全 文 ：参考文献:
［1］ 杨 林，孙 静，郝 璐． 六味地黄丸组方的临床应用及
研究［J］． 浙江中医药大学学报，2010，34(5) :796-798．
［2］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典:2010 年版一部
［S］． 北京:中国医药科技出版社，2010:597-598．
［3］ 周 灿． 基于 HPLC法测定不同六味地黄丸中丹皮酚溶出
度的研究［J］． 中国实用医药，2009，4(5) :155-156．
［4］ 苏瑞强，何 煜，王瑞成，等． 超微粉碎技术提高六味地
黄丸 (水蜜丸)溶出度的研究［J］． 中国中药杂志，2002，
27(7) :511-513．
［5］ 王义海，陈建国，冯志刚． 六味地黄丸体外释放度的测定
［J］． 中成药，1995，17(9):9-10．
［6］ 胡建平． 六味地黄丸 (水蜜丸)的质量评价［J］． 中成药，
2006，28(9) :1293-1297．
［7］ 梁发华，陈 婕． 高效液相色谱法测定六味地黄浓缩丸中
马钱苷的含量［J］． 中国医药导报，2008，5(35):5-6．
［8］ 张翠英，李忠保，李振国，等． HPLC 测定六味地黄颗粒
中马钱苷和丹皮酚含量［J］． 中成药，2008，30(12) :
1791-1794．
［9］ 毛晓敏，张小波，陈小清，等． HPLC同时测定十二乌鸡白
凤丸中芍药苷、阿魏酸和丹皮酚含量［J］． 中成药，2008，
30(5):678-681．
［10］ 李文兰，赵 稷，王晓冬，等． HPLC 法测定金匮肾气丸
中马钱苷、芍药苷的含量［J］． 哈尔滨商业大学学报:自
然科学版 ，2008，24(1) :12-15．
［11］ 戴 冰，梅 君，肖子曾，等． HPLC 法同时测定浓缩六
味地黄丸中马钱苷和芍药苷的含量［J］． 湖南中医药大学
学报，2009，29(5) :35-38．
［12］ 戴 冰，肖子曾． 马钱苷对大鼠前脂肪细胞增殖与分化的
影响［J］． 中药新药与临床药理，2007，18(6):448-449．
［13］ 郑尚永，熊清平，肖 婷． 六味地黄分散片的制备工艺研
究［J］． 现代中药研究与实践，2012，26(2):48-51．
［14］ 詹冬华，郑 捷，陈 佳，等． 2 种不同方法制备六味地
黄丸的对比研究［J］． 中南药学，2009，7(7):515-518．
［15］ 曾常青，曾 宇． 六味地黄汤中 4 种有效成分的含量测定
［J］． 中医院药学杂志，2007，27(8) :1034-1035．
［16］ 王琼裙，林向前． 两种制备工艺六味地黄丸的紫外分析
［J］． 福建中医药，2008，39(5):51-52．
HPLC法测定乌苏里瓦韦药材中 2 种活性成分
王丽红1，2， 宋琳琳2， 吴宏斌2， 赵 龙2， 刘德江3， 穆立蔷1*
(1. 东北林业大学林学院，黑龙江 哈尔滨 150040;2. 佳木斯大学药学院，黑龙江 佳木斯 154007;3. 佳木
斯大学生命科学院，黑龙江 佳木斯 154007)
收稿日期:2013-03-12
基金项目:黑龙江省教育厅课题 (12521529)
作者简介:王丽红 (1968—)，女，博士生，教授，从事植物药的研究与开发利用。TEL:13846175975，E-mail:wlh_ 6663@ 163. com
* 通信作者:穆立蔷 (1966—)，女，教授，主要从事植物资源开发利用的研究工作。E-mail:mlq0417@ 163. com
摘要:目的 建立 HPLC法测定乌苏里瓦韦药材中绿原酸和叶黄素的方法。方法 测定绿原酸色谱条件为 Agilent E-
clipse XDB-II C18柱 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈-0. 4% 磷酸溶液 (13 ∶ 87) ，体积流量为 1. 0 mL /min，
进样量为 10 μL，柱温为 25 ℃，检测波长为 325 nm。叶黄素色谱条件为 Agilent Eclipse C18柱 (4. 6 mm × 250 mm，5
