全 文 ：高效液相色谱法测定不同方法提取非洲马铃果中的柳叶水甘草碱
王 荣， 李多伟*
(西北大学生命科学学院，陕西 西安 710069)
收稿日期:2011-05-16
作者简介:王 荣 (1984—) ，女，硕士生，从事天然药物的研究与应用。Tel:13991148105，E-mail:610671217@ qq. com
* 通信作者:李多伟 (1959—) ，男，副教授，硕士生导师，从事天然药物的研究与应用。Tel:13227796618，E-mail:duoweili@ 163. com
摘要:目的 建立测定非洲马铃果中柳叶水甘草碱的高效液相色谱法，比较不同方法提取非洲马铃果中柳叶水甘草碱
含有量的差异。方法 色谱柱为 Inertsil C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相为乙腈-0. 1 mol /L 碳酸铵溶液
(7 ∶ 3，v /v) ，检测波长 275 nm，体积流量 1. 2 mL /min。结果 柳叶水甘草碱在 0. 02 ～ 0. 2 mg /mL 范围内与峰面积积
分值线性关系良好 (r = 0. 999 5) ，平均加样回收率为99. 58% (n = 5) ，相对标准偏差 (RSD)为0. 45%。以正己烷
热回流法提取的非洲马铃果中柳叶水甘草碱含有量较高且杂质较少。结论 用该法测定了不同方法提取非洲马铃果中
柳叶水甘草碱的含有量，方法准确、快速、简便。
关键词:高效液相色谱法;非洲马铃果;柳叶水甘草碱;提取
中图分类号:R284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2012)07-1391-03
非洲马铃果 Voacanga africana Stapf 又名非洲伏康树、
非洲沃坎加树，是一种产自非洲的夹竹桃科植物。这种植
物在新几内亚、印度尼西亚和菲律宾被记录过，它被描述
为在亚洲很普遍，而且是最容易变异的种类。国外研究发
现，非洲马铃果的提取物对体外大鼠臂旁核神经元兴奋和
突触传递具有调节作用［1］，其树皮提取物对实验性胃溃疡
大鼠有抗溃疡效应［2］，对 62. 5% ～ 87. 5%的小鼠的惊厥及
转向行为紊乱有抑制作用［3］。近年来，对非洲马铃果药用
价值的研究认为，非洲马铃果提取物可用于治疗中风后遗
症、缺血性高血压脑病等，还有提高记忆力，改善视力，
抗衰老等作用。因此，近年来非洲马铃果的应用价值受到
越来越广泛的关注。
柳叶水甘草碱 (Tabersonine)又名它波宁，是非洲马
铃果中的一种单吲哚类生物碱，属长春花属生物碱中的白
坚木碱型。分离纯化的柳叶水甘草碱为油状液体，弱碱
(pKa = 5. 77) ，分子式为 C21H24 N2O2;猫体试验结果显示，
柳叶水甘草碱有降血压的作用，其强度为利血平的
25%［4］。柳叶水甘草碱作为重要药物长春胺的合成前
体［5］，具有重要的开发利用价值。长春胺可用于治疗慢性
缺血性脑血管病、脑梗塞、老年痴呆等症［6-8］，具有活血降
压、改善视力、抗衰老和抗氧化等作用［9-11］。目前，长春
胺虽已可人工全合成，但以柳叶水甘草碱为前体半合成长
春胺的思路，启发了一种长春胺获得的新途径。又因柳叶
水甘草碱在非洲马铃果中的含有量相对较高，可达到
2%［12］，且市面上对其需求日益增加，因此可通过从非洲
马铃果中提取来进行工业生产。本实验致力于建立一种准
确、高效、快捷的柳叶水甘草碱测定方法，以期为柳叶水
甘草碱的测定提供科学有效的检测手段，并对提取条件做
优化筛选，为实际生产提供引导。
1 仪器与试药
岛津 LC—20A型高效液相色谱系统:包括 LC—20AT
型高压恒流泵、SPD—20A 检测器和 LC Solution 工作站;
柳叶水甘草碱对照品 (美国 Sigma公司) ;非洲马铃果 (英
杰华纳生物工程有限公司) ;乙腈为色谱纯，其他试剂均
为国产分析纯，水为二次蒸馏水，流动相经过 0. 45 μm 微
孔滤膜滤过。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 Inertsil C18色谱柱 (4. 6 mm × 250 mm，5
μm) ;流动相为乙腈-0. 1 mol /L 碳酸铵溶液 (7 ∶ 3，v /v) ;
体积流量 1. 2 mL /min;检测波长 275 nm;柱温为室温;进
样量 20 μL。在该色谱条件下，柳叶水甘草碱的保留时间
约为 15 min，色谱见图 1。
图 1 高效液相色谱图
A． 柳叶水甘草碱对照品 B． 样品 1． 柳叶水甘草碱
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2. 2 色谱条件优选 本实验对比了 0. 7 mL /min，1. 0 mL /
min和 1. 2 mL /min 3 种体积流量下柳叶水甘草碱的分离效
