全 文 ：分析与检测
2014年第 40卷第 8期(总第 320期) 205
西沙诺尼果汁中车叶草苷酸含量的高效液相色谱测定*
陈建国，张露，李雪，李金霞，程池
(中国食品发酵工业研究院，北京，100015)
摘 要 建立了一种高效液相色谱分析方法，用于测定诺尼果汁车叶草苷酸的含量。采用 Shim-pack VP-ODS-
C18(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱，乙腈-冰醋酸水溶液为流动相，流速为 1. 0 min /mL，检测波长为 230 nm。在
此色谱条件下，车叶草苷酸分离度较好，浓度在 5 ～ 50 μg /mL 内，线性关系良好，检测限为 0. 08 μg /mL，加样回
收率为 99. 75 %，ＲSD值为 2. 25 %。西沙诺尼果汁和大溪地诺尼果汁车叶草苷酸平均含量分别为 0. 218 和
0. 179 mg /mL。
关键词 西沙诺尼，高效液相色谱，诺尼果汁，车叶草苷酸，大溪地
第一作者:博士(E-mail:cij123@ 126． com) (程池教授级高级工
程师为通讯作者，E-mail:cheng100027@ 163． com)。
* 中国食品发酵工业研究院科技发展基金(博士基金)项目
(KJ14-BS-02)
收稿日期:2014 － 05 － 25，改回日期:2014 － 06 － 30
诺尼(noni) ，学名海巴戟天(Morinda citrifolia
Linn．) ，属茜草科(Ｒubiaceae) ，是一种常绿小乔木，
原产于太平洋岛屿、东南亚和澳大利亚等地，现引
种于我国海南省。诺尼有广泛营养和药用价值，富
含大量活性成分如多糖、酚类、黄酮类和环烯醚萜
类等，具有抗肿瘤、抗氧化、增强免疫力、降血脂和
保护心血管等功能，对多种疾病有预防和治疗作
用［1 － 4］。
车叶草苷酸是环烯醚萜类活性物质，主要存在于
茜草科植物中，如白花蛇舌草、巴戟天、鸡矢藤等，具
有抗肿瘤、抗氧化、抗畸变、降血脂等活性［5 － 8］。已有
文献报道诺尼果含有车叶草苷酸［9］，但国内尚未见
采用 HPLC定量测定诺尼果汁中车叶草苷酸的报道。
为此，本研究建立了一种测定诺尼果汁中车叶草苷酸
的高效液相色谱分析方法，对我国西沙和大溪地诺尼
果汁进行了检测。
1 材料与方法
1. 1 仪器
Thermo UltiMate 3000 型高效液相色谱仪(VWD-
3000 紫外检测器，Chromeleon 7 色谱工作站，Thermo
Fisher公司) ;Minispin离心机(eppendorf 公司)。
1. 2 试剂与材料
标准品车叶草苷酸，购自成都普菲德生物技术有
限公司(质量分数不小于 99. 0 %) ;乙腈、冰醋酸，均
为色谱纯;西沙诺尼果汁，由海南诺尼生物工程开发
有限公司生产，产品批次为 20120911、20130618、
20131206 和 20140122;大溪地诺尼果汁 Tht-1、Tht-
2 和 Tht-3，均为法属玻利尼西亚大溪地岛商品化产
品。
1. 3 检测方法
1. 3. 1 色谱条件
检测器:Thermo VWD-3000;检测波长:230 nm;
色谱柱:Shim-pack VP-ODS (250 mm × 4. 6 mm，5
μm);柱温:25 ℃;流动相:V(0. 1%冰醋酸)∶ V(乙
腈)= 90 ∶ 10;流速:1. 0 min /mL。在上述色谱条件
下，取标准品溶液和样品溶液分别进样，记录色谱图。
理论塔板数按车叶草苷酸计算不低于 10 000。
1. 3. 2 标准品溶液制备
称取车叶草苷酸标准品 5 mg，置于 10 mL 容量
瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得标准品储备液(质
量浓度为 0. 5 mg /mL)。吸取标准品储备液 0. 1、
0. 2、0. 4、0. 6、0. 8 和 1. 0 mL 于 10 mL 容量瓶中，加
水稀释至刻度，摇匀，配制成 5、10、20、30、40 和 50
μg /mL的标准品溶液。
1. 3. 3 西沙诺尼果汁车叶草苷酸含量测定
取不同批次西沙诺尼果汁，10 000 r /min 离心 5
min后，通过 0. 22 μm膜。在上述色谱条件下进样分
析，按外标法计算西沙诺尼果汁车叶草苷酸含量。
1. 3. 4 大溪地诺尼果汁车叶草苷酸含量测定
取大溪地岛不同厂家商品化的诺尼果汁，10 000
r /min离心 5 min 后，通过 0. 22 μm 膜。在上述色谱
条件下进样分析，按外标法计算大溪地诺尼果汁车叶
