全 文 ：HPLC法同时测定糙苏中 3 个苯乙醇苷类化合物含量
王争，邓瑞雪，杨友亮，尹卫平，刘普
*
(河南科技大学 化工与制药学院，洛阳 471003)
摘要 目的:建立同时测定糙苏中 3 个苯乙醇苷含量的 HPLC法。方法:采用 Agilent Zorbax SB C18色谱柱(4. 6 mm × 250 mm，
5 μm) ;流动相为乙腈 －磷酸二氢钾缓冲盐(pH = 2. 5)20∶ 80 等度洗脱，流速 1. 0 mL·min －1，检测波长 334 nm。结果:连翘酯
苷 B在 0. 32 ～ 1. 60 μg，类叶升麻苷在 0. 48 ～ 2. 40 μg，异类叶升麻苷在 0. 36 ～ 1. 80 μg与峰面积呈良好的线性关系;r分别为
0. 9999，0. 9995，0. 9998。平均加样回收率(n = 3)分别为 99. 6%，99. 4%，98. 6%;RSD分别为 0. 88%，0. 40%，1. 0%。结论:本
方法快速简便、灵敏、可靠，为土家族民间药物糙苏的质量评价提供了科学依据。
关键词:糙苏;高效液相色谱法;连翘酯苷 B;类叶升麻苷，异类叶升麻苷
中图分类号:R917 文献标识码:A 文章编号:0254 － 1793(2011)04 － 0668 － 03
HPLC simultaneous determination of three
phenylethanoids in Phlomis umbrosa
WANG Zheng，DENG Rui － xue，YANG You － liang，YIN Wei － ping，LIU Pu*
(Chemical Engineering ＆ Pharmaceutical College，Henan University of Science and Technology，Luoyang 471003，China)
Abstract Objective:To establish an HPLC method for simultaneous determination of forsythoside B，verbascoside
and isoverbascoside in Phlomis umbrosa．Methods:The separation was performed on an Agilent Zorbax SB C18 col-
umn (4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ，using acetonitrile and water (potassium dihydrogen phosphate solution，pH 2. 5)
20∶ 80 as the mobile phase． The flow rate was 1. 0 mL·min －1;The detection wavelength was 334 nm． Results:The
linear ranges of forsythoside B，verbascoside and isoverbascoside was 0. 32 － 1. 60 μg (r = 0. 9999)and 0. 48 －
2. 40 μg (r = 0. 9995)and 0. 36 － 1. 80 μg (r = 0. 9998) ，respectively，the average recoveries (n = 3)was 99. 6%
with RSD of 0. 88%，99. 4% with RSD of 0. 40%，98. 6% with RSD of 1. 0%，respectively． Conclusion:The meth-
od is simple，accurate and can be used for quality control of Phlomis umbrosa．
Key words:HPLC;Phlomis umbrosa;forsythoside B;verbascoside;isoverbascoside
糙苏为唇形科糙苏属(Phlomis umbrosa Turcz．)
植物，为多年生直立草本植物。其根在土家族民间
药称为“四楞麻”，具有能清热消肿，主治疮痈肿毒、
跌打损伤，作为抗风湿药物被在土家族民间医药中
广泛应用，历史悠久［1，2］。文献报道糙苏的化学成
分主要有苯乙醇苷、环烯醚萜苷类、二萜及三萜
等［3 ～ 6］。本课题组前期的研究已经从糙苏中分离得
到大量的苯乙醇苷类化合物［7，8］。关于其他药材中
