全 文 ：收稿日期:2009-08-09;　修订日期:2009-12-23
基金项目:湖北省自然科学基金(No.2008CDB232)
作者简介:陈夏静(1986-),女(汉族),湖南常德人 ,现为湖北中医学院硕
士研究生 ,学士学位 ,主要从事中药品质资源与活性成分研究工作.
＊通讯作者简介:张秀桥(1965-), 女(汉族),河北新乐人 , 现任湖北中医
学院药学院副教授 ,博士学位 ,主要从事中药品质资源与活性成分研究工
作.
＊通讯作者简介:刘焱文(1945-), 男(汉族),湖北新洲人 , 现任湖北中医
学院药学院教授 ,博士生导师 ,学士学位 , 主要从事中药资源及其制剂有
效成分分析研究工作.
大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的高效液相色谱法测定
陈夏静1 ,姚汉玲 2 ,张秋琼1 ,张秀桥 1＊ ,刘焱文 1＊
(1.湖北省中药资源与中药化学重点实验室 ,湖北 武汉　430061;　2.湖北省武汉市汉口医院　430012)
摘要:目的 建立高效液相色谱法测定大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量的方法 。方法 色谱条件:AngilentTC-C18柱(4.6 mm
×250mm, 5 μm),流动相为乙腈 -0.1%磷酸溶液(15∶85, V/V), 检测波长为 290 nm。结果 蛇葡萄素的回归方程为
Y=24 061X+40.07(r=0.999 9, n=6), 线性范围为 0.101 ～ 1.101 μg;平均回收率为 99.65%, RSD为 1.49%。结论 该
方法简单 、结果可靠 ,为大叶蛇葡萄药材的质量控制提供了快速准确的测定方法。
关键词:高效液相色谱法;　大叶蛇葡萄;　蛇葡萄素
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)05-1053-01
ContentDeterminationofAmpelopsininAmpelopsismegalophylabyHPLC
CHENXia-jing1 , YAOHan-ling2 ,ZHANGQiu-qiong1 , ZHANGXiu-qiao1＊ ,LIUYan-wen1＊
(1.HubeiKeyLaboratoryofResourceScienceandChemistryinChineseMedicine, Wuhan430061, China;2.Wu-
hanHankouHospital, Wuhan430012 , China)
Abstract:ObjectiveTodevelopamethodfordeterminationofthecontentofAmpelopsininA-mpelopsismegalophylaDiels
et.GilgbyHPLC.MethodsTheseparationwascarriedoutonAn-gilentTC-C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)withAcetoni-trile-0.1%phosphoricacidsolution(15:85)asmobilephase, andthedetectionwavelengthwas290nm.ResultsTheregression
equationandcoeficientwasY=24 061X+40.07(r=0.999 9, n=6)forAmpelopsin.Thelinearrangewaswithintherangeof
0.101 ～ 1.101 μg.Theaveragerecoveryandprecision(RSD)ofAmpelopsinwere99.65% and1.49%, respectively.Conclu-
sionThismethodissimple, accurateandcanbeusedforthequalitycontrolofAmpelopsininAmpelopsismegalo-phylaDiels
et.Gilg.
