全 文 ：中国民族民间医药
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ
供试品图谱
ＨＰＬＣ测定地椒草中木犀草素的含量
李明松
贵州安顺职院， 贵州 安顺 561000
【摘 要】： 目的： 建立地椒草中木犀草素含量测定的 HPLC 方法； 方法: Diamonsil C18 (5μm,250×4.6i.d.mm， 迪马公司)； 流动相：
甲醇－水－磷酸 （60︰40︰0.4）； 流速： 1ml/min； 温度： 35℃； 检测波长为 350nm； 结果： 木犀草素在 100.12～800.96ng 范围内与峰面积呈良
好线性关系， ｒ=0.9999， 地椒草药材平均回收率为 97.95%， ＲＳＤ 为 0.97%； 结论： HPLC 测定地椒草中木犀草素结果准确可靠， 快速， 灵
敏， 重现性好。
【关键词】： 地椒草;木犀草素;高效液相色谱法;含量测定
【中图分类号】 Ｒ927.2 【文献标识码】 B 【文章编号】 1007-8517 （2009） 03 （上） 0029-02
% % 地椒草 Thymus vulgaris [1] 为唇形科地椒草属植物 ，
主要分布于西藏、 青海等省， 为藏族和蒙古族等民间传统
常用草药。 具有消炎止痛， 活血化淤等功效， 用于治疗跌
打损伤， 筋骨疼痛， 骨质松炎等症 [2,3]。 主要含有黄酮类
[4]、 环烯醚萜类 [5] 成分。 目前尚未见有关地椒草中指标性
成分木犀草素含量测定方法的报道。 本文建立了地椒草中
木犀草素的 HPLC 含量测定方法及测定了不同批次药材中
其含量。
1 仪器和材料
高效液相色谱仪： LC-10ATvp 泵 (美国 )， SPD-10Avp
紫外检测器 (美国)， CTO-10Asvp 柱温箱 (美国)； Shimadzu
Libror AEL 40SM （十万分之一） 天平 （日本岛津所）。
色谱甲醇 （天津市科密欧化学试开发中心）； 水 （重蒸馏，
临用前制备）； 木犀草素对照品 （中国生物制品鉴定所， 批
号 ： 111520 -200201） 样 品 三 批 （ 批 号 ： 20040101、
20040102、 20040103）
2 方法与结果
色谱条件 色谱柱： Diamonsil C18 (5μm， 250×4.6 i.d.
mm， 迪马公司)； 流动相： 甲醇－水－磷酸 （60∶40∶0.4）； 流
速： 1ml/min； 温度： 35℃； 检测波长为 350nm。 在此条件
下， 药材中木犀草素与其他成分能很好地分离。 以工作站
中的色谱峰纯度分析和光谱匹配对照对所得色谱图进行分
析。 结果地椒草药材中木犀草素峰的纯度角 (Purity Angle)
为 0.846， 阈值 (Threshold) 为 1.914； 光谱匹配角 (Match
Angle) 为 0.384， 阈值 ( Match Threshold) 为 1.838， 在
210～400nm 范围内与对照品有很好的光谱匹配。
对照品溶液的配制 精密称取经五氧化二磷干燥至恒
重的木犀草素对照品适量， 加甲醇制成每 1ml 含木犀草素
40μg 的溶液， 即得。
线性范围的考察 精密称取经五氧化二磷干燥至恒重
的木犀草素对照品 10.12mg 置 100ml 棕色容量瓶中， 加甲
醇使溶解并稀释至刻度 ， 摇匀 ， 制成每 1ml 含木犀草素
100.12μg 的对照品储备液； 精密吸取该液 2.5、 5、 10、 15、
20ml， 置 25ml 棕色容量瓶中， 加甲醇稀释至刻度， 摇匀，
制成每 1ml 含木犀草素 10.012、 20.024、 40.048、 60.072、
80.096μg 的系列对照品溶液， 分别精密吸取上述系列对照
品溶液各 10μl， 注入高效液相色谱仪， 按上述色谱条件测
定峰面积， 记录色谱图， 测定结果见表 1， 并以对照品进样
木犀草素对照品
药 物 研 究
Ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｔｕｄｙ 29· ·
中国民族民间医药
Ｃｈｉｎｅｓｅ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｅｔｈｎｏｍｅｄｉｃｉｎｅ ａｎｄ ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｙ
批号
木犀草素含量 （%） 木犀草素平均含量
（%）样 1 样 2
20040103 0.153 0.149 0.151
20040102 0.179 0.183 0.181
20040101 0.153 0.157 0.155
表 2 3 批样品中木犀草素的含测结果
溶剂图谱
量 X （ng） 为横坐标， 峰面积值 Y (mv.s) 为纵坐标， 绘制
