全 文 ：HPLC测定不同产地异叶青兰中
齐墩果酸和乌苏甲酯的含量
罗智敏1 , 2 , 文怀秀1 , 赵晓辉1 , 陶燕铎 1
(1.中国科学院西北高原生物研究所 , 西宁 810008;2.中国科学院研究生院 , 北京 100049)
摘　要:分析不同产地异叶青兰中齐墩果酸和乌苏甲酯的含量 , 为异叶青兰药
材的质量标准建立提供参考。采用 RP-HPLC分析 , Gimini C18反相柱;V(甲醇)∶
V(0.1%冰乙酸溶液)=86∶14为流动相 , 检测波长210 nm 。9批不同产地的异叶
青兰中齐墩果酸和乌苏甲酯含量分别介于 0.621 ～ 1.570 mg g 和 4.806 ～ 7.882
mg g 。该方法操作简便 , 结果稳定可靠 , 可用于异叶青兰的质量评价 。
关键词:异叶青兰;RP-HPLC;齐墩果酸;乌苏甲酯
　　异叶青兰是唇形科青兰属植物 Dracocephalum
heterophyllum Benth., 又名白花枝子花 , 分布于青
海 、甘肃 、新疆 、西藏及四川等地 , 生长在海拔
2600 ～ 3100 m的林缘 、山坡灌丛间及草地上[ 1] 。其
化学成分主要包括挥发油类 、黄酮及黄酮苷类 、
植物甾醇及三萜类 、有机酸及其酯类等 , 此外 , 还
含有多种人体生命活动所必需的氨基酸 、微量元
素等[ 2 ～ 6] 。藏药以全草入药 , 药用名为白花夏枯
草 、白甜蜜蜜 , 有平肝 、清热作用 , 可治高血压 、
淋巴结炎 、支气管炎等多种病症[ 7 , 8] ;药理实验证
实异叶青兰有抑菌作用[ 9] , 同时已有研究证明异
叶青兰对HSV-2 病毒的吸附有抑制作用[ 10] , 可能
对生殖器疱疹 、阴道炎 、脑炎 、角膜炎及宫颈癌的
治疗有重要意义 。因此有必要对异叶青兰药材的
质量控制做一研究。
1　实验部分
1.1　仪器 、试剂及药材
美国Agilent 1200型高效液相色谱仪[四元梯
度泵 , DAD 检测器 , Agilent 1200 色谱工作站;
AG204电子分析天平 。
齐墩果酸对照品(中国药品生物制品检定所 ,
批号 110709-200304);乌苏甲酯对照品(自制 , 经
面积归一化法测定纯度为 99.0%, 批号 200712);
甲醇(merck HPLC级);超纯水;乙醇 、石油醚 、冰
乙酸均为分析纯。
异叶青兰药材:共9批 , 分别采自于青海省的
门源 、海晏 、平安 、大通 、民和 、互助 、化隆 、乐
都 、刚察 9个县异叶青兰全草(见表 1), 经中国科
学院西北高原生物研究所高级工程师梅丽娟鉴定
为异叶青兰 Dracocephalum heterophyllum Benth.。
表 1　样品信息表
编号 产地及来源
1
2
3
4
5
6
7
8
9
门源
海晏
平安
大通
民和
互助
化隆
乐都
刚察
2　结果与讨论
2.1　色谱条件
Gimini C18反相柱(4.6 mm×250 mm , 5 μm);
流动相:V(甲醇)∶V(0.1%冰乙酸水溶液)=86∶
14;体积流量:1 mL min;柱温:25 ℃;检测波长:
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第 28卷增刊
2009年 5 月 　　　　　　　　　　　　 分析试验室Chinese Journal of Analysis Laboratory　　　　　　　　　　　　Vol.28.Suppl.2009-5
基金项目:国家科技攻关(0713351611)项目资助
作者简介:罗智敏(1984-), 女 , 硕士研究生;E-mail:luozm0930@163.com
DOI :10.13595/j.cnki.issn1000-0720.2009.0376
210 nm;进样量:10 μL。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取干燥至恒重的齐墩果酸对照品 12.0
mg , 置于 10 mL容量瓶中 , 加入适量甲醇溶解 , 定
容至刻度 , 摇匀即得 1.2 mg mL 齐墩果酸对照品
储备液;精密称取干燥至恒重的乌苏甲酯对照品
17.0 mg , 置于10 mL 容量瓶中 , 加入适量甲醇溶
解 , 定容至刻度 , 摇匀即得 1.7 mg mL 乌苏甲酯对
照品储备液;精密吸取齐墩果酸和乌苏甲酯储备
液各 1 mL , 甲醇定容至 10 mL 容量瓶中 , 摇匀得
齐墩果酸0.12 mg mL 和乌苏甲酯 0.17mg mL的混
合对照品溶液 , 待用。
2.3　样品溶液的制备
各批异叶青兰药材于 80 ℃下恒温干燥 6 h ,
粉碎 , 分别精密称取异叶青兰粉末 1.0 g (过 40
目), 置具塞三角烧瓶中 , 加入甲醇 20mL , 超声提
取1 h , 放冷 , 滤过 , 滤渣再加入少量甲醇 , 超声
洗涤 2次 , 合并滤液至 25 mL 容量瓶中 , 甲醇定容
摇匀 , 0.45μm 微孔滤膜过滤 , 取续滤液待测。
2.4　标准曲线及线性范围