μm)，流动相为 100%甲醇，柱温为室温，体积流量为 1 mL /min，检测波长为 474 nm。结果 绿原酸线性范围为 0. 4
～ 4. 0 μg，样品平均加样回收率为 100. 3%，方法精密度 ＲSD (n = 5)为 2. 03%，绿原酸含有量为 2. 635 mg /g;叶黄
素线性范围为 1. 0 ～ 100. 0 μg，样品平均加样回收率为 99. 45%，方法精密度 ＲSD (n = 5)为 1. 90%，叶黄素含有量
为 110 μg /g。结论 上述方法快捷、简便、准确、专属性好、灵敏度高。
关键词:乌苏里瓦韦;绿原酸;叶黄素;HPLC
中图分类号:284. 1 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2014)03-0654-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 03. 051
乌苏里瓦韦，为蕨类水龙骨科瓦韦属植物乌苏里瓦韦
Lepisorus ussuriensis (Ｒegel et Maack)Ching 的全草，生于海
拔 800 m左右的山地树干或山坡荫处岩石上［1］。 《贵州民
间方药集》记载其药材名为射鸡尾，主治风湿疼痛、跌打
伤肿、清热、治惊风。 《中华本草》、 《广西药用植物名
录》、《湖南药物志》、《东北常用药用植物》等记载该植物
具有利尿、镇痛、止咳、活血的功效。并且这些地区的居
民将其称为石茶、树茶，将其代茶饮用，治疗各种炎症疼
456
2014 年 3 月
第 36 卷 第 3 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
March 2014
Vol． 36 No． 3
痛［1-4］，是一种常用的民间用药。但至今未见对该种蕨类植
物化学成分及质量分析的报道。为了弄清乌苏里瓦韦的有
效物质基础，保证民间用药的安全及可控，课题组对其化
学成分进行了研究，表明该植物中含有多种化学成分，主
要活性成分为绿原酸、叶黄素等。课题组采用 HPLC 法对
乌苏里瓦韦中的绿原酸及叶黄素进行测定，拟为乌苏里瓦
韦的质量控制和进一步开发利用提供科学依据。
1 仪器、试剂、材料
安捷伦 1100 型高效液相色谱仪 (四元泵、自动进样
器、恒温箱和 DAD检测器)、安捷伦液相色谱工作站;凌
光 UV7547CＲT紫外可见分光光度计等。
实验材料于 2012 年 7 月中旬采自黑龙江省汤原县鹰
山。经佳木斯大学药学院王丽红教授鉴定为蕨类水龙骨科
瓦韦属植物乌苏里瓦韦的全草。将材料洗净，阴干。将干
燥药材粉碎，过 40 目筛，备用。
绿原酸对照品 (纯度 98%，中国药品生物制品检定
所);叶黄素对照品 (纯度 90%，sigma 公司)。乙腈、甲
醇为色谱纯，磷酸为优级纯;异丙醇、丙酮为分析纯;哇
哈哈纯净水。
2 方法和结果
2. 1 绿原酸的测定
2. 1. 1 绿原酸对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品
1. 000 mg，置 10 mL量瓶中，加甲醇定容，即得 100 μg /mL
的对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 取乌苏里瓦韦粉末约 1. 00 g，
精密加入甲醇 20 mL，超声处理 30 min，浓缩，置 10 mL棕
色量瓶中，定容。用 0. 22 μm 微孔滤膜过滤，即为供试品
溶液［5］。
2. 1. 3 绿原酸检测波长的选择 取绿原酸对照品适量，经
紫外全波长扫描，结果绿原酸在 325 nm 波长处有最大吸
收。故以 325 nm为检测波长。
2. 1. 4 测定绿原酸的色谱条件 参照药典法及文献资
料［6-8］，对色谱条件进行了优化。Eclipse XDB-II C18 柱
(250 mm ×4. 6 mm，5 μm);流动相为乙腈-0. 4%磷酸溶液
