全 文 ：［收稿日期］ 20100613(002)
［第一作者］ 吴怀恩，副教授，博士研究生，主要研究方向中药
药效物质基础与质量标准化研究，Tel:0771-
3137585，E-mail:wuhe0001@ yahoo. com. cn
HPLC测定石韦配方颗粒中绿原酸、咖啡酸及芒果苷的含量
吴怀恩1，2，劳深1，王雯慧1，韦韬1，黄海燕1，林粒梅1
(1. 广西中医学院药学院，南宁 530001;2. 成都中医药大学药学院，成都 611137)
［摘要］ 目的:建立以高效液相色谱法同时测定石韦配方颗粒中绿原酸、咖啡酸及芒果苷含量的方法。方法:色谱柱为
Shim-pack VP-ODS 柱(4. 6 mm × 250 mm，5 μm);流动相为乙腈-0. 1%磷酸(9∶ 91);检测波长 0 ～ 30 min 为 323 nm，30. 1 ～ 45min
为 258 nm;流速为 1. 0 mL·min － 1。结果:绿原酸在 129. 6 ～ 302. 4 mg·L － 1(r = 0. 999 8)线性关系良好，平均回收率为 98. 15%，
RSD 1. 69%;咖啡酸在 13. 8 ～ 32. 2 mg·L － 1(r = 0. 999 9)线性关系良好，平均回收率为 99. 93%，RSD 2. 98%;芒果苷在 151. 2 ～
352. 8 mg·L － 1(r = 0. 999 9)线性关系良好，平均回收率为 101. 43%，RSD 2. 00%。结论:本法简便、快速、重复性好，可用于石韦
配方颗粒的质量控制。
［关键词］ 石韦配方颗粒;绿原酸;咖啡酸;芒果苷;高效液相色谱法
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ B ［文章编号］ 1005-9903(2010)16-0054-04
Determination of Chlorogenic Acid，Caffeic Acid and
Mangiferin in Shiwei Dispensing Granule by HPLC
WU Huai-en1，2，LAO Shen1，WANG Wen-hui1，WEI Tao1，HUANG Hai-yan1，LIN Li-mei1
(1 . College of Pharmacy，Guangxi Traditional Chinese Medical University，Nanning 530001，China;
2 . College of Pharmacy，Chengdu Traditional Chinese Medical University，Chengdu 611137，China)
［Abstract］ Objective:To establish an HPLC method for the simultaneously determination of chlorogenic
acid，caffeic acid and mangiferin in Shiwei Dispensing Granule. Method:Chlorogenic acid，caffeic acid and
mangiferin were separated on Shim-pack VP-ODS (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)column and detected at 323 nm (0 ～
30 min)and 258 nm (30. 1 ～ 45 min)，with acetonitrile-0. 1% phosphoric acid solution (9∶ 91)as mobile phase.
The flow rate was 1. 0 mL·min － 1 . Result:Chlorogenic acid，caffeic acid and mangiferin were linear within the range
of 129. 6 ～ 302. 4 mg·L － 1(r = 0. 999 8)，13. 8 ～ 32. 2 mg·L － 1(r = 0. 999 9)and 151. 2 ～ 352. 8 mg·L － 1(r =
0. 999 9) respectively. The average recovery were 98. 15% (RSD 1. 69%)，99. 93% (RSD 2. 98%) and
101. 43% (RSD 2. 00%). Conclusion:The method is simple，reproducible，and it can be used for the quality
control of Shiwei Dispensing Granule.