果，结果表明体积流量对柳叶水甘草碱的峰形影响不大，
只对保留时间有较大的影响。在 0. 7 mL /min体积流量下样
品中柳叶水甘草碱出峰时间大约在 26 min 左右，1. 0 mL /
min体积流量下保留时间约为 18 min，而在 1. 2 mL /min 体
积流量下保留时间约为 15 min。本实验选择体积流量为 1. 2
mL /min。
2. 3 对照品溶液的制备 精密称取柳叶水甘草碱对照品
0. 050 0 g，置 50 mL 量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，
摇匀，制成质量浓度为 1 mg /mL 的对照品溶液，贮存
备用。
2. 4 样品溶液的制备
2. 4. 1 冷浸提取 准确称取 5. 00 g非洲马铃果粉末 12 份，
分别浸于 50 mL 95%甲醇、95%乙醇、正己烷和石油醚中，
每种溶剂 3 份。冷浸 24 h，过滤，滤液分别用各自溶剂定
容至 50 mL，贮存备用。
2. 4. 2 热回流提取 准确称取 5. 00 g 非洲马铃果粉末 12
份，分别浸于 50 mL 95%甲醇、95%乙醇、正己烷和石油
醚中，每种溶剂 3 份。热回流提取 1. 5 h，过滤，滤液分别
用各自溶剂定容至 50 mL，贮存备用。
2. 4. 3 超声提取 准确称取 5. 00 g非洲马铃果粉末 12 份，
分别浸于 50 mL 95%甲醇、95%乙醇、正己烷和石油醚中，
每种溶剂 3 份。超声法提取 30 min，过滤，滤液分别用各
自溶剂定容至 50 mL，贮存备用。
2. 5 供试品溶液的制备 精密吸取 2. 4 项中各样品溶液 1
mL，蒸干溶剂，分别加甲醇超声溶解并转移至 10 mL 量瓶
中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
2. 6 线性关系考察 分别精密吸取 2. 3 项中对照品溶液
0. 2、0. 4、0. 6、0. 8、1. 0、1. 2、1. 4、1. 6、1. 8、2. 0 mL
定容至 10 mL。按 2. 1 项中色谱条件测定，以对照品质量
浓度为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，
得回归方程:Y = 15 749X － 1 092，r = 0. 999 5，线性范围
为 0. 02 ～ 0. 2 mg /mL。
2. 7 精密度试验 精密吸取供试品溶液 20 μL，按 2. 1 项
中色谱条件重复进样 5 次，结果峰面积积分值的 RSD
为0. 75%。
2. 8 加样回收率试验 精密吸取已测定的样品溶液 2 mL，
共 5 份，分别加入 2. 3 项中的对照品溶液 0. 5 mL，按 2. 5
项中方法制备成供试品溶液，经 0. 45 μm 微孔滤膜过滤后
供 HPLC检测，进行加样回收率试验，结果见表 1。
2. 9 样品测定 将 2. 5 项中制备的供试品溶液，按 2. 1 项
中色谱条件进行测定，结果见表 2。
由表 2 可知，以柳叶水甘草碱含有量为指标，冷浸法
中各溶剂提取率大小依次为正己烷 ＞ 95%甲醇 ＞ 95%乙醇
＞石油醚;热回流法为 95%甲醇 ＞ 95%乙醇 ＞正己烷 ＞石
油醚;超声法为 95%甲醇 ＞ 95%乙醇 ＞石油醚 ＞正己烷。
此外，以 HPLC 色谱图中杂质峰出现的多少为指示，
表 1 柳叶水甘草碱加样回收实验结果 (n =5)
样品
原有量 /mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均
回收率 /%
RSD /%
0. 512 0 0. 500 0 1. 005 8 99. 39
0. 512 0 0. 500 0 1. 009 0 99. 70
0. 512 0 0. 500 0 1. 014 6 100. 26 99. 58 0. 45
0. 512 0 0. 500 0 1. 002 2 99. 03
0. 512 0 0. 500 0 1. 007 2 99. 53
表 2 不同方法提取柳叶水甘草碱的结果比较 (n =3)
方法 溶剂
提取时
间 /h
料液比
柳叶水甘
草碱 /%
RSD /%
95%甲醇 24 1 ∶ 10 0. 256 0. 44
冷浸法
95%乙醇 24 1 ∶ 10 0. 252 0. 83
正己烷 24 1 ∶ 10 0. 286 0. 52
石油醚 24 1 ∶ 10 0. 196 0. 65
95%甲醇 1. 5 1 ∶ 10 0. 911 0. 58
热回流法
95%乙醇 1. 5 1 ∶ 10 0. 795 0. 71
正己烷 1. 5 1 ∶ 10 0. 702 0. 62
石油醚 1. 5 1 ∶ 10 0. 642 1. 01
95%甲醇 0. 5 1 ∶ 10 0. 628 0. 95
超声法