(13 ∶ 87) ;体积流量 1. 0 mL /min;进样量 10 μL;柱温
25 ℃;波长 325nm。按以上条件测定样品中绿原酸量，理
论塔板数不少于7 000。HPLC色谱图见图 1。
2. 1. 5 线性关系考察 分别吸取绿原酸含有量为 0. 4、
0. 8、1. 0、3. 0、4. 0 μg的对照品溶液，依次进样，测定峰
面积。以色谱峰面积 (mAu)为横坐标，进样量 (μg)为
纵坐标，进行回归分析得:y = 0. 000 5 x + 0. 171 5，Ｒ2 =
0. 996 4 (n = 5)，说明绿原酸进样量与峰面积在 0. 4 ～ 4 μg
范围内线性关系良好。
2. 1. 6 精密度试验 精密移取绿原酸对照品 10 μL，采用
“2. 1. 4”项色谱条件，连续进样 5 次，分别测定峰面积，
计算 ＲSD值为 2. 03%。
2. 1. 7 稳定性试验 取“2. 1. 2”中供试品溶液，分别在
0、2、4、8、12、24 h 进样，测定峰面积，计算 ＲSD 值
1． 绿原酸
图 1 对照品 (A)和供试品 (B)的 HPLC
色谱图
为 2. 56%。
2. 1. 8 加样回收率试验 精密称取已知绿原酸含有量的乌
苏里瓦韦药材粉末 0. 500 0 g，共 6 份，分别加入一定量的
绿原酸对照品，采用“2. 1. 2”项下操作，按照 “2. 1. 4”
项色谱条件进样，分别测定峰面积，计算回收率，结果见
表 1。
表 1 绿原酸加样回收试验结果 (n =6)
取样
量 / g
样品中原
有量 /mg
对照品加
入量 /mg
实测
值 /mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
ＲSD
0. 502 1 1. 32 0. 66 1. 99 101. 5
0. 505 0 1. 33 0. 66 1. 98 98. 5
0. 500 7 1. 32 0. 66 1. 98 100. 0 100. 3 1. 34
0. 501 1 1. 32 0. 66 1. 99 101. 5
0. 504 5 1. 33 0. 66 2. 00 101. 5
0. 500 8 1. 32 0. 66 1. 97 98. 5
2. 1. 9 重复性试验 分别称取 5 份乌苏里瓦韦药材各
1. 000 g，按“2. 1. 2”项方法制备供试品溶液，分别进样
测定绿原酸，计算 ＲSD值为 0. 76%。
2. 1. 10 样品测定 精密称取乌苏里瓦韦药材各 1. 000 g，
5 份，按“2. 1. 2”项方法制备供试品溶液，采用“2. 1. 4”
项色谱条件测定峰面积，根据绿原酸标准曲线 y =
0. 000 5x + 0. 171 5计算，乌苏里瓦韦中绿原酸平均含有量
为 2. 635 mg /g。
2. 2 叶黄素的测定
2. 2. 1 对照品溶液的制备 精密称取叶黄素对照品 10. 000
mg，用丙酮溶解并定容于 10 mL 量瓶中，摇匀，得到对照
品贮备液 (1 mg /mL)。将贮备液分别稀释为 1、10、25、
50、100 μg /mL。
2. 2. 2 供试品溶液的制备 精密称取 2. 00 g乌苏里瓦韦粉
末，放入锥形瓶中，加入 80 mL 的丙酮溶液。70℃恒温提
取 30 min。将提取液浓缩后，定容至 10 mL。经 0. 22 μm
滤膜过滤后，即为供试品溶液。
556
2014 年 3 月
第 36 卷 第 3 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
March 2014
Vol． 36 No． 3
2. 2. 3 叶黄素检测波长的选择 将叶黄素对照品溶液在
200 ～ 800 nm波长范围内进行扫描，发现其在 446 nm 波长
处有最大吸收峰，故确定检测波长为 446 nm。
2. 2. 4 测定叶黄素的色谱条件［9-10］ 使用 Agilent Eclipse