［Key words］ Shiwei Dispensing Granule;chlorogenic acid;caffeic acid;mangiferin;HPLC
石韦为水龙骨科植物庐山石韦 Pyrrosia sheareri
(Bak.)Ching，石韦 P. lingua (Thunb.)Farwell 或有柄
石韦 P. petiolosa (Christ)Ching 的干燥叶，味甘、苦，性
微寒，具有利尿通淋、清热止血之功效，中医临床多用于
治疗热淋、血淋、石淋、小便不通、淋沥涩痛，吐血、衄血、
尿血、崩漏、肺热喘咳等症［1］。石韦配方颗粒是石韦饮
片经水提、浓缩、干燥、制粒等工序制成的单味中药配方
颗粒剂，其性味、归经、功效、成分与原中药饮片基本一
致［2］。石韦药材含有多种活性成分［3-8］，其中绿原酸、
咖啡酸具有抗菌消炎，抗氧化作用;芒果苷具有抗菌、抗
单纯疱疹病毒作用。《中国药典》2005 年版一部仅收载
石韦药材中绿原酸的测定方法［1］。目前，测定中药材
及其制剂中咖啡酸、芒果苷的含量多采用高效液相色
谱法［9-11］。笔者采用高效液相色谱法同时测定石韦配
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方颗粒中绿原酸、咖啡酸及芒果苷含量，为其制剂的质
量控制提供一定的科学依据。
1 材料
1. 1 仪器 Agilent 1100 高效液相色谱仪(美国安捷
伦科技公司);LG16-W 型高速离心机(北京医用离心
机厂);B3500S-MT 超声清洗仪(上海必能信超声有限
公司);电热恒温鼓风干燥箱(上海跃进医疗器械厂);
BP211D 电子分析天平(德国赛多利斯);SHZ-D 循环
水式真空泵(巩义市予华仪器有限公司)。
1. 2 试药 石韦配方颗粒(江阴天江药业有限公
司，批号 0902018，0904015，0905242);绿原酸对照品
(中国药品生物制品检定所，批号 110753-200413);
咖啡酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号
110885-200102);芒果苷对照品(中国药品生物制品
检定所，批号 111607-200402);乙腈为色谱纯，水为
高纯水，其余试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 色谱柱 Shim-pack VP-ODS(4. 6
mm × 250 mm，5 μm);流动相为乙腈-0. 1%磷酸(9 ∶
91);检测波长 0 ～ 30 min 为 323 nm，30. 1 ～ 45 min
为 258 nm;流速为 1. 0 mL·min － 1;柱温为 35 ℃。
2. 2 溶液的制备
2. 2. 1 对照品溶液的制备 分别精密称取绿原酸
对照品、咖啡酸对照品、芒果苷对照品适量，加 50%
甲醇溶解分别制成 0. 215 2，0. 022 96，0. 252 0 g·
L － 1的对照品溶液。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密称取石韦配方颗
粒 0. 5 g，置具塞锥形瓶中，精密加 50%甲醇 10 mL，
密塞，称定质量，超声提取 40 min，放冷，称定质量，
用 50%甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液
离心即得。
2. 2. 3 阴性对照溶液的制备 取石韦配方颗粒中
所用辅料即药用糊精适量，按 2. 2. 2 项下方法制备
阴性对照溶液。
2. 3 专属性试验 分别精密吸取上述绿原酸对照
品溶液、咖啡酸对照品溶液、芒果苷对照品溶液、供
试品溶液和阴性对照溶液各 10 μL 进样分析。结果
见图 1。
图 1 石韦配方颗粒高效液相色谱图
A. 绿原酸对照品;B. 咖啡酸对照品;C. 芒果苷对照品 D. 供试品;E. 阴性对照样品;1. 绿原酸;2. 咖啡酸;3. 芒果苷
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2. 4 线性关系考察 精密称定绿原酸对照品适量，
分别 加 50% 甲 醇 分 别 制 成 129. 6，172. 8，216，
259. 2，302. 4 mg·L － 1的溶液;精密称定咖啡酸对照
品适量，分别加 50% 甲醇分别制成 13. 8，18. 4，
23. 0，27. 6，32. 2 mg·L － 1的溶液;精密称定芒果苷对
照品适量，分别加 50%甲醇分别制成 151. 2，201. 6，
252，302. 4，352. 8 mg·L － 1的溶液;再分别精密吸取
以上溶液 10 μL 注入液相色谱仪进行分析，以检测
浓度 X(μg)为横坐标，峰面积 Y 为纵坐标绘制标准
曲线，得到绿原酸回归方程为 Y = 2. 90 × 104X －
1. 18 × 10，r = 0. 999 8;咖啡酸回归方程为 Y = 5. 36
× 103X － 1. 685 0，r = 0. 999 9;芒果苷回归方程为
Y = 3. 68 × 103X － 0. 310 0，r = 0. 999 9。结果表明，
