g 一 h u i , C H E N X i a o 一 h u i , B l K a i 一 s h u n *
( S h e n y an g Ph a mr
a e e u l i e a l Un i v e ls i t y
,
S h e n y a : 19 1 ] 0 0 16
,
C hi ,l a )
A b s t r a e t O bj e e t i
v e : T o d e v e l o p a m e th o d fo r t h e d e te mr i
n a t i o n o f p a lm i t i
e a e id
, o l e i e a e id a n d l i n o l e i e a e i d i n
L i st e a e u be ba ( oL
u r
.
) P
e r s
.
M
e ht o d s : T h e s a m p l e w a s d e t e mr i
n e d w i t h e即 i l l a叮 e o lu m , 1 D B 一 17 ( 3 0 n , x 0 . 2 5 m m ,
0
.
2 5 林m ) b y GC
.
T e m p e ar tu er p or g r a m s w a s 17 0 ℃ p or g r a
mrn
e d t o 2 5 0 ℃ a t s ℃ · m i n 一 ’ fo r 10 m i n : th e inj e e to r
t e m p e r a t u er w a s 2 5 0 ℃ ; th e d e t e e to r t e m p e r a t u r e w a s 2 5 0 ℃ ; t h e n o w : a t e w a , 一 2 m L · m i n 一 ’ ; s p li t i n je e t i o n w a s
e o n d u e t e d w i t h s p l i t ar d i o o f 10 0 : l : t h e e o l u m n h e a d p r e s s u er 9 8
.
3 k P a
.
N i t r o g e n w a s u s e d a s e am
e r g a s
.
R e s lu st
:
p al m i ti e a e i d s h ow
e d a g o o d l i n e a r r e l at i o n s h ip i n ht e r an g e of 0
.
0 4 0 一 0
.
40 m g
·
m L
一 ’
( r 二 0
.
9 9 9 5 ) an d t h
e a v -
e ar g e er e o v e ir e s (
n = 3 ) w
e er 9 8
.
3% 一 10 2
.
3%
,
R S D 毛 2 . 0% : o l e ie a e id s h o w e d a 即 o d l i n e a r er l a ti o n s h i p i n t h e
r a n g e o f 0
.
0 6 7 一 0
.
5 84 m g
·
m L
一 ’
(
r = 0
.
9 9 9 9 )
a n d t h e a v e ar g e r e e o v e r ie s (
。 = 3 ) w e r e 9 7
.
6% 一 10 2
.
2 %
,
R S D
( 4
.
1% ; l i n o l e i e a e id s h o w e d a g o o d l i n e a r er la t io n s h i p in ht e r a n g e o f 0
.
0 9 9 一 0
.
86 9 m g
·
m L
一 ’
( r = 0
.
9 9 9 7 )
a n d
t h e a v e r a g e er e o v e ir e s (
n = 3 ) w
e r e 9 5
.
7% 一 9 9
.
3%
,
RS D 蕊 1 . 1% . C o n d us i o n : Th e m e rh o d 15 s e n s i t i v e , s im p l e
a n d a e e u r a te fo r t h e d e t e mr i
n a ti o n o f p a lm i ti e a e id
, o le i e a e id a n d l in o l e i e a e id i n iL st e a e u b e ba ( L
o u r
.
) P
e .ls
.
K e y w o r d s : L i st e a e u be b a ( L o u r
.
) P
e r s
.