草苷酸含量。
DOI:10.13995/j.cnki.11-1802/ts.2014.08.007
食品与发酵工业 FOOD AND FEＲMENTATION INDUSTＲIES
206 2014 Vol. 40 No. 8 (Total 320)
2 结果与分析
2. 1 色谱分离条件的选择
2. 1. 1 测定波长的选择
采用二极管阵列检测器对标准品进行全波长扫
描，车叶草苷酸在 230 nm处有较强吸收峰，且高效液
相色谱分析时，在 230 nm处样品杂质干扰少，车叶草
苷酸组分可以达到基线分离，峰形理想，因此检测波
长选择 230 nm。
2. 1. 2 流动相的选择与优化
根据测定组分性质，流动相中加入少量酸性调节
剂，会使分离效果和峰形得到较好改善，因此添加了
0. 1 %冰醋酸。对流动相为 0. 1 %冰醋酸溶液-甲醇
和 0. 1 %冰醋酸溶液-乙腈进行了比较，发现后者为
流动相时，车叶草苷酸峰形较窄，且对称性较好。另
对流动相中乙腈含量进行了优化，体积分数由 5%变
化到 30 %，当体积分数为 10 %时，车叶草苷酸与杂
质分离度较好，峰形理想。
综合考虑测定车叶草苷酸的分离度、峰对称性及
柱效等因素，最终选定流动相为 V(0. 1%冰醋酸)∶ V
(乙腈)= 90 ∶ 10;检测波长为 230 nm;流速为 1. 0
min /mL。如图 1 所示，西沙诺尼果汁中车叶草苷酸
与干扰成分之间均能达到完全分离，柱效高，组分保
留时间合适。
图 1 标准品(A)和样品溶液(B)色谱图
Fig. 1 Chromatograms of standard solution and
sample solution
2. 2 方法学考察
2. 2. 1 线性关系考察
分别吸取 5、10、20、30、40 和 50 μg /mL标准品溶
液注入液相色谱仪中，以峰面积为纵坐标，质量浓度
为横坐标，得回归方程为 y = 3. 277x + 2. 111，Ｒ2 =
0. 999 7，线性范围为 5 ～ 50 μg /mL，以仪器信噪比
(S /N = 3)确定车叶草苷酸的检测限为 0. 08 μg /mL。
2. 2. 2 仪器精密度试验
取西沙诺尼果汁(批次 20131206)1 份，在 2. 1 色
谱条件下连续进样 6 次，记录车叶草苷酸质量浓度，
其 ＲSD值为 0. 67 %(表 1)。
表 1 精密度试验结果
Table 1 Ｒesults of precision test
样品 1 2 3 4 5 6 ＲSD /%
浓度 /
(mg·mL －1)
0. 282 0. 278 0. 279 0. 281 0. 277 0. 280 0. 67
2. 2. 3 重现性试验
取同一批西沙诺尼果汁(批次 20131206)6 份，
按上述色谱条件进样分析，测定车叶草苷酸质量浓
度，其 ＲSD值为 2. 16 %(表 2)。
表 2 重现性试验结果
Table 2 Ｒesults of repeatability test
样品 1 2 3 4 5 6 ＲSD /%
浓度
(mg·mL －1)
0. 271 0. 270 0. 279 0. 281 0. 269 0. 282 2. 16
2. 2. 4 稳定性试验
取西沙诺尼果汁(批次 20131206)室温放置，分
别在 0、2、4、6 和 8 h 进样，记录车叶草苷酸质量浓
度，其 ＲSD值为 0. 75 %，表明样品溶液在 8 h内稳定
(表 3)。
表 3 稳定性试验结果
Table 3 Ｒesults of stability test
时间 /h 0 2 4 6 8 ＲSD /%
浓度 /
(mg·mL －1)
0. 281 0. 278 0. 277 0. 276 0. 276 0. 75
2. 2. 5 回收率试验
吸取同一批次西沙诺尼果汁(批次 20131206)6
份，每份 1 mL，分别加入车叶草苷酸标准品储备液
0. 5 mL，进样分析，以外标法计算车叶草苷酸加样回
收率。车叶草苷酸平均回收率及 ＲSD 值为 99. 75 %
和 2. 25%(表 4)。
分析与检测
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表 4 回收率试验结果
Table 4 Ｒesults of recovery test
样品含量 /
(mg·mL －1)
加入标样量 /
(mg·mL －1)
测得总量 /
(mg·mL －1)
回收率 /
%
平均回
收率 /%
ＲSD
/%
0. 278 0. 250 0. 522 98. 86
