全 文 ：收稿日期:2011-06-03
作者简介:袁霞(1964-) ，女(汉族) ，辽宁本溪人，副教授，主要从事中医药理论及中药质量标准研究，Tel． 024-
25826141，E-mail yuanxia1233@ 163． com。
文章编号:1006-2858(2012)01-0036-03
RP-HPLC法测定刺五加中紫丁香苷和
异秦皮啶的含量
袁 霞，刘唯芬，张艳君
(沈阳药科大学 高等职业技术学院，辽宁 沈阳 110026)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定刺五加中紫丁香苷和异秦皮啶的含量。方法 采用 Kromasil
C18色谱柱(250 mm × 4. 6 mm，5 μm) ;流动相为乙腈(A)-体积分数为 1%乙酸水溶液(B) ，梯度洗
脱;流速为 1. 0 mL·min －1;检测波长为 265 nm(0 min) ，341nm(11 min)。结果 紫丁香苷和异秦皮
啶质量浓度分别在 26. 0 ～ 435 mg·L －1(r = 0. 999 7)和 0. 270 ～ 4. 50 mg·L －1(r = 0. 999 6)内与峰面
积呈良好的线性关系;平均回收率分别为 98. 01%(RSD = 1. 2%，n = 6)和 97. 53%(RSD = 1. 1%，n
= 6)。结论 该方法可同时测定刺五加药材中紫丁香苷和异秦皮啶的含量。
关键词:高效液相色谱法;刺五加;紫丁香苷;异秦皮啶;含量测定
中图分类号:R 917 文献标志码:A
刺五加为五加科植物刺五加(Acanthopanax
sentcosus(Rupr． et Maxim．)Harms)的干燥根及根
茎或茎［1］，为常用传统中药。紫丁香苷和异秦皮
啶是刺五加的主要有效成分［2］，《中华人民共和
国药典》中以紫丁香苷为指标控制含量，并采用
薄层色谱法鉴别异秦皮啶。有文献报道采用高效
液相色谱法分别测定刺五加中紫丁香苷［3］及异秦
皮啶含量［4 － 5］，未有同时测定二者含量的报道。为
了更方便有效地控制刺五加质量，建立了同时测定
刺五加中紫丁香苷和异秦皮啶含量的方法。紫丁
香苷和异秦皮啶的化学结构式见图 1。
Fig． 1 Structures of syringin(a)and isofraxidin(b)
图 1 紫丁香苷(a)和异秦皮啶(b)的化学结构式
1 仪器与材料
Agilent 1100 高效液相色谱(美国安捷伦公
司) ，KQ-400KDE超声波清洗器(常州诺基仪器有
限公司) ，AGBP210S 电子分析天平(上海伦捷仪
表有限公司)。
紫丁香苷对照品(批号 110860-200407)、异
秦皮啶对照品(批号 110837-200304) (中国药品
生物制品检定所) ，乙腈(色谱纯，天津康科德科
技有限公司) ，其他试剂(分析纯，市售)。
收集刺五加药材共 3 批，产地为辽宁千山、内
蒙、安徽亳州，经沈阳药科大学高等职业技术学院
徐世义教授鉴定为五加科植物刺五加(Acantho-
panax senticosus(Rupr． et Maxim．)Harms)的干燥
根茎。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件及系统适用性试验
色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm × 4. 6 mm，
5 μm) ;流动相:乙腈(A)-体积分数为 1%乙酸溶
液(B) ，梯度洗脱为 0 ～ 8 min 90% ～ 83% B，8 ～
12 min 83% B，12 ～ 17 min 83% ～ 80% B，17 ～
30 min 80% ～65% B;检测波长:265 nm(0 min) ，
341 nm(11 min) ;流速:1. 0 mL·min －1;柱温:30
℃;进样量:20 μL。在此色谱条件下样品各组分分
离良好，按紫丁香苷峰计算，理论塔板数不低于 6
000。对照溶液和供试溶液色谱图见图 2。
第 29 卷 第 1 期
2 0 1 2 年 1 月
沈 阳 药 科 大 学 学 报
Journal of Shenyang Pharmaceutical University
Vol. 29 No. 1
Jan． 2012 p. 36
DOI:10.14066/j.cnki.cn21-1349/r.2012.01.007
1—Syringin;2—Isofraxidin
Fig． 2 Chromatograms of negative sample(A)，control
solution(B)and sample solution(C)
图 2 阴性样品(A)，对照溶液(B)和供试溶液(C)色谱图
2. 2 对照储备液的制备
取紫丁香苷和异秦皮啶对照品适量，精密称
定，加入体积分数为 75%乙醇溶液溶解并稀释至
刻度，摇匀，制成质量浓度分别为 870 mg·L －1和
9. 0 mg·L －1的对照储备液。
2. 3 供试溶液的制备
取刺五加药材粉末(过 355 μm 筛)约 10 g，
精密称定，置具塞棕色瓶中，加入体积分数为
75%乙醇溶液 50 mL，超声处理(60 ℃，250 V，
50 Hz)2 次，每次 40 min;过滤，合并提取液，减压
回收，浓缩液移至25 mL量瓶中，加体积分数
为 75%乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，过 0. 45 μm
微孔滤膜，取续滤液即得供试溶液。
2. 4 方法学考察
2. 4. 1 线性关系考察
精密量取紫丁香苷和异秦皮啶对照储备液
0. 3、0. 5、1、3、5 mL，置 10 mL量瓶中，加体积分数
为 75%乙醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，制备
系列标准溶液。取系列标准溶液各 20 μL 进样，
记录色谱峰面积。以对照品峰面积(A)为纵坐
标，以质量浓度(ρ，mg·L －1)为横坐标，绘制标准
曲线。以最小二乘法进行线性回归，紫丁香苷回