; p a lm i [i e a e id ; o le i e a e id ; li n o l e i e a e id ; G C
革澄茄 , 又名澄茄子 、 山苍子 、木姜子 ,为樟科木
姜子属 山鸡椒 L i ts e a c u b e ba ( oL u r . ) P e r s . 的干燥成
熟果实 。 广布于我国南部省区 , 主产广西 、 浙江 、 四
川等省川 ,具有温中散寒 、行气止痛之功效 , 用于 胃
寒呕逆 、院腹冷痛 、寒疮腹痛 、寒湿郁滞 、 小便浑浊等
病症「’ 」。 所含主要成分为挥发油和脂肪油 〔’ 〕 , 具有
多种 生物活性 。 挥 发油 的研究 在文献 中 已 多
见 [` · 5〕 , _巨作者已完成 了对挥发油 主要成分的定量
分析 el[ 。 同时 , Gc 一 M s 法对单澄茄中脂肪酸的组
成进行鉴定 、分析 ,结果表明含有棕桐酸 、 油酸 、 亚油
酸 、亚麻酸 、 花生四烯酸 。 其所含不饱和的多烯脂肪
酸 ,对人体具有重要的平衡调 节作用 , 是不 可缺少
的物质 , 在降血脂 、 抗肿瘤 、 营养和免疫调节等方
面起重要作用 , 而 未见其定 量分析 的相关报道 。
为了对单澄茄药材质量 进行全面 的控制 , 本文采
用气相色谱法测定草澄 茄中棕搁酸 、 油 酸和 亚油
* 通讯作者 T e l : ( 0 24 ) 2 3 9 8 6 25 9 ; E 一 m a i l : b ika i s h u n @ y a ho o
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2008. 09. 016
一 14 86 一 药物分析杂志 C h in J P hrnta A n la 20 08 , 28 ( 9 )
酸的含量 , 为其质量控制提供灵敏 、 准确 、 重现性
好的方法 。
1 仪器与试药
A g i l e n t 6 8 9 0 N 气相色谱仪 ; L a b s o lu ti o n 色谱工
作站 ; A G B 2P 1 0 S 电子分析天平 ; RE 一 52 A 旋转挥发
器 ; H H 一 2 数显恒温水浴锅 ; SH B 一 1 循环水式多用
真空泵 ; L M 一 n 型氢气发生器 ; IF D 检测器 ;对照品
棕搁酸甲醋 、油酸甲醋和亚油酸甲醋购于北京百灵
威化学试剂有限公 司 , 气相色谱峰面积归一化法计
算纯度均大于 98 % 。 药材购 自广东 、 广西 、 江西 、 浙
江和沈阳等地 ,经沈阳药科大学孙启时教授鉴定为
草澄茄 乙艺劫 ea cu be ba ( oL ur . ) eP sr . 的成熟果实 。
石油醚 ( 60 一 90 ℃ ) 、 正己烷 、二十一烷 、三氟化
硼乙醚 、氯化钠 、氢氧化钠和甲醇等为化学纯 。
2 方法与结果
2
.
1 脂肪油的提取 将不同产地的样品粉碎 , 过
40 目筛 ,精密称定 10 9 ,分别置圆底烧瓶中 ,加人石
油醚 1 0 m L , 回流提取 12 h ,滤过 ,减压回收石油醚
得总脂肪油 。 计算得油率 ,结果广西 、 浙江 、 四川 、湖
北 、广东 、 江西和云南的革澄茄脂肪油得油率分别为
17
.
1%
,
3 2
.
0%
,
10
.
7%
,
2 7
.
5%
,
1 2
.
8%
,
2 1
.
8%
,
4 0
.
9%
。
2
.
2 溶液制备
2
.
2
.
1 内标溶液 取正二十一烷约 70 m g ,精密称
取 ,置 25 m L 量瓶中 ,加正己烷定容至刻度 ,摇匀 ,配
制成浓度为 2 . 860 m g · m L 一 ’ 的内标溶液 。
2
.
2
.
2 对照品溶液 精密称取对照品棕桐酸甲醋 、
油酸甲醋和亚油酸甲醋适量 ,分别置 25 m L 量瓶中 ,
加正己烷定容至刻度 ,摇匀 ,配制成棕桐酸甲醋 、油
酸甲醋和亚油 酸 甲醋的浓度分别为 1 . 00 , 4 . 17 0 ,
6
.
2 10 m g
·
m L
一 ’单一成分的对照品溶液 。
2
.
2
.