苯乙醇苷类化合物含量的测定方法曾经有过文献报
道［9，10］。糙苏的活性成分主要为皂苷类化合物，目
前尚未有关于糙苏中苯乙醇苷类化合物检测方法的
报道，因此有必要建立糙苏中苯乙醇苷类化合物的
检测方法。本文采用高效液相色谱法对糙苏中 3 个
苯乙醇苷类化合物进行检测，为全面控制其质量奠
定了基础。
1 仪器与试药
仪器:Agilent 1100 高效液相色谱仪，四元泵和
二极管阵列检测器(G1313A) ;在线脱气，柱温箱，自
动进样器，Agilent 1100 色谱工作站;国产 AR 级
2140 型电子分析天平。
试药:对照品连翘酯苷 B、类叶升麻苷，异类叶
升麻苷均为本实验室自制，以 NMR 和 ESI － MS 鉴
定化合物的结构，以 HPLC 法测定纯度大于 98%。
乙腈为色谱纯，水为双蒸水，磷酸二氢钾为色谱纯，
—866— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(4)
* 通讯作者 Tel:(0379)64231914;E － mail:liuputju@ 163． com
其余试剂均为分析纯。糙苏药材采自内蒙古、河北、
宁夏、湖北、河南、辽宁等地，样品由河南科技大学王
忠东教授鉴定为唇形科糙苏属植物糙苏 P． umbrosa
根。
2 吸收波长的选择
精密称取对照品连翘酯苷 B 7. 8 mg，类叶升麻
苷 10. 2 mg，异类叶升麻苷 9. 8 mg，用甲醇定容于 50
mL量瓶中，稀释 10 倍后用可见紫外分光光度计进
行全波长扫描，用甲醇作空白，在波长 200 ～ 400 nm
间扫描，可以看出连翘酯苷 B;类叶升麻苷，异类叶
升麻苷在 330 ～ 335 nm处有明显的吸收峰。
3 色谱条件
Agilent 1100 高效液相色谱仪;色谱柱:Zorbax
SB C18色谱柱(4. 6 mm ×250 mm，5 μm) ;流动相:乙
腈 －磷酸二氢钾缓冲液(pH 2. 5，20 ∶ 80) ;流速为
1. 0 mL·min －1;检测波长:334 nm;柱温:30 ℃;进
样量:10 μL。按照外标法测定，对照品和样品的色
谱图见图 1。
图 1 对照品(A)和样品的色谱图(B)
Fig 1 Chromatograms of chemical reference substances (A)and sample
(B)
1．连翘酯苷 B(forsythoside B) 2．类叶升麻苷(verbascoside) 3．异
类叶升麻苷(isoverbascoside)
4 混合对照品溶液的制备
精密称取对照品连翘酯苷 B 16. 1 mg，类叶升
麻苷 22. 3 mg、异类叶升麻苷 18. 2 mg、加甲醇定容
至 100 mL，配成浓度为 161，223，182 μg·mL －1的混
合溶液，即得。
5 供试品溶液的制备
分别准确称取阴干粉碎后(60目)的小叶丁香
花、叶和嫩枝粉末各 10 g，用滤纸包好放入索氏提取
器中，于提取器 100 mL 烧瓶中加入 50 mL 乙腈，加
热回流提取 3 h，冷却后，用 0. 45 μm 的微孔滤膜过
滤，定溶于 100 mL量瓶中，即得。
6 线性关系的考察
精密吸取混合对照品溶液 2，4，6，8，10 μL，注
入色谱仪，进行分析，记录峰面积。以对照品的峰面
积(Y)为纵坐标，进样量(X)为横坐标进行线性回
归，得连翘酯苷 B、类叶升麻苷、异类叶升麻苷线性
回归方程见表 1。
表 1 3 种指标成分的线性关系
Tab 1 Linearity of determination of 3 components
样品
(sample)
线性范围
(linearrange)
/μg
回归方程
(regression
formulation)
r
连翘酯苷 B(forsythoside B) 0. 32 ～1. 60 Y =621. 5X +107. 0 0. 9999
类叶升麻苷(verbascoside) 0. 48 ～2. 40 Y =890. 0X +170. 7 0. 9995
异类叶升麻苷(isoverbascoside) 0. 36 ～1. 80 Y =825. 7X +74. 59 0. 9998
7 精密度试验
按上述色谱条件，取混合对照品溶液，连续进样
6 次，记录峰面积，计算连翘酯苷 B、类叶升麻苷和
异类叶升麻苷峰面积的 RSD分别为 0. 96%，1. 1%，
1. 2%。
8 稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于配制后 0，2，4，8，
