全 文 ：第30卷第 11期　　　　　　　 　西 南 大学 学报(自然科学版)　　　　　　　　　　　2008年1 1月
Vol.30　No.11 Journal of Southw est Unive rsity (N atural Science Edi tion) N ov.　2008
文章编号:1673-9868(2008)11-0050-04
流动注射化学发光法测定秋水仙碱＊
荆海燕 , 　吕家根
陕西省生命分析化学重点实验室 , 西安 710062;陕西师范大学 化学与材料科学学院 , 西安 710062
摘要:甲醛存在时 , 高锰酸钾可在酸性介质中氧化秋水仙碱产生较强的化学发光.根据这一实验现象并结合流动
注射技术 , 建立了一种高锰酸钾-甲醛-秋水仙碱化学发光测定秋水仙碱的分析方法.在最优化条件下 , 化学发光强
度与秋水仙碱浓度在 1.0×10-7 ～ 6.0×10 -5 mol/ L 范围内呈线性关系.方法的检出限为 3.0×10-8 mo l/ L , 相对标
准偏差为 1.9%(c=1.0×10 -6mol/ L , n=11).该方法用于药物制剂中秋水仙碱含量的测定 , 其分析结果与药典方
法比较具有很好的一致性.
关　键　词:化学发光;流动注射;秋水仙碱;高锰酸钾;甲醛
中图分类号:O657.3 文献标识码:A
秋水仙碱(colchicine)是从百合科植物的球茎中分离而得到的一种卓酚酮类生物碱.秋水仙碱可以抑
制细胞的有丝分裂和 DNA 合成 , 常用于治疗痛风 , 并对某些恶性肿瘤有较好的疗效[ 1] .近年来随着人
们对其研究的不断深入 , 秋水仙碱在预防与治疗家族性地中海热 、肾脏淀粉样变 、某些皮肤病及纤维化
性疾病等方面均显示较好的应用前景[ 2] .目前测定秋水仙碱的分析方法主要有荧光光度法[ 3] 、阳极伏安
法[ 4] 、气相色谱法[ 5] 、高效液相色谱法[ 6-9] 、高效毛细管电泳法[ 10] 等.化学发光方法和其它方法比较具
有灵敏度高 、仪器设备简单(不需要单色器)以及快速等特点 , 已广泛用于药物分析[ 11-1 2] .文献中尚未见
用化学发光结合流动注射检测秋水仙碱的报道.实验研究发现 , 在甲醛存在的条件下 , 高锰酸钾可在酸性
介质中氧化秋水仙碱产生较强的化学发光 , 且发光强度与秋水仙碱浓度在一定浓度范围内呈线性关系.基
于以上实验结论 , 建立了一种流动注射化学发光检测秋水仙碱的分析方法.校准曲线的线性范围为 1.0×
10-7 ～ 6.0×10-5 mol/ L , 检出限为 3.0×10-8 mo l/L(3σ).对 1.0×10-6 mol/ L秋水仙碱进行 11次平行测
定 , 相对标准偏差(RSD)为 1.9%.将该方法用于药物制剂中秋水仙碱含量的测定 , 其分析结果与药典方法
比较具有很好的一致性.
1　实验部分
1.1　仪器与试剂
BPCL 超微弱发光分析仪(中国科学院生物物理研究所);T U-1901型紫外-可见分光光度计(北京普
析通用分析仪器有限公司);HL-2恒流泵(上海青浦沪西仪器厂);0.01 mol/L 的 KMnO 4 储备液;H2 SO 4 ,
H 3PO 4 , HNO 3 , HCl;甲醛(西安化学试剂厂);0.005 mol/L 的秋水仙碱标准溶液:准确称取秋水仙碱对照
品(西安冠宇生物技术有限公司)0.049 9 g 用水溶解于 25 mL容量瓶中并定容;秋水仙碱片剂样品:①云
南玉溪望子隆生物制药有限公司 , ②云南植物药业有限公司 , ③西双版纳药业有限公司;所有试剂均为分
析纯 , 所用水为二次蒸馏水.
＊收稿日期:2007-12-17
基金项目:国家自然科学基金资助项目(20675050).
作者简介:荆海燕(1982-), 女 , 山西汾阳人, 硕士研究生 , 主要从事药物分析研究.
通讯作者:吕家根 , 教授 , 博士生导师.