3 供试品溶液 精密称定 “ 2 . 1 ” 项下脂肪油
or o m g
,置圆底烧瓶中 , 加人 0 . 5% 氢氧化钠甲醇溶
液 5 m L ,置 60 ℃水浴回流皂化 45 m in ,至油珠全部
消失 , 放冷 , 加 巧% 三氟化硼 乙 醚溶液 Z m L , 置
60 ℃水浴醋化 5 m in , 放冷 , 精密加人正 己烷 5 m L
反应 5 m in ,取出 , 置于分液漏斗中 ,加饱和氯化钠溶
液 10 m L , 振摇 ,静置 。 精密量取上层溶液 1 m L , 加
人内标溶液 0 . 5 m L ,用正己烷定容至 5 m L 量瓶中 ,
摇匀 , 即得 。
2
.
3 色谱条件 D B 一 17 石英毛细管柱 ( 30 m x
0
,
2 5 m m
,
0
.
2 5 卜m )为分析柱 ;升温程序 : 起始温度
为 一7 0 ℃ , 以 5 ℃ · m i n 一 ’ 升至 2 5 0 ℃ ,保持 10 m i n ;
进样 口温度 : 250 ℃ ;检测器温度 : 2 50 ℃ ;柱压 : 98 . 3
k P a ;载气 : 氮气 ; 流速 : 1 . 2 m L · m i n 一 ’ ; 分流 比 :
10 0 : 1
,理论塔板数按油酸甲醋峰计算应不低于 1 . 0
x lo
, 。 在本色谱条件下 ,对照品 、 样品色谱图见图
! . ’ ! r . ’ ! . 1
2 4 6 8 10
A
2 4 6 8 10 t加 i n
B
图 1 对照品 ( A )和广西样品 ( B )色谱图
F i g 1 Chor m
a t o g r a ln s o f r e fe er n e e s u b s tan e e s ( A )
a n d s arn pl
e
fI’O m
G u an 扣 ( B )
l
· 正二十一烷 ( h e n e i e o s a n e , i n t e m al s tan d adr ) 2 . 棕搁酸甲醋 ( p目-
m i t i e a e id m e ht yl
e s 之er ) 3
. 油酸甲醋 ( Ol e i o a e id nz e ht yl e s t er ) 4 . 亚油
酸甲醋 ( lin o l e i e a e id m e th yl e st er )
2
.
4 线性范围考察 分别精密吸取棕桐酸甲醋对
照品溶液 0 . 2 , 0 . 5 , 1 , 1 . 5 , 1 . 8 , 2 . 0 m L ;油酸甲醋对
照品溶液 80 , 2 0 0 , 3 0 0 , 4 0 0 , 5 0 0 , 7 0 0 林L : 亚油酸甲
醋对照品溶液 8 0 , 2 0 0 , 3 0 0 , 4 0 0 , 5 0 0 , 7 0 0 卜L 。 上述
溶液一一对应置同一 5 m L 量瓶中 ,精密加人内标溶
液 0 . 5 m L ,加正己烷定容至刻度 ,摇匀 ,进样 1 林L
测定 。 分别以对照品溶液浓度 ( m g · m L 一 ’ )为横坐
标 ( X ) , 以对照 品与内标峰面积的 比值为纵坐标
( )Y
,绘制标准工作曲线 。 棕桐酸 甲醋 、油酸甲醋和
亚油酸甲醋进样浓度分别在 0 . 040 一 0 . 4 0 , 0 . 0 67
一 0
.
5 8 4
,
0
.
0 9 9 一 0
.
8 6 9 m g
·
m L
一 ’ 范 围内 , 与峰面
积比呈良好线性关系 。 所得回归曲线方程分别为 :
Y = 4
.
4 9 9X + 3
.
2 1 x 10
一 Z r = 0
.
9 9 9 5
Y = 3
.
13 5X + 1
.
9 0 x 10
一 3 r = 0
.
9 9 9 9
Y = 2
.
5 8 0 X + 2
.
3 6 x 10
一 Z r = 0
.