标准曲线， 结果表明， 木犀草素在 100.12～800.96ng 范围内
线性关系良好。
精密度试验
精密吸取对照品溶液 10μl,重复进样 5 次， 测定木犀草
素峰面积积分值， 求出相对标准偏差， 结果表明， 木犀草
素进样精密度良好， RSD=0.65%。
2.1 重复性试验 取地椒草 药材 （批号： 20040103） 粉
末各 2g， 共 5 份， 按地椒草药材供试液的制备方法制备供
试液。 精密吸取供试品溶液各 10μl,注入高效液相色谱仪，
测定木犀草素峰面积积分值， 计算含量， 求相对标准偏差；
结果表明此方法测定木犀草素的重现性良好 ， RSD=
1.09%。
2.2 稳定性试验 取地椒草药材 （批号 ： 20040103） 粉末
2g， 按地椒草 药材供试液的制备方法制备供试液， 在室
温下按表 4 规定时间进样， 测定木犀草素峰面积值， 求相
对标准偏差； 结果表明， 木犀草素在 24 小时内基本稳定，
RSD=0.84%。
2.3 回收率试验 采用加样回收试验， 取已知含量的重现
性试验的同一批样品 （批号： 20040103， 木犀草素平均含
量为 1.51mg/g） 5 份， 精密称取各约 1g， 分别加入木犀草素
对照品溶液 （0.3019mg/ml） 5ml， 按供试品溶液制备方法制
备成供试品溶液， 照上述色谱条件， 进样、 测定， 记录色
谱图， 计算含量， 求相对标准偏差， RSD=0.97%， 结果表
明， 此方法具有较好的加样回收率， 结果见表 1。
2.4 供试品溶液的制备及样品测定 取本品粉末 （过 3 号
序号
样品取样量
（g）
理论含量
(mg)
加入量
(mg)
峰面积
（mv.s）
实测值
(mg)
回收量
(mg)
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
（%）
1 1.0021 1.5132 1.5095 544304 2.985 1.4718 97.50
% % % % % % % % % 对照品浓度： 0.040048mg/ml 对照品峰面积积分值： 911030.5
5 1.0013 1.5120 1.5095 543744 2.984 1.472 97.52
4 0.9967 1.5050 1.5095 544693 2.984 1.4980 99.24
3 0.9983 1.5074 1.5095 544286 2.996 1.4886 98.61 97.95 0.97
2 1.0035 1.5153 1.5095 543818 2.978 1.4627 96.90
表 1 药材供试品溶液中木犀草素加样回收试验结果
筛）2g， 精密称定， 置具塞锥形瓶中， 精密加入 2.5mol/L 盐
酸甲醇溶液 25ml， 称定重量， 于 90℃水浴中加热回流 1 小
时， 放冷， 再称定重量， 用 2.5mol/L 盐酸甲醇溶液补足减
失重量， 摇匀， 滤过， 精密吸取续滤液 2ml， 置 10ml 量瓶
中， 加甲醇至刻度，摇匀，以微孔滤膜（0.45μm）滤过，即得。
分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 10μl， 注入液相
色谱仪， 测定， 即得。 结果见表 2
3 讨论
3.1 比较了多种甲醇， 水， 磷酸比例,最终确定了甲醇－水－
磷酸的比例为 60∶40∶0.4 最为合适,木犀草素的最大吸收波长
为 349.8nm， 故检测波长选择了 350nm。
3.2 在样品前处理方法中， 比较了甲醇浓度、 浸泡时间和
超声时间对木犀草素提取率的影响， 最终确定了提取方法。
参考文献
[1] 中国科学院四川分院中医中药研究所 四川中药志 [Ｍ] .成都:四川人民
出版社， 1961 1127.
[2] 青海省生物研究所.青藏高原植物图鉴 (第一册) [Ｍ] .西宁:青海人民出
版社， 1972 100.
[3] 梁重栋 藏药地椒草 的基础与临床研究 [Ｊ] .兰州医学院学报,1987， 13
(2)： 47 49.
[4] 张兆琳， 张承忠， 李冲， 等.藏药地椒草中黄酮类化合物的研究 [Ｊ] .兰州
医学院学报， 1989， 15 (4)： 205 208.
[5] 易进海， 钟炽昌， 罗泽渊， 等.藏药地椒草根化学成分的研究 [Ｊ] .药学学
报 (Acta Pharm Sin)， 1990， 26 (1)： 37 41.
[6] Yoshio Takeda， Hiroyuki Matsumura， Toshiya Masuda,etal Phlorigi鄄
doside AC， iridoid glucoseides from Phlomisrigida [J] .Phytochemistry，
2000,53:931 935
(收稿日期： 2008.12.2)
药 物 研 究
Ｔｈｅ ｍｅｄｉｃｉｎｅ ｓｔｕｄｙ30· ·