95%乙醇 0. 5 1 ∶ 10 0. 543 0. 75
正己烷 0. 5 1 ∶ 10 0. 439 0. 43
石油醚 0. 5 1 ∶ 10 0. 508 0. 80
可知 95%甲醇和 95%乙醇提取的样液中杂质较多，正己烷
和石油醚提取的样液中杂质较少。
总之，3 种方法中以热回流法提取柳叶水甘草碱含有
量最高，分别达到冷浸法和超声法的约 3. 6 倍和 1. 5 倍。
优选溶剂时，综合考虑提取量和杂质量的双重因素，确定
最佳提取溶剂为正己烷。
3 讨论
目前，柳叶水甘草碱的测定方法国内报道甚少，本研
究建立了柳叶水甘草碱测定的高效液相色谱法，并对测定
柳叶水甘草碱的色谱条件进行了优化筛选，结果显示，当
流动相体积流量为 1. 2 mL /min 时保留时间最短，约为
15 min。
此外，在上述建立的检测方法下对不同方法提取的非
洲马铃果中柳叶水甘草碱进行了测定，并对 4 种溶剂的提
取率进行考察，结果显示，冷浸法中以正己烷提取率最高，
热回流法和超声法中均以 95%甲醇提取率最高，但较正己
烷和石油醚而言，95%甲醇和 95%乙醇提取的样液中杂质
较多，考虑到后续纯化工作的需要，选择正己烷热回流法
提取非洲马铃果中的柳叶水甘草碱。因此，综合考虑，确
定最佳提取方案为正己烷热回流法。
从非洲马铃果中提取柳叶水甘草碱最大的好处就是获
得量高。经测定，本实验中确定的正己烷热回流法提取的
柳叶水甘草碱质量分数约为 0. 7%，具备生产的含有量要
求，因此可用于实际生产。
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UPLC法同时测定炒苍耳子配方颗粒中 5 种酚酸类成分
秦泗涟1， 马利华2，3， 王振中1， 陈 斌2， 谢东浩3， 贾晓斌2*
(1. 江苏康缘药业股份有限公司，江苏 连云港 222047;2. 江苏省中医药研究院 国家中医药管理局中药释
药系统重点研究室，江苏 南京 210028;3. 江苏大学药学院，江苏 镇江 212013)
收稿日期:2011-06-07
基金项目:江苏省中医药领军人才项目 (2006)
作者简介:秦泗涟 (1964—) ，男，主管中药师，研究方向:中药鉴定。Tel:13812340577
* 通信作者:贾晓斌 (1966—) ，教授，研究员，博士生导师，研究方向:方剂物质基础与现代中药制剂创新。Tel: (025)85637809，
E-mail:jxiaobin2005@ hotmail． com
摘要:目的 建立炒苍耳子配方颗粒中新绿原酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸和 1，3-二咖啡酰奎宁酸 (洋蓟素)5
种酚酸类成分测定的超高效液相色谱法。方法 采用 ACQUITY BEH C18色谱柱 (100 mm × 2. 1 mm，1. 7 μm，Waters，
Milford，MA，USA) ，流动相为甲醇-0. 1%乙酸水溶液，梯度洗脱，检测波长为 325 nm，柱温 40 ℃。结果 新绿原
酸、绿原酸、咖啡酸、隐绿原酸和洋蓟素分别在 0. 959 0 ～ 95. 90 μg /mL，0. 940 8 ～ 94. 08 μg /mL，0. 163 8 ～ 16. 38 μg /
mL，0. 674 4 ～ 67. 44 μg /mL，0. 471 2 ～ 47. 12 μg /mL 内具有良好的线性关系 (r2≥0. 9997) ，平均回收率分别为
100. 09%、99. 98%、101. 7%、99. 83%和99. 63%。结论 该方法快速、准确、重复性好、分离度高，可有效控制炒
苍耳子配方颗粒的质量。
关键词:炒苍耳子配方颗粒;酚酸;UPLC
中图分类号:R284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2012)07-1393-03
苍耳子系菊科植物苍耳 Xanthium sibiricum Part． 的干
燥成熟带总苞的果实，收载于 2010 年版《中国药典》，为
常用中药材。味辛、苦，性温，有毒，归肺经。具有散风
除湿、通鼻开窍的功效，临床上主要用于治疗风寒头痛、
鼻渊流涕、风疹瘙痒和湿痹拘挛等症［1］。近年来研究发
现，苍耳子中含有大量的酚酸类化合物［2］，据报道［3］，从
苍耳子抗炎活性部位中分离得到的酚酸类化合物有咖啡酸、
绿原酸、1，5-O-二咖啡酸奎宁酸、4-O-咖啡酰奎宁酸等。
药理试验表明以绿原酸为代表的咖啡酰奎宁酸类化合物具
有抗菌、抗病毒、抗氧化等多种生物活性，多种成分的配
伍是苍耳子发挥临床疗效的物质基础。
目前临床处方中苍耳子皆为苍耳子的炮制品，即炒苍
耳子。炒苍耳子一般要求炒后碾去刺入药，生品慎用。其
炮制的目的主要是为了降低毒性，并易于去刺和洁净药
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