9 9 9 7
2
.
5 精密度试验 取同一份供试品溶液 ,在上述色
谱条件下连续进样 6 次 , 以对照品与内标峰面积的
比值计算 R SD , 棕桐酸 甲醋 、 油酸甲醋和亚油酸甲
醋的 R SD 分别为 1 . 2% , 1 . 3% , 0 . 3% ,表明精密度
药物分析杂志 C h in J phrm a An l a 2 8 0 0
,
2 5 ( 9 ) 一 1 4 8 7 一
良好 。
2
.
6 稳定性试验 取同一份供试品溶液 , 室温放
置 ,于 。 , 2 , 4 , 8 , 1 2 , 24 h 时间点分别进样 , 以棕搁酸
甲醋 、 油酸甲酷和亚油酸甲醋与内标峰面积的比值
计算 , R S D 分别为 1 . 0% , 1 . 0 % , 0 . 4% 。 结果表明 ,
供试品溶液在 24 h 内稳定性良好 。
2
.
7 重复性试验 取同一批次样品 6 份 , 以 “ 2 . 1 ”
及 “ 2 . 2 . 3 ” 项下方法制备供试品溶液 ,进样测定 ,计
算棕搁 酸 、 油 酸 和亚 油 酸含量 的平均值分别为
3 5
.
7 5
,
6 2
.
7 5
,
7 7
.
9 2 m g
·
g
一 ’ ; R SD 分别为 4 . 2% ,
2
.
5%
,
3
.
0%
。 结果表明重复性良好 。
2
.
8 回收率试验 称取已知含棕桐酸甲醋 、 油酸甲
醋和亚油酸 甲醋分别为 0 . 3 7 7 2 , 0 . 6 5 1 5 , 0 . 8 5 5 4 m g
的革澄茄脂肪油 (广西 )约 50 m g ,共 9 份 ,平均分成
3 组 ,分别加人低 、 中 、高 3 种浓度的对照品溶液适
量 ,按照 “ 2 . 2 . 3 ” 项下方法操作制备溶液 , 进样测
定 ,计算平均回收率 ,结果见表 l 。
表 1 回收率试验结果 ( n = 3)
T a b 1 eR
s ul st o f er e o v e yr
表 2 革澄茄中棕桐酸 、 油酸 、 亚油酸
含量测定结果 ( m g · g 一 ’ , n = 3)
T a b 2 C o n te n st o f P al 而 t i e a e id , o l e i c a e i d a n d lino l e i e
a e i d in L i t s
e a e u b e ab ( L o u r
.
) P e sr
.
产地
(
o ir gi n )
棕搁酸
( P
a lm i t ie a e i d )
汕酸
(
, ,10 1` : 以 101)
亚油酸
( 1i
n o l e i e a e id )
广西 ( G u an 群i )
浙江 ( Zh月 i a n g )
江西 ( Ji a : l群i )
湖北 ( H u b o i )
四川 ( S i e h u an )
广东 ( G u an g d o n g )
云南 ( v u n n a n )
17
.
6 6 ( 0
.
1 )
4 0
.
9 5 ( 0
.
9 )
3 0
.
6 9 ( 3
.
0 )
3 0
.
4 4 ( 2
.
7 )
17
.
5 8 ( 2
.
6 )
2 5
.
2 3 ( ]
.
6 )
2 9
.
39 ( 1
.
4 )
4 5
.
85 ( 1
.
0 )
7 1
.
1 5 ( 2
.
3 )
5 3
.
4 4 ( 0
.
9 )
6 2
.
4 2 ( 1
.
1 )
34
.
5 3 ( 1
.
6 )
4 6
.
7 6 ( 0
.
9 )
6 6
.
0 9 ( 4
.
8 )
7 6
.
8 4 ( 0
.
4 )
83
.
6 ( 0
.
8 )
7 1
.
6 2 ( 0
.
7 )
7 1
.
7 8 ( 0
.
9 )
] 04
.
8 ( 0
.