12，24，48 h进样，记录峰面积，结果连翘酯苷 B、类
叶升麻苷和异类叶升麻苷峰面积的 RSD 分别为
1. 5%，2. 1%，1. 1%，表明供试品溶液在 48 h 内稳
定性良好。
9 重复性试验
精密称取糙苏根样品粉末 6 份，每份 10. 0 g，按
照“5”项下方法操作，制备所需供试品溶液，测定连
翘酯苷 B、类叶升麻苷、异类叶升麻苷的含量。结果
各组分含量平均值分别为 1. 244%，0. 728%，
0. 028%;RSD分别为 1. 3%，1. 3%，0. 98%。
10 加样回收率试验
精密称取已经测得含量的糙苏样品粉末 9 份，
每份 5. 0 g，分别精密加入对照品溶液连翘酯苷 B、
类叶升麻苷、异类叶升麻苷 2 mL、3mL、4 mL，再分
别加入甲醇定容至 10 mL，按照“5”项下方法操作，
制备所需溶液，进样 10 μL，测定并计算加样回收
率，结果见表 2。
—966—药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(4)
表 2 回收率测定结果(n =3)
Tab 2 Result of recovery
组分
(component)
加入量
(added)
/mg
回收率
(recovery)
/%
平均回收率
(mean
recovery)/%
RSD
/%
连翘酯苷 B 0. 4 99. 82 99. 6 0. 88
(forsythoside B) 0. 6 98. 63
0. 8 100. 35
类叶升麻苷 0. 4 98. 94 99. 4 0. 40
(verbascoside) 0. 6 99. 43
0. 8 99. 73
异类叶升麻苷 0. 4 99. 45 98. 6 1. 0
(isoverbascoside) 0. 6 97. 46
0. 8 98. 87
11 样品含量的测定
取不同产地的糙苏样品，按照“5”项下的方法
制备供试品溶液。精密吸取混合对照品溶液和供试
品溶液各 10 μL，注入高效液相色谱仪，照上述色谱
条件分别测定，外标法计算糙苏中各个组分的含量，
结果见表 3。
表 3 样品含量测定结果(%，n =3)
Tab 3 Results of determination of samples
编号
(No．)
产地
(producing area)
连翘酯苷B
(forsythoside B)
类叶升麻苷
(verbascoside)
异类叶升麻苷
(isoverbascoside)
1 内蒙古(Nei Monggol) 1. 32 0. 81 0. 031
2 河北(Hebei) 1. 16 0. 06 0. 019
3 宁夏(Ningxia) 1. 26 0. 60 0. 019
4 湖北(Hubei) 1. 24 0. 73 0. 028
5 河南(Henan) 1. 00 0. 81 0. 025
6 辽宁(Liaoning) 1. 11 0. 76 0. 032
12 讨论
12. 1 供试品溶液制备方法的建立 本实验比较了
甲醇、乙醇和乙腈等溶剂的提取效率，同时对不同的
提取方法(超声、索氏回流、冷浸)、回流提取时间、
料液比及溶剂浓度进行了优化，结果发现采用 10 倍
量的乙腈用索氏提取器回流 3 h 效果最好(3 种苯
乙醇苷的含量分别为:1. 1%，0. 62%，0. 17%) ，大于
用其他提取方法得到的含量(超声:0. 9%，0. 45%，
0. 11%;冷浸:0. 92%，0. 37%，0. 14%)。
12. 2 检测波长的选择 文献报道连翘酯苷 B、类
叶升麻苷、异类叶升麻苷都在 330 ～ 335 nm 附近有
紫外吸收。本研究紫外扫描发现连翘酯苷 B 在 334
nm处有最大吸收，类叶升麻苷在 335 nm 处有最大
吸收，异类叶升麻苷在 334 nm处有最大吸收。根据
波长扫描的结果，最终选择 334 nm作为测定波长。
12. 3 流动相的选择 曾尝试了采用甲醇 －水、甲
醇 － 1%醋酸水溶液、乙腈 －水、乙腈醋酸水溶液等
洗脱体系，均不能达到理想的分离效果，而选择乙腈
－ 0. 01 mol·L －1磷酸二氢钾缓冲液(pH 2. 5)进行
等度洗脱可以使 3 个成分在短时间里完全分离，满
足测试需要。
12. 4 小结 本实验建立了同时测定糙苏中 3 个苯
乙醇苷类化合物含量的测定方法，为系统评价糙苏的
质量提供了理论依据。测定结果表明，各地糙苏样品
中连翘酯苷 B含量较高，而异类叶升麻苷含量较低。
致谢:感谢河南科技大学博士科研启动基金(09001244，
09001334)的资助!