归方程为 A = 0. 988 1ρ + 0. 835 1，r = 0. 999 7;异
秦皮啶回归方程为 A = 65. 90ρ － 1. 456，r =
0. 999 6。结果表明，紫丁香苷质量浓度在 26. 0 ～
435 mg·L －1内、异秦皮啶质量浓度在 0. 270 ～
4. 50 mg·L －1内与峰面积呈良好的线性关系。
2. 4. 2 精密度试验
精密吸取混合对照溶液(紫丁香苷质量浓度
为 261 mg· L －1、异 秦 皮 啶 质 量 浓 度 为
2. 70 mg·L －1)20 μL，重复测定 6 次，记录色谱峰
面积。测得紫丁香苷峰面积的 RSD为 0. 72%，异
秦皮啶峰面积的 RSD为 1. 0%。表明仪器精密度
良好。
2. 4. 3 稳定性试验
取供试溶液，于棕色瓶内室温放置，分别于
0、2、4、6、8、12 h 后进样分析，记录色谱峰面积。
测得紫丁香苷峰面积的 RSD 为 1. 1%，异秦皮啶
峰面积的 RSD为 1. 4%。表明供试溶液室温放置
12 h稳定。
2. 4. 4 重复性试验
取同批样品 6 份，按“2. 3”条方法制备供试
溶液，按“2. 1”条色谱条件进样分析。计算紫丁
香苷和异秦皮啶的含量，结果见表 1。
Table 1 Reproducibility of syringin and isofraxidin in Acanthopanax senticosus(n =6)
表 1 刺五加药材中紫丁香苷和异秦皮啶的重复性试验结果(n =6)
No．
Syringin
Content /(μg·g －1) 珋x /(μg·g －1) RSD /%
Isofraxidin
Content /(μg·g －1) 珋x /(μg·g －1) RSD /%
1 771 2. 12
2 754 2. 15
3 768 752 1. 9 2. 10 2. 16 2. 0
4 745 2. 19
5 743 2. 21
6 734 2. 18
73第 1 期 袁 霞等:RP-HPLC 法测定刺五加中紫丁香苷和异秦皮啶的含量
2. 4. 5 回收率试验
精密称取已知含量的刺五加药材粉末 6 份，
每份各 5 g，分别加入质量浓度为 870 mg·L －1紫
丁香 苷 对 照 储 备 液 4 mL 和 质 量 浓 度 为
9. 0 mg·L －1异秦皮啶对照储备液 1. 5 mL，按
“2. 3”条方法制备供试溶液，按“2. 1”条色谱条件
进样分析，记录色谱图，测定加样回收率，结果见
表 2。
Table 2 Determination of syringin and isofraxidin recoveries in Acanthopanax senticosus
表 2 刺五加药材中紫丁香苷和异秦皮啶的回收率试验结果
Compound moriginal /mg madded /mg mfound /mg Recovery /% Average recovery /% RSD /%
Syringin 3. 878 3. 480 7. 216 95. 93
3. 833 3. 480 7. 241 97. 95
3. 795 3. 480 7. 222 98. 48 98. 01 1. 2
3. 923 3. 480 7. 369 99. 04
3. 720 3. 480 7. 163 98. 94
3. 885 3. 480 7. 286 97. 73
Isofraxidin 0. 011 2 0. 013 5 0. 024 3 97. 04
0. 011 0 0. 013 5 0. 024 4 96. 30
0. 010 9 0. 013 5 0. 024 0 97. 04 97. 53 1. 1
0. 011 3 0. 013 5 0. 024 6 98. 52
0. 010 7 0. 013 5 0. 024 1 99. 26
0. 011 2 0. 013 5 0. 024 3 97. 04
2. 5 样品含量测定
取 3 种不同产地的刺五加药材，各平行取样
2 份，按“2. 3”条方法制备供试溶液，按“2. 1”条
色谱条件进样分析，记录色谱图，按外标法计算样
品中紫丁香苷和异秦皮啶的含量，结果见表 3。
Table 3 Contents(c)determination of syringin and iso-
fraxidin in Acanthopanax senticosus
表 3 刺五加药材中紫丁香苷和异秦皮啶含量测定结果
Source
c /(μg·g －1)
Syringin Isofraxidin
Liaoning Qianshan 750 2. 16
Neimeng 420 1. 30
Anhui Bozhou 210 1. 12
3 讨论
a. 考察提取溶剂分别为甲醇、乙醇、体积分
数为 75%乙醇溶液、体积分数为 50%乙醇溶液对
含量测定的影响，结果表明体积分数为 75%乙醇
溶液提取组分含量较高，干扰少，峰形对称性好。
b. 刺五加中含游离型和结合型异秦皮啶(香
豆苷类)。试验样品未经水解，测定的是游离型
异秦皮啶的含量。作者考察了游离型异秦皮啶与
总异秦皮啶之间的相关性，发现二者有一定的正
比例关系，故而表明测定游离型异秦皮啶含量，在
一定程度上亦能控制药材的质量。
c. 产地来源不同的药材中 2 种有效成分的
含量差异较大。这可能与采收的药用部位有关，
产地为辽宁千山的刺五加主要为根及根茎;内蒙
的刺五加以茎为主;而安徽亳州的主要是去栓皮
的木质茎，其紫丁香苷的含量很低。
参考文献:
［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典:一部［M］．
北京:中国医药科技出版社，2010:192．
［2］刘起华，朱礼，李文兰．刺五加主要活性成分化学与
药理研究［J］． 时珍国医国药，1999，10(4) :305 －
306．
［3］车勇．高效液相色谱法测定刺五加中紫丁香苷含量
的研究［J］．时珍国医国药，2005，16(2) :115 － 116．
［4］赵陆华，屠颖，赵振宇，等． HPLC 测定五加软胶囊中
异秦皮啶含量［J］．中草药，2003，34(10) :911 － 912．
