全 文 ：RP-HPLC法测定瓦韦药材中绿原酸的含量
孙全明1　朱朝德1　李春雨1　李臻2
(1.安康市药品检验所 ,陕西 安康 725000;2.西安利君医药技工学校 ,陕西西安 710077)
摘　要:目的 建立瓦韦药材中绿原酸的含量测定方法。方法 采用 RP-HPLC 法 ,使用 C18柱 ,以乙腈-
0.5%磷酸溶液(11∶89)为流动相;检测波长为 326nm;流速为 1.0ml/min。结果绿原酸在 0.126 ～ 0.632μg 范
围内线性关系良好(r=0.9998),平均回收率为 99.37%(RSD=1.27%)。结论 本法简便 、快速 、灵敏 、准确 、
重现性好 ,可用于瓦韦药材的质量控制 。
关键词:RP -HPLC;瓦韦;绿原酸;含量测定
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1002-168X(2004)06-0072-02
　　瓦韦为少用中药 ,具有清热解毒 ,利尿消肿 ,止
血 ,止咳等功效 ,用于尿路感染 、肾炎 、痢疾 、肝炎 、
血尿等症。瓦韦为水龙骨科植物瓦韦 Lepisorus
thunbergianus(kaulf.)Ching 的全草[ 1] ,其主要化
学成分是绿原酸和蜕皮甾酮[ 2] ,文献未见含量测
定的报道。我们采用反相高效液相色谱法测定其
绿原酸的含量 ,方法快速 ,准确 ,重现性好 ,可用于
控制瓦韦药材的质量 ,对进一步挖掘中草药资源 ,
有一定的价值。
1.仪器与试药
SP8810型高效液相色谱仪(美国),SP8450型
紫外检测器 ,SP4290 型数据处理机;KQ-2500型
超声波清洗器;日本岛津 UV2100紫外可见分光光
度计 。
瓦韦药材由本所收集 ,经朱朝德主任中药师鉴
定。绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所
(供含量测定用 ,编号 10753-200212)。流动相所
用试剂均为色谱纯 ,水为去离子重蒸水 ,其它试剂
均为分析纯。
2.方法与结果
2.1 色谱条件:Kromasil C18(250mm ×4.
6mm ,5μm)柱;流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液(11
∶89);检测波长为 326nm;流速为 1.0ml/min ,进样
量 10μl ,分离结果良好 。
2.2检测波长的确定:取绿原酸对照品适量 ,
加流动相制成每 1ml含 10μg 的溶液 ,经紫外全波
长扫描 ,结果在 326nm 波长处有最大吸收 ,故以
326nm 为检测波长 。
2.3线性关系:分别吸取绿原酸对照品溶液
(63.2μg/ml)2 、4 、6 、8 、10μl进样 ,各相当于 0.126 、
0.253 、0.379 、0.506 、0.632μg/ml ,以峰面积与对
照品溶液浓度作线性回归 ,求得回归方程为 C=3.
418×10-7A-0.0046(C:绿原酸浓度 μg/ml ,A:峰
面积),相关系数 r=0.9998 。说明绿原酸在 0.126
～ 0.632μg 范围内线性关系良好。
2.4 样品提取条件的选择:取同一批瓦韦药材
粉末(过 2号筛)约 0.2g ,分别用 30%甲醇 、50%甲
醇 、80%甲醇 、50%乙醇 ,超声处理或回流提取 , 取
续滤液进行绿原酸的测定 ,计算得率。结果见表
1。
表 1　超声和回流提取的效果比较
提取溶剂 超声提取得率(%)
20 30 45 60 80min
回流提取 60min
得率(%)
30%甲醇 0.27 0.35 0.38 0.39 0.40 0.38
50%甲醇 0.32 0.40 0.44 0.45 0.46 0.45
80%甲醇 0.30 0.37 0.42 0.42 0.42 0.41
甲　　醇 0.20 0.27 0.32 0.33 0.34 0.38
50%乙醇 0.31 0.35 0.36 0.40 0.41 0.42
乙　　醇 0.18 0.31 0.36 0.37 0.36 0.35
　　从表 1可见 ,以 50%甲醇超声提取 45分钟与
回流提取 1小时效果基本相同 ,因超声提取方法简
便 ,故采用超声提取 45分种 。
2.5 供试品溶液的制备:取样品粉末(过 2 号
筛)约 0.2g ,精密称定 ,置 50ml具塞三角瓶中 ,精
密加入 50%甲醇 25m l ,塞紧 ,称定重量 ,超声处理
45分钟 ,放冷 ,再称定重量 ,用 50%甲醇补足减失
的重量 ,摇匀 ,滤过 ,收集续滤液作为供试品溶液 。
2.6 精密度:精密吸取对照品溶液及供试品溶
液各 10μl ,各重复进样 5次 ,测定峰面积 ,计算相对
标准偏差(RSD),结果对照品 RSD=0.80%,样品
RSD=1.86%。