Keywords:HPLC;　Ampelopsismegalophylla;　Ampelopsin
　　大叶蛇葡萄 AmpelopsismegalophyllaDielset.Gilg是葡萄科
蛇葡萄属的一种植物 , 是湖北恩施地区民间习用中草药 , 其性平 ,
味酸 、涩 ,具有清热利湿 、活血化淤之功效 , 用于治疗痢疾 、泄泻 、
小便淋痛 、头昏目胀 、高血压等病 [ 1] 。现代药理学研究表明 , 大
叶蛇葡萄中的主要化学成分蛇葡萄素具有多种药理活性 ,如保肝
护肝 、抗肿瘤和降压等 [ 2 ～ 4] 。本实验室已对大叶蛇葡萄有效部位
进行了指纹图谱研究 [ 5] 。 为了更好地控制其质量 , 本文用高效
液相色谱(HPLC)法对不同来源的大叶蛇葡萄中的蛇葡萄素进
行了含量测定。
1　仪器与材料
Agilent-1100系列高效液相色谱仪(四元泵);紫外检测器
及配套色谱工作站;KQ-250B型超声超声波清洗器(昆山市超
声仪器有限公司);AL204型万分之一电子分析天平(Mettler-
ToledoGroup)。对照品蛇葡萄素自制 ,从大叶蛇葡萄中提取分离
得到 , 经 UV、MS、H-NMR、IR光谱分析鉴定结构 ,并经 HPLC面
积归一化法检测 , 含量 98.0% ;大叶蛇葡萄(2009-02采自湖北
恩施地区 , 并由本院生药教研室鉴定)。 乙腈为色谱纯;水为双
蒸水 , 其余试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱:AngilentTC-C18(4.6 mm×250 mm, 5
μm)。流动相:乙腈 -0.1%磷酸溶液(15∶85, V/V);流速:1 ml/
mim;柱温:30℃;检测波长:290 nm;进样量:10 μl。
2.2 　对照品溶液的制备 精密称取干燥至恒重的蛇葡萄素对照
品适量 ,加甲醇制成每毫升含蛇葡萄素 0.101mg的溶液 ,作为对
照品溶液。
2.3　供试品溶液的制备 精密称取样品(过 60目筛)约 0.1 g置
锥形瓶中 ,甲醇 25 ml,浸泡 30min, 超声提取 30 min, 甲醇定容至
30 ml, 摇匀 ,过滤 , 精密吸取续滤液 1ml于 25 ml量瓶中 ,加甲醇
至刻度 ,摇匀 ,即得供试品溶液。
2.4　系统适用性实验 取对照品溶液 、供试品溶液于上述色谱条
件下进样 ,得 HPLC图(见图 1)。 结果在该色谱条件下 , 供试品
在对照品色谱保留时间相应处有相应色谱峰 ,且样品可得到较好
的分离 ,理论塔板数按蛇葡萄素峰计算大于 3 000。
2.5　线性范围的考察 精密量取对照品溶液 1, 2, 4, 6, 8, 10 ml
于 10 ml量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 配置成浓度分别为 0.010 1,
0.020 2, 0.040 4, 0.060 6, 0.080 8, 0.101 mg/ml的对照品溶液 ,
按上述色谱条件依次注入高效液相色谱仪 , 以峰面积(Y)为纵坐
标 , 以标准品的浓度(X)为横坐标 , 得蛇葡萄素回归方程:Y=
24 061X+40.07(r=0.999 9, n=6)。结果表明 , 蛇葡萄素对照品
在 0.101 ～ 1.101 μg范围呈良好的线性关系。
2.6　精密度实验 精密吸取蛇葡萄素对照品溶液 10 μl, 连续进
样 6次 , 测定峰面积值 , 计算 RSD为 0.66%。 结果表明 , 仪器精
密度良好。
2.7　稳定性实验 取供试品溶液 10 μl分别于 0, 2, 6, 8, 12, 24 h
间隔进行测定 , 测得结果基本一致 , 峰面积的 RSD为 1.20%。结
果表明 ,供试品溶液在 24 h内稳定。
2.8　重复性实验 取同一批样品按供试品溶液的制备方法平行
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制备 6份 , 按上述色谱条件进行测定 , 测定各自含量 , 其 RSD为
1.50%。结果表明 ,该方法重复性良好。
a-大叶蛇葡萄供试品　b-蛇葡萄素对照品　1.蛇葡萄素
图 1　HPLC图
2.9　加样回收实验 精密称取已知含量的 6份样品各 50 mg,分
别精密加入蛇葡萄素对照品适量 ,按供试品制备和含量测定项下
方法操作 , 结果平均回收率为 99.65%, RSD为 1.49%。
2.10　样品含量测定 精密称取各样品 0.1 g,按 “ 2.3”项下方法
操作 , 按上述色谱条件进样 10 μl测定蛇葡萄素峰面积 , 以外标
两点法计算含量。结果见表 1。
表 1　不同来源大叶蛇葡萄中蛇葡萄素含量测定结果
样品号 来源 含量(%)
1 来凤县凤头食品有限责任公司 29.44
2 恩施绿神生物制品有限公司 30.63
3 来凤县优质农产品开发购销有限责任公司 32.88
4 来凤县酉源食品有限公司 37.03
3　讨论
本文在样品制备方面比较了回流提取法 、索氏提取法和超声
提取法 ,发现超声提取法提取完全 、操作简便 ,同时比较了浸泡时
间和超声提取时间发现皆以 30 min为宜。
现代研究表明蛇葡萄素有很多种药理活性 [ 2] , 本次的测定
结果表明 ,其在大叶蛇葡萄中的含量为 30%左右 , 因此 , 该药物
具有广阔的开发利用前景。
参考文献:
[ 1 ] 　湖北省卫生局.湖北中草药志(第 2册)[ M] .武汉:湖北人民出版
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[ 3 ] 　孙晓杰 ,沈　伟 ,张秀桥 ,等.大叶蛇葡萄抗高血压有效部位筛选实
验研究 [ J] .齐鲁药事 , 2008, 27(12):747.