XDB-II C18 (250 mm ×4. 6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为
100%甲醇;体积流量 1 mL /min;柱温为室温;进样量 10
μL;检测波长 446 nm。按以上条件测定样品中叶黄素量，
理论塔板数不少于3 000。HPLC色谱图见图 2。
1． 叶黄素
图 2 对照品 (A)及供试品 (B)色谱图
2. 2. 5 线性关系考察 分别吸取 10 μL 的 1、10、25、50
以及 100 μg /mL 的对照品溶液进样，按“2. 2. 4”项中色
谱条件测定色谱峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量
(μg)为横坐标，进行分析，得线性回归方程: y =
101. 10x + 221. 20 (r = 0. 999 8)，叶黄素对照品站在 1 ～
100 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。
2. 2. 6 精密度试验 精密吸取质量浓度为 25 μg /mL 的叶
黄素对照品溶液连续进样 5 次，每次进样 10 μL，测定峰面
积，其 ＲSD为 1. 9%。
2. 2. 7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液，分别于制备后
0、4、8、12、24、48 h测定峰面积，供试品溶液在 2 d 内
基本稳定，峰面积的 ＲSD为 3. 4%。
2. 2. 8 加样回收率试验 精密称取已知叶黄素含量的乌苏
里瓦韦药材粉末 1. 000 g，共 6 份，分别加入一定量的叶黄
素对照品，采用“2. 2. 2”项下操作，按照“2. 2. 4”项色
谱条件进样，分别测定峰面积，计算回收率，结果见表 2。
表 2 叶黄素加样回收试验结果 (n =6)
取样
量 / g
样品中原
有量 /mg
对照品加
入量 / mg
实测
值 /mg
回收
率 /%
平均回
收率 /%
ＲSD
0. 503 4 0. 056 0. 030 0. 087 103. 3
0. 500 8 0. 055 0. 030 0. 084 96. 7
0. 501 4 0. 055 0. 030 0. 084 96. 7 99. 45 3. 26
0. 503 6 0. 056 0. 030 0. 086 100. 0
0. 501 1 0. 055 0. 030 0. 084 96. 7
0. 500 6 0. 055 0. 030 0. 086 103. 3
2. 2. 9 重复性试验 精密称取乌苏里瓦韦药材 2. 00 g 样
品，按“2. 2. 2”项下方法制备，采用“2. 2. 4”项色谱条
件进样 5 次，测定并计算得到 ＲSD为 1. 30%。
2. 2. 10 样品测定 精密称取样品乌苏里瓦韦药材 2. 00 g，
5 份，按“2. 2. 2”项中的方法制备，将样品稀释 5 倍，进
样 10 μL，经测定叶黄素平均含有量为 110 μg /g，ＲSD
为 1. 50%。
3 讨论与结论
在绿原酸测定过程中，药典记载的金银花和菊花中绿
原酸的定量测定，波长分别选择为 327 nm和 340 nm，通过
紫外检测，绿原酸在 325 nm处有最大吸收。但在实验过程
中，采用 DAD检测器，分别对波长 327 nm和 340 nm的结
果进行了监测，结果这 2 个波长与 325 nm的波长，色谱图
相似，但分离度没有 325 nm 好，故选择 325 nm 作为乌苏
里瓦韦中绿原酸的检测波长。
在叶黄素测定过程中，先后采用甲醇-水 (90 ∶ 10)、
甲醇-水 (95 ∶ 5)、甲醇-水 (98 ∶ 2)、100%甲醇为流动
相，结果表明在采用前 3 种条件做流动相时，其叶黄素保
留时间较短，且叶黄素的分离度不高;在 100%甲醇为流
动相时，分离效果好，操作简便，色谱峰形最佳，保留时
间适中，且具有良好的分离度。
选用以上方法测定乌苏里瓦韦中绿原酸和叶黄素，准
确、快速，具有较高的准确度和良好的重现性，干扰少。