2.7 回收率:取同一批已知含量的瓦韦样品粉
72　　　　　　　　　　　　　　 陕　西　中　医　学　院　学　报Journal of Shaanxi College of T raditional Chinese Medicine　　　　　Vol.27.No.6.2004.11
DOI :10.13424/j.cnki.jsctcm.2004.06.043
末 5份 ,各 0.2g ,精密称定 ,并分别精密加入对照
品 0.632mg ,按供试品溶液制备项下的方法进行测
定 ,结果平均回收率为 99.37%, RSD=1.27%。
见表 2。
表 2　回收率试验
样品中绿原酸
的量(mg)
绿原酸加
入量(mg)
测得值
(mg)
回收率
(%)
平均
(%)
RSD
(%)
0.937 0.632 1.563 99.05
0.942 0.632 1.576 100.32
0.915 0.632 1.539 98.73 99.37 1.27
0.923 0.632 1.541 97.78
0.920 0.632 1.558 100.95
　　2.8 重现性:
取同一批样品 5份各 0.2g ,精密称定 ,按供试
品溶液制备项下方法进行测定 ,结果绿原酸含量分
别为:0.44%、0.45%、0.46%、0.45%和 0.46%,
平均:0.45%, RSD=1.86%。
2.9 稳定性:将样品溶液放置 0 、2 、4 、12 、18 、
24、36小时 ,分别进样 10μl ,测定含量 ,结果分别为:
0.45%、0.45%、0.44%、0.44%、0.44%和 0.42%,
RSD=2.50%。样品在 36小时内基本稳定。
2.10 样品测定:用供试品溶液制备项下方法
对样品进行绿原酸的测定 ,结果见表 3。
表 3　瓦韦药材中绿原酸含量测定(%)(n=3)
编号 样品来源 含量
1 陕西镇坪 0.78%
2 广西玉林 0.38%
3 四川南充 0.45%
　　3.结论
采用 RP -HPLC法测定瓦韦药材中绿原酸的
含量 ,其方法操作简便 ,专属性强 ,灵敏度高 ,重现
性好 ,可有效地控制瓦韦药材的质量。
参考文献:
[ 1]全国中草药汇编 , 下册[ M] .北京:人民卫生出版
社 , 1978:114.
[ 2]新华本草纲目 , 第三册[ M] .上海:上海科学技术出
版社 , 1990:722.
(收稿日期:2004-04-12)
益肝胶囊对四氯化碳(CCl4)致小鼠急性肝损伤的实验报道
王成　孟建国　许刚　郭洁　指导:张恩户
(陕西中医学院 2002级研究生 ,陕西 咸阳 712083)
摘　要:目的 观察受试药物对四氯化碳(CCl4)所致小鼠急性肝损伤的影响 。方法 用 CCl4造成小鼠
急性肝损伤 ,以血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST/GOT)、丙氨酸氨基转移酶(ALT/GPT)和肝组织病理学
检查等为指标 ,观察受试药对化学因素致小鼠急性肝损伤的保护作用 。结果益肝胶囊能降低血清AST 和
ALT ,减轻肝组织病理性损害 ,对 CCl4所致的小鼠急性肝损伤具有保护作用。
关键词:益肝胶囊;急性肝损伤;AST ;ALT
中图分类号:R285　　文献标识码:A　　文章编号:1002-168X(2004)06-0073-02
　　1.试验目的
用 CCl4 造成小鼠急性肝损伤 ,以血清 AST 、
ALT 和肝组织病理学检查为指标 ,观察益肝胶囊
对化学因素所致急性肝损伤的影响 。
2.试验材料
2.1 试验动物:健康 ICR种系小鼠 ,雄性 ,体重
20±2g ,由西安交通大学医学院实验动物中心提
供 ,合格证号:医动字第 08-004号 。饲养条件:陕
西中医学院中药药理学实验室(国家中医管理局中
医药科研室实验室分级:二级 ,5.40%, 2.70%)。
2.2 药品和试剂:受试药物:自制益肝胶囊药
物细粉 , 1g 含生药 8.33g 。用蒸馏水配成 1.35%
(细粉)的益肝胶囊混悬液 ,给药时摇匀 。本品具有
益气解毒 ,化瘀止痛等功能 ,用于乙型肝炎(慢性活
动性及慢性迁延性肝炎)。成人给药剂量为 63g 生
药 ,即临床成人用剂量为 0.86g/Kg(人体重以
70Kg 计)。阳性对照药:乙肝宁颗粒 ,由广西半宙
制药股份有限公司生产 ,批准文号:ZZ -5010-桂
卫药准字(1990)第 079023号 ,生产批号 020120。
本品具有调气健脾 ,清热利胆 ,活血化瘀 ,用于慢性
迁延性肝炎 、慢性活动性肝炎 。用蒸馏水配成 37%
(生药)的混悬液 ,本试验小鼠给药剂量为 7.4g/Kg 。
73　Vo l.27.No.6.2004.11　　　　
陕　西　中　医　学　院　学　报
Journal of Shaanxi College of T raditional Chinese Medicine