DOI :10.13718/j.cnki.xdzk.2008.11.020
a.样品;b.载流水;c.H2SO 4+甲醛;d.KMnO 4;P1 、 P2.蠕动泵;
V.进样阀;F.流通池;PMT.光电倍增管;HV.负高压:700;PC.计算机.
图 1　化学发光 流动注射测定秋水仙碱的流路图
1.2　实验方法
按图 1 所示流路 , 采用聚四氟乙烯管
(0.8 mm i.d)连接管路.开启蠕动泵 , 将
水 、H 2SO4 +甲醛溶液 、 KMnO4 溶液分别
由 b , c , d 管泵入流路 , 待基线稳定后 , 由 a
管载入不同浓度的秋水仙碱溶液 , 经注射后
与试剂溶液混合反应产生化学发光 , 在流通
池处检测化学发光信号 , 分别记录空白和试
样峰高 , 以其差值定量.
2　结果与讨论
2.1　介质酸度的影响
前期实验表明 , 高锰酸钾-甲醛-秋水仙碱化学发光反应需要在酸性介质中进行.以 1.0×10-6 mo l/L
的秋水仙碱标准溶液为对象 , 考察了 H 2SO 4 , H3 PO 4 ,HNO 3 , HCl对化学发光强度的影响.实验结果表明 ,
在 H 2SO4 介质中信噪比(S/ N)最大 , 故选 H2 SO 4 作为反应介质.进一步考察了在 1 ～ 6 mol/ L范围内 , 硫
酸浓度对化学发光强度的影响.实验结果见图 2 , 在较低硫酸浓度时 , S/N 随着硫酸浓度的增加而增加 ,
但当硫酸浓度超过 4 mo l/L 时 S/ N下降 , 故选择 H 2SO 4 浓度为 4 mol/L.
2.2　KMnO4 浓度的影响
实验研究发现 , KMnO 4 浓度是影响秋水仙碱化学发光检测的一个重要因素.KMnO 4在化学发光反应
中是氧化剂 , 其浓度的大小直接影响反应的化学发光强度.以 1.0×10-6 mo l/L 的秋水仙碱标准溶液为对
象 , 实验考察了在 1.0×10-4 ～ 1.0×10-2 mol/ L范围内 , KMnO 4 浓度对化学发光强度的影响 , 实验结果
见图 3 , 化学发光强度随 KMnO 4 浓度增加先上升后下降 , 当 KMnO 4 浓度为 3.0×10-3 mo l/L 时 , 可获得
最大的 S/ N , 故选用该浓度作为最佳浓度.
图 2　H2SO4 浓度对发光强度的影响 图 3　KMnO4 浓度对发光的影响
图 4　甲醛浓度对发光强度的影响
2.3　甲醛浓度的影响
当没有甲醛存在时 , KMnO4 氧化秋水仙碱的化学
发光信号非常微弱 , 甲醛的存在可显著增强化学发光强
度 , 因此甲醛在此反应中是增敏剂.以 1.0×10-6 mol/ L
的秋水仙碱标准溶液为对象 , 实验考察了在 1.2%～
3.2%浓度范围内 , 甲醛浓度对化学发光强度的影响.如
图 4所示实验结果 , 当甲醛浓度为 2%时 , 可获得最大的
S/ N , 故选用该浓度作为最佳浓度.
2.4　流速的影响
在流动注射-化学发光分析体系中 , 流速是一个影响
分析特性的重要因素.以 1.0×10-6 mol/L 的秋水仙碱标准溶液为对象 , 对载流流速在 0.84 ～ 2.24 mL/min
51第 11期　　　　　　　　　　荆海燕 , 等:流动注射化学发光法测定秋水仙碱
范围内进行了考察 , 对试剂(H 2SO4 +甲醛 , KMnO4)流速在 0.13 ～ 1.36 mL/min的范围进行了考察.实验结
果表明 , 当载流流速为 1.43 mL/min , 试剂流速为 0.51 mL/min , 可获得最大的 S/N , 因此选择载流流速
为 1.43 mL/min , 试剂流速为 0.51 mL/min.