测定结果表明采用《中国药典》记载的绿原酸提取方法，
提取乌苏里瓦韦中的绿原酸，经测定其绿原酸量较高。乌
苏里瓦韦中叶黄素的量比大多数叶类蔬菜中量高［11］。绿原
酸［12-13］和叶黄素［14-15］都有广泛的药理作用，因此乌苏里瓦
韦是一种有很大开发价值的药用植物。
参考文献:
［1］ 国家中医药管理局《中华本草》编委会． 中华本草［M］．
上海:上海科学技术出版社，1999:238．
［2］ 广西壮族自治区中医药研究所． 广西药用植物名录［M］．
南宁:广西人民出版社，1986:34．
［3］ 刘克明． 湖南药物志［M］． 长沙:湖南科学技术出版社，
2000:870．
［4］ 朱有昌． 东北药用植物［M］． 哈尔滨:黑龙江科学技术出
版社，1989:39．
［5］ 闵春艳，游本刚，许琼明，等． 正交试验比较金银花药材
中绿原酸与木犀草苷的乙醇提取工艺［J］． 中成药，2011，
33(10):1815-1818．
［6］ 国家药典委员会． 中华人民共和国药典:2010 年版一部
［S］． 北京:中国医药科技出版社，2010，1:205．
［7］ 卢金清，何雪峰，吴丹慧，等． HPLC 测定神农香菊提取
物中绿原酸、木犀草素的含量［J］． 中成药，2009，31
(5) :799-800．
［8］ 李喜凤，师绘敏，陈随清，等． HPLC 同时测定蒲公英中
咖啡酸和绿原酸的含量［J］． 中成药，2008，30(10) :
1553-1555．
［9］ 韩 磊，宋曙辉． 植物叶黄素的高效液相色谱分析测定
［J］． 中国农学通报，2005，21(1) :73-75．
656
2014 年 3 月
第 36 卷 第 3 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
March 2014
Vol． 36 No． 3
［10］ 王子昕，林晓明． 北京地区常见蔬菜中叶黄素、玉米黄素
和 β-胡萝卜素的测定及其含量［J］． 营养学报，2010，32
(3):290-293．
［11］ 赵志红，张逢秋，朱 慧． 反相高效液相色谱法测定食品
中的叶黄素［J］． 食品科技，2009，34(1):261-263．
［12］ dos Santos M D，Almeida M C ，Lopes N P，et al． Evaluation
of the Anti-inflammatory，Analgesic and Antipyretic Activities of
the Natural Polyphenol Chlorogenic Acid［J］． Biolog harmaceu-
til Bullet，2006，29(11) :2236-2240．
［13］ Shan Jianhua ，Fu Jin ，Zhao Zhihui ，et al． Chlorogenic acid
inhibits lipopolysaccharide-induced cyclooxygenase-2 expression
in ＲAW264. 7 cells through suppressing NF-κB and JNK /AP-1
activation［J］． Inter Immunopharmacol， 2009， 9 (9 ) :
1042-1048．
［14］ Wang Mingchen ，Tsao Ｒong，Zhang Shanfeng，et al． Antioxi-
dant activity，mutagenicity /anti-mutagenicity，and clastogenici-
ty /anti-clastogenicity of lutein from marigold flowers［J］． Food
Chem Toxicol，2006，44(9) :1522-1529．
［15］ Kim J E，Clark Ｒ M．，Park Y，et al． Lutein decreases oxida-