0. 278 0. 250 0. 535 101. 33
0. 278 0. 250 0. 537 101. 70
99. 75 2. 25
0. 278 0. 250 0. 515 97. 54
0. 278 0. 250 0. 512 96. 97
0. 278 0. 250 0. 539 102. 08
2. 3 西沙诺尼果汁车叶草苷酸含量测定
4 批次西沙诺尼果汁测定结果如表 5 所示。
表 5 西沙诺尼果汁车叶草苷酸含量
Table 5 Contents of asperulosidic acid in
Xisha noni juice
批次 车叶草苷酸 /(mg·mL －1)
20120911 0. 223 ± 0. 045
20130618 0. 178 ± 0. 063
20131206 0. 278 ± 0. 034
20140122 0. 194 ± 0. 023
均值 0. 218 ± 0. 047
车叶草苷酸平均含量为 0. 218 mg /mL，但批次间
含量有所差异，批次 20131206 诺尼果汁中车叶草苷
酸含量最高，达到 0. 278 mg /mL，而批次 20130618 含
量最低，仅为 0. 178 mg /mL。
2. 4 大溪地诺尼果汁车叶草苷酸含量测定
选用 3 种大溪地不同厂家生产的诺尼果汁为样
品，测定结果如表 6 所示。
表 6 大溪地诺尼果汁车叶草苷酸含量
Table 6 Contents of asperulosidic acid in
Tahiti noni juice
诺尼果汁 车叶草苷酸 /(mg·mL －1)
大溪地 Tht-1 0. 341 ± 0. 022
大溪地 Tht-2 0. 120 ± 0. 011
大溪地 Tht-3 0. 076 ± 0. 006
均值 0. 179 ± 0. 142
车叶草苷酸平均含量为 0. 179 mg /mL，不同产品
间存在明显差异，Tht-1 含量最高，达到了 0. 341 mg /
mL，而 Tht-3 含量最低，仅为 0. 076 mg /mL。
2. 5 不同产地诺尼果汁车叶草苷酸含量比较
如表 7 所示，与文献报道相比，我国西沙诺尼果
汁车叶草苷酸含量仅次于斐济，与泰国产品相当，但
明显高于大溪地、澳大利亚、库克、德国和大西洋等产
地。
表 7 不同产地诺尼果汁车叶草苷酸含量
Table 7 Contents of asperulosidic acid in noni juice
from different areas
诺尼果汁 车叶草苷酸 /(mg·mL －1)
西沙 0. 218
库克岛［10］ 0. 056
大西洋［10］ 0. 012
大溪地［10］ 0. 148
澳大利亚［10］ 0. 122
泰国［10］ 0. 220
斐济［10］ 0. 294
德国［10］ 0. 005
西班牙［10］ 0. 022
3 讨论
本试验建立了一种高效液相色谱分析方法，用于
测定西沙诺尼果汁中车叶草苷酸的含量。采用
Shim-pack VP-ODS-C18(250 mm × 4. 6 mm，5 μm)色
谱柱，乙腈-冰醋酸水溶液为流动相，流速为 1. 0 min /
mL，检测波长为 230 nm。在此色谱条件下，车叶草苷
酸分离度较好，且平均回收率为 99. 75 %，ＲSD 值为
2. 25 %。该方法简单、实用，且准确度较高，重复性好。
采用建立的 HPLC方法，分别对我国西沙和大溪
地诺尼果汁车叶草苷酸含量进行了检测，西沙和大溪
地诺尼果汁车叶草苷酸平均含量分别为 0. 218 和
0. 179 mg /mL。与文献报道相比［10］，我国西沙诺尼
果汁车叶草苷酸含量较高，高于大溪地、澳大利亚、库
克、德国和大西洋等产地。
车叶草苷酸是植物代谢产生的环烯醚萜类活性
物质，环烯醚萜类物质在酸性介质和高温条件下不稳
定，置于塑料容器中也易发生变化，但对光并不敏
感［11］。实验中发现，不同批次西沙诺尼果汁车叶草
苷酸含量存在一定波动性，大溪地不同产品间车叶草
苷酸含量差异显著，推测原因可能与诺尼果汁总酸含
量较高、发酵工艺、灭菌方式和储藏方法等因素有关。
参 考 文 献
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Morinda citrifolia L．(noni)on the immune system:its mo-
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Determination of asperulosidic acid in Noni fresh fruit and juice by HPLC