绿原酸、咖啡酸、芒果苷的检测浓度分别在 129. 6 ～
302. 4，13. 8 ～ 32. 2，151. 2 ～ 352. 8 mg·L － 1，与峰面
积呈良好线性关系。
2. 5 精密度试验 分别精密吸取 2. 2. 1 项下绿原
酸对照品溶液、咖啡酸对照品溶液、芒果苷对照品溶
液各 10 μL，连续进样 6 次，计算峰面积 RSD 分别为
0. 33%，0. 38%，0. 50%。表明仪器精密度良好。
2. 6 稳定性试验 取同一供试品溶液，按 2. 2. 2 项
下方法制备，以 2. 1 项下色谱条件分别在 0，2，4，6，
8，12 h 进样 10 μL，测定绿原酸、咖啡酸和芒果苷的
峰面积，RSD 分别为 1. 67%，2. 22%，2. 71%。表明
供试品溶液在 12 h 内稳定。
2. 7 重复性试验 取同一批(0902018)供试品 6
份，分别按 2. 2. 2 项下方法制备，以 2. 1 项下色谱条
件进样 10 μL，结果绿原酸平均含量为 2. 109 6 mg·
g － 1，RSD 2. 06%;咖啡酸平均含量为 0. 130 5 mg·
g － 1，RSD 2. 94%;芒果苷平均含量为 0. 259 1 mg·
g － 1，RSD 2. 59%。表明本法重复性良好。
2. 8 加样回收试验 取同一批(0902018)已知含量
的供试品 6 份，分别精密加入一定量的绿原酸、咖啡
酸对照品，按 2. 2. 2 项下方法制备，以 2. 1 项下色谱
条件进样 10 μL，测定绿原酸、咖啡酸、芒果苷的含
量。结果表明，本法准确度较好。见表 1。
2. 9 样品测定 取不同批号的样品，分别按 2. 2. 2
项下方法制备供试品溶液，按 2. 1 项下色谱条件进
样测定，结果见表 2。
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 取对照品溶液进行紫外扫
描，结果绿原酸在 327 nm 处有最大吸收，咖啡酸在
表 1 石韦配方颗粒加样回收结果(n = 6)
化合物
样品含量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
/%
RSD
/%
绿原酸 0. 528 5 0. 461 1 0. 977 0 97. 28 98. 15 1. 69
0. 527 8 0. 461 1 0. 977 3 97. 48
0. 527 0 0. 461 1 0. 991 4 100. 72
0. 527 6 0. 461 1 0. 973 3 96. 64
0. 528 7 0. 461 1 0. 988 6 99. 74
0. 528 0 0. 461 1 0. 975 5 97. 05
咖啡酸 0. 032 7 0. 027 6 0. 061 3 103. 71 99. 93 2. 98
0. 032 7 0. 027 6 0. 060 2 100. 05
0. 032 6 0. 027 6 0. 058 7 94. 57
0. 032 6 0. 027 6 0. 060 2 99. 94
0. 032 7 0. 027 6 0. 060 5 100. 98
0. 032 7 0. 027 6 0. 060 3 100. 33
芒果苷 0. 064 9 0. 065 5 0. 131 7 101. 94 101. 43 2. 00
0. 064 8 0. 065 5 0. 132 1 102. 62
0. 064 7 0. 065 5 0. 130 7 100. 76
0. 064 8 0. 065 5 0. 130 1 99. 69
0. 064 9 0. 065 5 0. 130 0 99. 33
0. 064 9 0. 065 5 0. 133 5 104. 74
表 2 石韦配方颗粒样品测定(n = 3)
批号
绿原酸含量
/mg·g － 1
RSD
/%
咖啡酸含量
/mg·g － 1
RSD
/%
芒果苷含量
/mg·g － 1
RSD
/%
0902018 2. 108 9 2. 29 0. 131 2 2. 34 0. 259 8 2. 06
0904015 2. 983 8 2. 38 0. 243 1 2. 76 0. 375 5 2. 32
0905242 2. 537 6 2. 21 0. 184 5 2. 66 0. 316 4 2. 18
323 nm 处有最大吸收，芒果苷在 258 nm 处有最大
吸收波长。因样品中绿原酸(tR = 19. 4 min)的含量
远高于咖啡酸(tR = 25. 3 min)，且二者保留时间接
近，故选择 0 ～ 30 min 以 323 nm 作为检测波长，
30. 1 ～ 45 min 转换波长为 258 nm 检测芒果苷(tR =
41. 6 min)。
3. 2 流动相的选择 因绿原酸、咖啡酸均为有机
酸，水相易电离，峰形不稳定，分离度差;而酸性流动
相可抑制其电离，出峰时间早，峰形稳定，分离度好。
根据预试结果，最终采用乙腈-0. 1% 磷酸溶液(9 ∶
91)为流动相。
(下转第 61 页)
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