2.5　分析特性
在以上选定的最优实验条件下 , 化学发光强度与秋水仙碱浓度在 1.0×10-7 ～ 6.0×10-5 mol/L 范围
内呈线性关系 , 回归方程为 ΔI=(22.1±0.8)c+33.8(±1.3), (c为秋水仙碱浓度 , 单位为 10-6 mol/ L),
r
2 =0.994 8.对 1.0×10-6 mo l/L 的秋水仙碱进行连续 11次平行测定 , 相对标准偏差为 1.9%.根据 IU-
PAC的建议(3σ), 计算得到方法的检出限为 3.0×10-8 mo l/L .
2.6　共存物质的影响
实验考察了一些可能的共存物质对化学发光检测的干扰.以 1.0×10-6 mol/L 的秋水仙碱标准溶液为
对象 , 允许干扰物产生的测量误差在±5%以内时 , 1000倍 PO 4 3- , K + , Na+ , Cl- , SO 4 2- , Ca2+ , NH 4 + ,
Mg
2+ , 500倍的淀粉 , 葡萄糖 , 100 倍的 Co2+ , 蔗糖 , 果糖 , 10倍的 Al3+ , Zn2+ , 5倍的 CO 3 2- , 1倍的
Fe
3+ , Cu2+ , 尿素 , 0.1倍的尿酸不干扰测定.进一步的实验发现 , 以 1.0×10-3 mol/L NaF 作为掩蔽剂 ,
100倍的 Fe3+ , Cu2+不干扰测定.
2.7　样品分析
取秋水仙碱药片 20片 , 准确称量后研细混匀.取相当于2片药片质量的药粉 , 用水溶解并定容于100 mL
容量瓶中 , 经过滤后备用.根据实验需要逐级稀释至可测量的浓度范围 , 按 1.2所述操作方法对片剂中秋
水仙碱含量进行测定.按照药典方法[ 13] 对同一对象进行分析 , 结果见表 1.t检验和F 检验表明 , 两种方法
的测定结果在 95%置信水平上准确度和精密度无显著性差异.同时进行了药物制剂的标准加入回收实验 ,
结果见表 2.
表 1　片剂中秋水仙碱的分析结果
样品批号
(mg/片 , t0.05 , 4 =2.78)
本方法
(n=5)
药典方法
(n=5)
t检验
t
t 表值[ 14]
(a=0.05 , f=8)
F 检验
F
F 表值[14]
(a=0.05 , f 1 =4 , f 2 =4)
1(20070501) 0.508±0.008 0.502±0.005 1.86 2.31 2.32 6.39
2(20070401) 0.505±0.015 0.509±0.010 0.63 2.31 2.10 6.39
3(070507) 0.498±0.019 0.493±0.009 0.67 2.31 4.01 6.39
表 2　回收率实验结果
样品批号 初始浓度/(mol· L -1)
加入浓度
/(mo l· L-1)
测得浓度
/(mo l· L-1)
回收率
/ %(n=3)
RSD
/ %(n=3)
1(20070501) 8.7×10 -7 2.0×10 -6 2.08×10-6 104 1.7
2(20070401) 1.5×10 -6 8.0×10 -7 8.06×10-7 100.6 3.2
3(070507) 6.0×10 -7 9.0×10 -7 8.79×10-7 97.7 2.3
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A Flow-Injection Chemiluminescence Method
for the Determination of Colchicine
JING Hai-yan , 　LV Jia-gen
Key Laboratory of Analytical Chemistry for Life Science of Shanxi Province , Xian 710062 , China;
Shanxi Normal University , Xian 710062 , China
Abstract:A chemilum inescence (CL)method for the determination of colchicine is propo sed , which is
based on the enhancement ef fect of formaldehyde on the w eak emission produced by po tassium permanga-
nate o xidation on colchicine in acidic media.The optimum conditions fo r this chemiluminescent reaction are
studied in detail by a flow injection sy stem.Under optimum conditions , the method allow s the measure-
ment of colchicine in the range o f 1.0×10-7 mol/ L ～ 6.0×10-5 mo l/L with a detection limi t(3σ)of 3.0×
10
-8
mo l/L .The relative standard deviation is 1.9 %(n=11)fo r 1.0×10-6 mol/ L co lchicine standard.
The proposed method has been applied to the determination of co lchicine in pharmaceutical fo rmulation and
the analy sis results agree w ell w ith those f rom of ficial method.
Key words:chemilumine scence;f low inject ion;colchicine;po tassium permanganate;fo rmaldehyde
责任编辑　潘春燕　　　　
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