tive stress and inflammation in liver and eyes of guinea pigs fed
a hypercholesterolemic diet［J］． Nutr Ｒes Pract． 2012，6(2) :
113-119．
山楂切片工艺研究
石典花1， 戴衍朋1， 孙立立1* ，曹玉华2，王建刚2
(1. 山东省中医药研究院，山东 济南 250014;2. 山东博康中药饮片有限公司，山东 青州 2625000)
收稿日期:2013-04-22
基金项目:国家中医药管理局全国名老中医药专家冯宝麟传承工作室 (2010) ;“国家重大新药创制”“中药质量标准研究和信息化体
系建设平台—中药饮片质量标准研究平台”(2009ZX09308-004) ;山东省中医药科技发展计划项目 (2011-170;2013-132)
作者简介:石典花 (1981—) ，女，助理研究员，主要从事中药炮制研究。
* 通信作者:孙立立 (1953—) ，女，研究员，主要从事中药炮制研究。Tel: (0531)82949829
摘要:目的 优选山楂最佳切片工艺。方法 以内在质量 (有机酸量、金丝桃苷量、水浸出物)和传统外观质量为
指标，采用 L9(3
4)正交试验，对切片厚度、干燥温度、干燥时间三因素进行考察。结果 优选的最佳切制工艺为:
取鲜山楂，切成厚度为 4 mm的片，置 60 ℃烘箱，干燥 4 h，取出，晾凉。结论 优选得到的山楂切片工艺可用于规
范山楂的切片生产。
关键词:山楂;切片;正交试验;有机酸;金丝桃苷;水浸出物
中图分类号:Ｒ283 文献标志码:B 文章编号:1001-1528(2014)03-0657-04
doi:10. 3969 / j． issn． 1001-1528. 2014. 03. 052
山楂为蔷薇科植物山里红 Crataegus pinnatifida Bge．
var． major N． E． Br． 或山楂 Crataegus pinnatifida Bge． 的干
燥成熟果实。山楂具有消食健胃，行气散瘀，化浊降脂的
功效，用于肉食积滞，胃脘胀满，泻痢腹痛，瘀血经闭，
产后瘀阻，心腹刺痛，胸痹心痛，疝气疼痛，高脂血症［1］。
山楂是药食两用品［2-3］，市场需求量较大，山东地区为山楂
主要产区，通过实地调查发现，山楂采收后除部分用于食
用外，大部分由当地农户手工切片，这个过程存在切片厚
度参差不齐，晾晒程度受天气影响等问题，从而导致山楂
片颜色变黄，甚至发霉，因此种植户为追求山楂片色泽好
看，在山楂切制后用硫磺进行熏制，所以目前流通到市场
上的山楂片多为硫磺熏制品，硫磺熏制品中残留的硫化物
对人们的健康造成损害。
《中国药典》2010 年版一部收载山楂的采收加工方法
仅为“秋季果实成熟时采收，切片，干燥”，无具体工艺
数据参数。因此本研究采用正交试验法，以内在质量 (有
机酸量、金丝桃苷量、水浸出物)和传统外观质量为指
标，对影响山楂片质量的切片厚度，干燥温度，干燥时间
进行研究，优选出山楂最佳切片工艺，研究结果可用于规
范山楂片的生产。
1 仪器与试药
1. 1 样品 山楂 (山里红)果实，2012 年 10 月采于山东
省青州市王坟镇陈家泉村，经我院中药资源室林慧彬研究
员鉴定为蔷薇科植物山里红 Crataegus pinnatifida Bge． var．
major N． E． Br． 的成熟果实。
1. 2 仪器 Waters2695 型高效液相色谱仪，2966 二极管阵
列检测器 (美国 Waters 公司)。瑞士 METTLEＲ XS205
DU10 －5电子天平。B3200S-T型超声波清洗器 (上海必能信
超声有限公司) ，MILLI-Q超纯水纯化系统。
1. 3 试药 金丝桃苷对照品 (自制，归一化法测定纯度为
99. 0%) ;乙腈为色谱纯 (迪马公司) ，其他试剂均为分
析纯。
756
2014 年 3 月
第 36 卷 第 3 期
中 成 药
Chinese Traditional Patent Medicine
March 2014
Vol． 36 No． 3