9 )
7 7
.
2 3 ( 1
.
3 )
7 7
.
9 2 ( 2
.
4 )
注 ( n o t e ) :括号内为 R SD 值 ( RS D i n th e l , a er n th e s e s , % )
成分
(
e o m p o u n d )
加人量 测得量 平均回收率
(
a dd e d ( fo
u n d (
a v e
asr
e R SD / %
a m o u n t ) / m g
a
mo
u n t ) / m g er
e o v e 叮 )%
棕桐酸 ( p al 而 li e ac id )
ù勺16QùqZ…, .卫41,`0
0
.
29 26
0
.
6 1 39
0
.
89 39
0
,
337 8
10 2
.
99
.
油酸 ( o l e i c a e id )
68 16 102
.
97 70 97
.
重 ,并且柱效很低 , 因此确定 17 0 一 250 ℃程序升温
方式 。
3
.
3 提取方法和时间的考察 根据制备工艺及样
品的物理性质 , 选用石 油醚 ( 60 一 90 ℃ ) 为提取溶
剂 ,采用索氏提取器 6 h 、 回流提取 6 h 等提取方法
分别提取样品进行考察 , 结果 2 种方法基本没有差
别 ,为简便起见 , 采用石油醚 回流提取法进行提取 。
并试用不同的提取时间 ( 3 , 6 , 9 , 1 2 , 巧 h) 对样品进
行提取 , 当提取时间为 12 h , 得油率是总得率的
93 %
,为节约时间及节省能源 , 回流提取时间确定为
12 h
。
3
.
4 脂肪油衍生化方法的优化 采用正交实验设
计 , 以棕桐酸甲醋 、 油酸甲酷和亚油酸甲醋的含量为
检测指标 ,选择氢氧化钠的浓度 ( 0 . 5% , 2% , 4 % ) 、
水解时间 ( 15 , 3 0 , 4 5 m in ) 和醋化时间 ( 5 , 15 , 3 0
m in ) 3 个因素 ,每个因素 3 个水平进行考察 , 用 L g
( 3
`
)正交表进行实验设计优化 ,得最佳衍生化工艺
条件为 :加人 0 . 5% 氢氧化钠甲醇溶液 ,加热回流 45
m in
,再加入 巧% 三氟化硼乙 醚溶液 2 m L , 反应 5
fl l l
o
3
.
5 小结 由表 2 可知 ,不同产地的革澄茄中 ,棕
桐酸 、油酸和亚油酸含量存在一定差异 , 可能与不同
生长条件和 自然环境有关 , 也有可能是不同产地的
药材由于干燥方法和贮存时间不同而影响药材中化
学成分的含量 。 因此 ,建立准确 、全面 、 有效的分析
方法控制中药材的质量是十分必要的 。
306971
亚油酸 (如o l e i e a e id ) 0 . 55 89
0
.
93 20
0
.
5 406
0
.
92 45
9 6
.
7
9 9
.
3
42 8 1
.
36 66 9 5
.
7 1
.
1
2
.
9 样品 的测定 取不 同产地萃澄茄药材 , 按
,’2 . 1” 和 “ 2 . 2 . 3” 项下方法制备供试品溶液并测定 ,
按内标法计算 ,结果见表 2 。
3 讨论
3
.
1 色谱条件的考察 为了使革澄茄中待测脂肪
酸组分具有良好的分离度和合适的保留时间 , 考察
了 D B 一 1 、 D B 一 5 和 DB 一 17 3 根不同型号的石英毛
细管柱 。 结果表明 D B 一 17 石英毛细管柱能够对样
品实现良好的分离 。
3
.
2 柱温的考察 曾采用由 12 0 一 250 ℃程序升温
的方式 ,结果前面除溶剂峰外 , 基本没有峰 , 在 170
℃左右时出峰 ,因此选择 170 ℃ 测定温度 , 并尝试恒
温测定 ,色谱峰虽然能达到基线分离 ,但拖尾现象严
参考文献
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