［5］刘起华，张萱，程会平．高效液相色谱法测定刺五加
浸膏中异秦皮啶的含量［J］．时珍国医国药，2006，17
(9) :Ⅱ．
(下转至第 44 页)
83 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 29 卷
FAN Rong-hua，ZHAO Yun-li，SU Chang，XIE Yao，YAN Jing-jing，YU Zhi-guo
(School of Pharmacy，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110016，China)
Abstract:Objective To develop a method based on cloud-point extraction(CPE)for the determination of
isorhamnetin-3-O-β-D-glucoside，rhamnazin-3-O-β-D-glucoside，rhamnazin-3-O-β-D-(6″-β-hydroxy-β-meth-
ylglutaryl)-glucoside in the Viscum coloratum(Komar．)Nakai by HPLC-UV． Methods The non-ionic sur-
factant Triton X-114 was chosen as the extract solvent and various experimental conditions were investigated
to optimize the extraction process． Under optimum conditions，the extracts were analyzed by reverse-phase
column． Acetonitrile and 0. 5% acetic acid were used as the mobile phase under gradient conditions． The
flow rate was 1. 0 mL·min －1 and the UV detection wavelength was set at 358 nm． Results All calibration
curves showed good linearity(r ＞ 0. 999)within test ranges． The recoveries，measured at three concentration
levels，varied from 93. 2% to 95. 6% ． Conclusions The developed and validated methods are simple，accu-
rate and can be selected as the techniques for separation and quantification of the three flavonones in the Vis-
cum coloratum(Komar．)Nakai．
Key words:cloud-point extraction;Triton X-114;HPLC-UV;flavonone;

content determination
(上接第 38 页)
Determination of syringin and isofraxidin in Acantho-
panax senticosus(Rupr． et Maxim．)Harms by RP-
HPLC
YUAN Xia，LIU Wei-fen，ZHANG Yan-jun
(School of Vocational and Technology，Shenyang Pharmaceutical University，Shenyang 110026，China)
Abstract:Objective To develop an HPLC method for determination of syringin and isofraxidin in Acantho-
panax senticosus by RP-HPLC．Methods The chromatographic separation was carried out on a Kromasil C18
column(250 mm ×4. 6 mm，5 μm)． The mobile phase consisted of acetonitrile and 1% acetic acid with gra-
dient elution was used;the flow rate was 1. 0 mL·min －1 ． The UV detector was set at 265 nm(0 min)and
341 nm(11 min)． Results A good linear relationship of syringin was in the range of 26. 0-435 mg·L －1(r =
0. 999 7)and that of isofraxidin was in the range of 0. 270-4. 50 mg·L －1(r = 0. 999 6)． The average recov-
eries of syringin and isofraxidin were 98. 01%(RSD =1. 2%，n = 6)and 97. 53%(RSD =1. 1%，n = 6) ，re-
spectively ． Conclusions The method is suitable for the simultaneous determination of syringin and isofraxidin
in Acanthopanax senticosus．
Key words:HPLC;Acanthopanax senticosus;syringin;isofraxidin;content determination
44 沈 阳 药 科 大 学 学 报 第 29 卷