CHEN Jian-guo，ZHANG Lu，LI Xue，LI Jin-xia，CHENG Chi
(China National Ｒesearch Institute of Food and Fermentation Industries，Beijing 100015，China)
ABSTＲACT An analytical method of asperulosidic acid in Noni juice was established by HPLC． The separation was
performed on a Shim-pack VP-ODS C18 column (250 mm × 4． 6 mm，5 μm)with acetonitrile-acetic acid aqueous as
mobile phase at flow rate of 1. 0 mL /min and detection wave length at 230 nm． Asperulosidic acid was successfully
separated． The calibration curve of asperulosidic acid was linear in concentration range of 5 ～ 50 μg /mL and the de-
tection limit 0. 08 μg /mL． The average recoveries and ＲSD were 99. 75 % and 2. 25 % ． The mean content of asperu-
losidic acid in Xisha and Tahiti Noni juice were 0. 218 and 0. 179 mg /mL．
Key words Xisha noni，HPLC，noni juice，asperulosidic acid，

Tahiti
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Analysis of volatile constituents in Hunan Jiangyong pomelo peels
by auto-headspace solid-phase micro-extraction
WEI Wei-wei1，YANG Hua-wu1，YANG Ya-kun2
1(Technical Center of China Tobacco Hunan Industrial Corporation，Changsha 410007，China)
2(Changsha Experimental High School，Changsha 410001，China)
ABSTＲACT The volatile constituents was analyzed by combining Headspace Solid Phase Microextraction (HS-
SPME)and gas chromatography mass spectrometry (GC-MS )，The effect of different SPME fibers，extraction time
and extraction temperature on the analysis result were investigated by using orthogonal experimental design． Based on
the analysis of Gaschromatography-Mass Spectrometry(GC-MS) ，The 59 volatile flavor components were separated
and identified，and the main volatile components were D-Limonene(80. 37%) ，Nootkatone(6． 07%) ，β-Pinene
(1. 99%) ，Eremophilene(1． 40%)which were comprised 99． 45% of the total peak areas．
Key words Jiangyong Pomelo shaddock，HS-SPME，orthogonal experimental design，GC-MS