[ 4 ] 　张琼光 ,丁英平 ,陈科力 ,等.蛇葡萄属植物药理学研究概况 [ J] .时
珍国医国药 , 2005, 16(2):151.
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纹图谱研究 [ J] .时珍国医国药 , 2007, 18(12):2933.
收稿日期:2009-09-12;　修订日期:2009-11-23
基金项目:国家自然科学基金(No.30960498);广西自然科学基金(No.桂科自 0447101);广西科技攻关与新产品试制(No.桂科攻 0992003A-26)
作者简介:杨新平(1971-),男(汉族),广西桂林人 ,现任桂林医学院讲师 ,学士学位 ,主要从事药物化学教学和天然活性产物修饰研究工作.
＊通讯作者简介:陈　旭(1966-),女(汉族),湖南隆回人 ,现任桂林医学院教授 ,在读博士 ,主要从事中药质量评价、药效物质基础 、抗体工学研究工
作.
中药莪术中抗肿瘤成分莪术醇人工抗原的合成与鉴定
杨新平 1 ,陈　旭1 , 2＊ ,李芳耀 1 ,阮　方 1 ,林家逊1 ,钟海雁 2
(1.桂林医学院·药学院 ,广西 桂林　541004;　2.中南林业科技大学 ,湖南 长沙　410004)
摘要:目的 合成莪术醇全抗原并加以鉴定。方法 先用莪术醇与琥珀酸酐为原料 , 以三氯甲烷为溶剂 , 4-二甲基氨基吡
啶(DMAP)作催化剂 ,反应合成半抗原莪术醇琥珀酸单酯 , 然后 ,用 1-乙基 -3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺法将莪术
醇琥珀酸单酯偶联到牛血清白蛋白 ,合成了莪术醇的人工抗原 ,并用激光解析飞行质谱(MALDI-TOF-MS)进行了鉴
定 , 利用质谱特征求得了偶联物中莪术醇与牛血清白蛋白的量 , 计算出结合比。结果 成功地合成了莪术醇人工抗原 , 其
结合比为 19.6。结论 用 1-乙基 -3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺偶联法可合成莪术醇的完全抗原。
关键词:莪术;　莪术醇;　1-乙基 -3(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺;　人工抗原;　莪术醇琥珀酸单酯
中图分类号:R284.1　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2010)05-1054-03
SynthesisandIdentificationofArtificialAntigenforCurcumol, AnAntitumorCompounds
fromRhizomaZedoariae
YANGXin-ping1 , CHENXu1, 2＊ , LIFang-yao1 , RUANFang1 , LINJia-xun1 , ZHONGHai-yan2
(1.SchoolofPharmacology, GuilinMedicalUniversity, Guilin541004, China;2.CentralSouthUniversityof
ForestyandTechnology, Changsha410004, China)
Abstract:ObjectiveTosynthesizeandidentifytheartificialantigenofcurcumol.MethodsFirstly, ahaptenofcurcumol, cur-
cumol-hemisucinate(Cur.-HS)wassynthesizedusingmaterialofcurcumoltoreactwithsuccinicanhydrideinchloroformand
trace4-dimethylaminopyridine(DMAP)ascatalyst.Thenthehaptenwasconjugatedtobovineserumalbumin(BSA)using1-
ethyl-3 -(3 -dimethylaminopropyl)carbodimide, (EDC)methodandthecharacterizationoftheantigenwasexaminedby
MALDI-TOF-MS, andtheconjugationratioofcurcumoltoBSAwasdeterminedwithMALDI-TOF-MS.ResultsTheartifi-
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