参考文献
1 YI Jin － hai(易进海) ，ZHONG Zhi － chang(钟炽昌) ，LUO Ze －
yuan(罗泽渊) ，et al． Phlomis genus and lamiophlomis genus chem-
ical composition and its taxonomic significance (糙苏属和独一味
属植物的化学成分及其分类学的意义)． Chin Tradit Herb Drugs
(中草药) ，1992，23(7) :382
2 WAN Ding － rong(万定荣) ，CHEN Wei － jiang(陈卫江) ，LEI
Yong － shu(雷永恕) ，et al． Common west Hubei Tujia herbal anti
－ rheumatic(鄂西土家常用抗风湿类植物药)． China J Chin Ma-
ter Med(中国中药杂志) ，1993，18(10) :581
3 Jung KY，Do JC，Son KH． A study on the iridoid constituents from
the roots of Phlomis umbrosa． Saengyak Hakhoechi，1996，27(2) :87
4 Guo SJO，Gao LM，Cheng DL． Iridoids from Phlomis umbrosa．
Pharmazie，2001，56(2) :178
5 YANG Yong － li(杨永利) ，GUO Shou － jun(郭守军) ，SUN Kun
(孙坤) ，et al． Study on the hydrophilic chemical constituents of
Phlomis umbrosa (中药糙苏亲水性成分的研究)． Chin J Lanzhou
Univ (Nat Sci) (兰州大学学报 自然科学版) ，2004，40(2) :67
6 FU Hong － zheng(付宏征) ，LIU Shi － wang(刘世旺) ，LIN Wen
－ han(林文翰)． Chemical constituents of Phlomis umbrosa (糙苏
化学成分研究)． Acta Pharm Sin (药学学报) ，1999，34(4) :197
7 LIU Pu(刘普) ，TENG Jie(腾杰) ，DUAN Hong － quan(段宏泉) ，
et al． Chemical constituents from rhizome of Phlomis umbrosa(四楞
麻化学成分研究)． Acta Pharm Sin (药学学报) ，2007，42(4) :
401
8 Liu Pu，Deng Rui － Xue，Duan Hong － Quan，et al． Phenylethanoid
glycosides from the roots of Phlomis umbrosa． J Asia Nat Prod Res，
2009，11(1) :69
9 ZHOU Guo － ping (周国平) ，XIE Er － lei (谢二磊) ，SHENG Jie
－ cao(盛杰曹) ，et al． HPLC determination of forsythoside B and
poliumoside in Callicarpa kwangtungensis Chun． from different habi-
tats of Jiangxi(HPLC法同时测定江西不同产地广东紫珠药材中
连翘酯苷 B和金石蚕苷的含量)． Chin J Pharm Anal(药物分析
杂志) ，2008，28(10) :1623
10 XIAO Yuan － can(肖远灿) ，YANG Shi － bing(杨仕兵) ，LIU De
－ ming(刘德铭) ，et al． A RP － HPLC method for simultaneous de-
termination of echinacoside and acteoside in Tibetan herb Lagotis
brevituba Maxim(葳药短管兔耳草中松果菊苷和麦角甾苷的 RP
－ HPLC分析)． Nat Prod Res Dev(天然产物研究与开发) ，2008，
20:288
(本文于 2010 年 4 月 9 日收到)
—076— 药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2011，31(4)