精密吸取混合对照品溶液 6 、8 、 10 、 12 、14μL
依次进样 , 按 2.1色谱条件测定峰面积 , 以峰面积
为纵坐标(Y), 进样量为横坐标(X), 进行线性拟
合 , 得齐墩果酸回归方程为 y =802.36x+19.985 ,
r=0.9999 , 乌苏甲酯回归方程为 y =328.81x -
102.197 , r=0.9998 , 结果表明当齐墩果酸进样量
在 0.72 ～ 1.68μg 范围内 、乌苏甲酯进样量在1.02
～ 2.38 μg范围内 , 线性关系良好。
2.5　稳定性试验
取异叶青兰样品 1 , 按 2.3项下方法配制成溶
液 , 分别在 0 、 3 、6 、 9 、12 h 后在上述色谱条件下
进样 , 结果齐墩果酸峰面积 RSD为 1.79%, 乌苏
甲酯峰面积 RSD为 1.26%, 表明样品溶液在 12 h
内稳定。
2.6　精密度试验
取 2.5项下异叶青兰溶液 , 连续进样 5次 , 结
果齐墩果酸峰面积的 RSD为 0.97%, 乌苏甲酯峰
面积 RSD为 1.9%, 精密度良好。
2.7　重复性试验
精密称取异叶青兰样品 1共5份 , 每份 1.0 g ,
分别按照 2.3项下方法配成溶液 , 精密吸取 10 μL
进样分析 , 齐墩果酸峰面积 RSD为 2.1%(n=5),
乌苏甲酯峰面积 RSD为 2.5%(n=5), 方法重复
性较好。
2.8　加样回收率试验
精密称取已知齐墩果酸和乌苏甲酯含量的异
叶青兰药材 5份 , 每份 1.0 g , 加入混合对照品溶
液 10 mL , 制备样品溶液。精密吸取 10μL进样分
析 , 计算平均加样回收率 , 结果见表2 。
表 2　异叶青兰中齐墩果酸和乌苏甲酯加样回收率
测定成分 样品含量 mg 加入量 mg 测得量 mg 回收率 % 平均值 % RSD %
齐墩果酸
1.087
1.084
1.088
1.085
1.086
1.200
2.289
2.277
2.312
2.305
2.351
100.1
99.7
101.1
100.9
102.8
100.9 1.2
乌苏甲酯
6.057
6.108
6.201
6.090
6.112
1.700
7.743
7.885
8.191
7.954
7.999
99.8
100.9
103.7
102.1
102.4
101.8 1.5
2.9　样品含量测定
分别精密吸取样品溶液和混合对照品各 10
μL , 注入高效液相色谱仪中 , 按2.1项下色谱条件
测定 , 测定峰面积积分值 , 按外标法计算样品溶
液中齐墩果酸和乌苏甲酯含量 , 结果见表 3 , 样品
溶液及对照品色谱图见图 1。
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图 1　样品及对照品色谱图
(a)对照品;(b)供试品;1-齐墩果酸;2-乌苏甲酯
表 3　样品中齐墩果酸和乌苏甲酯的质量分数
样品来源 齐墩果酸 % 乌苏甲酯 %
1 1.087 6.057
2 0.790 5.090
3 1.154 5.900
4 0.621 4.806
5 0.981 5.332
6 1.037 7.404
7 0.742 5.260
8 0.647 5.722
9 1.570 7.882
3　讨论
3.1　提取溶剂和提取方法的优化
根据齐墩果酸和乌苏甲酯的溶解性选用甲醇 、
乙醇作为溶媒进行提取溶剂的选择 (无水乙醇 、
60%甲醇 、80%甲醇 、甲醇), 并对不同提取时间
(30 , 60 , 90 min)和不同提取方法(超声 、石油醚处
理后超声 、回流及冷浸)进行比较 , 结果显示甲醇
60 min超声提取有利于处理 , 且齐墩果酸和乌苏
甲酯测得含量高 。
3.2　不同波长 、流速和柱温的考察
采用二极管阵列检测器 , 对190 ～ 400 nm扫描
的各波长下的色谱图进行分析比较 , 齐墩果酸和
乌苏甲酯甲醇溶液最大吸收波长为 205 nm , 在此
检测波长下 , 流动相中甲醇的紫外吸收干扰较大 ,
基线不稳 , 考虑到在低波段溶剂的干扰 , 实验确
定检测波长为 210 nm;同时对不同流速(0.8 , 0.9 ,
1.0 mL min)及不同柱温(25 , 30 , 35 , 40 ℃)进行考
察 , 最后选定在 210 nm 波长 、 25 ℃和 1.0 mL min
条件下齐墩果酸和乌苏甲酯出峰效果好。
3.3　流动相的选择
用甲醇-水 、甲醇-0.1%冰乙酸水溶液 、乙腈-
0.1%冰乙酸水溶液作为流动相 , 结果显示甲醇-
水流动相下齐墩果酸和乌苏甲酯分离效果及峰形
不好;由于酸水可防止拖尾且有助于峰形 , 而后
两种流动相效果差别又不大 , 因此选 V(甲醇)∶
V(0.1%冰乙酸)=86∶14作为流动相 。
参考文献
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博士学位论文.2007
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