全 文 ：用高效液相色谱法测定飞龙掌血中茴芹香豆素含量
梁　妍1 , 黄　俊1 , 赵　超2 , 郝小燕1＊
(1.贵阳医学院药学系分析化学教研室 , 贵州贵阳　550004;2.贵州省 、中国科学院天然产物化学重点实验室 , 贵州 贵阳　550002)
[摘　要] 目的:用高效液相色谱法(HPLC)对苗药飞龙掌血中茴芹香豆素含量进行测定。方法:采用Hypersil C18柱
为分析柱 ,以甲醇-水(70∶30)为流动相,检测波长254 nm。结果:其线性范围为 0.004 16～ 0.416μg ,平均回收率为 99.65
%,相对标准差(RSD)=1.46%。结论:本法简便、准确、重现性好,可用于飞龙掌血中茴芹香豆素的含量测定。
[关键词] 色谱法 , 高压液相;中草药;飞龙掌血;茴芹香豆素
[中图分类号] R284.2　　[文献标识码] A　　[文章编号] 1000-2707(2003)06-0519-02
Determination of Pimpinellin in Toddalia asiatica with HPLC
LIANG Yan1 , HUANG Jun1 , ZHAO Chao2 , HAO Xiao-yan1＊
(1.Department of Pharmacy , Guiyang Medical College , Guiyang 550004 , China;2.The Key Laboratory of
Chemistry for Natural Products of Guizhou Province and Chinese Academy of Sciences , Guiyang 550002 , China)
[ Abstract] Objective:To determine the content of pimpinellin in Toddalia asiatica.Methods:Using Hy-
persil C18 column and methanol-water(70∶30)as mobile phase , with the detection wavelength of 254 nm.
Results:The linear range of pimpinellin was 0.004 16 ～ 0.416μg.The average recovery rate was 99.65%
with RDS of 1.46%.Conclusion:The method is simple and accurate , with a good reproducibility , and
can be used as a quantitative analysis method.
[ Key words] chromatography ,high pressure liquid;drugs , chinese herbal;Toddalia asiatic;pimpinellin
　　飞龙掌血(Toddalia asiatica Lam.)是芸香科飞
龙掌血属植物的根或根皮 ,民间用其水煎剂及药酒
治疗跌打损伤 、风湿性关节炎及多种痛症 、血症 ,具
有活血化瘀 、止痛 、止血 、驱风除湿等功效 ,是传统
的活血化瘀中草药[ 1] ,也是一种苗药。近年研究表
明 ,飞龙掌血在治疗心血管疾病方面有新的应用前
景[ 2 ～ 4] 。作者从飞龙掌血中分离出的一种淡黄色
结晶 ,经波谱分析鉴定其结构为茴芹香豆素。据报
道[ 5] ,茴芹香豆素具有抑制结核菌生长的活性 。
2002年 3月 ～ 5月用 HPLC 对其成分进行定量分
析 ,有助于今后开发新药 ,并为制定质量标准提供
一定的依据。
1　材料和方法
1.1　仪器与试药　仪器:HP1100高效液相色谱仪
(美国惠普), HP1100/WIND-3D 化学工作站。试
剂:甲醇(色谱纯 、分析纯)、超纯水 、无水乙醇(优级
纯)。药材:飞龙掌血的根皮粉碎后作提取用料 。
药材采集于贵阳市孟关 ,经贵州省中药研究所陈德
媛研究员鉴定 。对照品是作者从飞龙掌血中分离 、
纯化 ,经光谱解析及对照标准图谱确定其结构 ,纯
度达 99.5%以上。
1.2　方法
1.2.1　样品制备　精密称取原药粉末 1.00 g ,用
50ml甲醇浸泡数小时 ,用超声波震荡 30 min , 过
滤 ,重复提取 3次 ,合并提取液 ,减压浓缩至一定体
积 ,用甲醇定容到 50 ml容量瓶中 ,摇匀 ,过滤 ,精
密量取 1.00 ml到 5 ml容量瓶中 ,用甲醇稀释至刻
度 ,摇匀 ,微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,滤液作为供试
品溶液。
1.2.2　分离条件 　色谱柱:Hyperside C18(5 μm
ID4.60 mm×250 mm);流动相:甲醇∶水=70∶30;柱
温:25 ℃;流速:1 ml/min;紫外检测波长:254 nm;
进样量:5 μl。分离效果见图 1。
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第28卷　第 6期
2003年 12月 　　　 贵 阳 医 学 院 学 报JOURNAL OF GUIYANG MEDICAL COLLEGE　　　Vol.28　No.62003.12
＊通讯作者　Tel:(0851)6908508 , E-mail:haoxiaoyan@vip.163.com
A.对照品　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　B.样品
图 1　飞龙掌血的高效液相色谱
Fig.1　HPLC chromatogram of the samples
1.2.3　标准曲线制备　精密称取对照品 10.4 mg
于50 ml容量瓶中 ,用甲醇定容。然后取 10.00 ml
于50 ml容量瓶中 ,用甲醇稀释至刻度 ,摇匀 ,得浓
度为 0.041 6 g/L的对照品溶液。分别精密吸取此
溶液0.1 ,2.0 ,4.0 ,6.0 ,10μl进样 ,在上述色谱条件
下测定峰面积 ,以峰面积积分值为纵坐标(A),以
含量(μg)为横坐标(C)进行回归分析得方程:A=1
778.205 72 C+0.615 936 3 , r =0.999 99(n =5)。
茴芹香豆素在 0.004 16 ～ 0.416 μg线性关系良好。
2　结果
2.1　精密度实验　精密取供试品溶液 5 μl ,重复
进样 5次 ,测定峰面积 ,RSD=0.28%。
2.2　重复性实验　按供试品处理方法平行制备 5
份样品液 ,用同法测定茴芹香豆素的含量 , RSD=
2.01%。
2.3　回收率实验　准确称取样品适量 ,分别精密
加入适量对照品溶液 ,并按供试品处理方法制备 ,
同法测定 ,结果见表 1。
表 1　茴芹香豆素回收率
Tab.1　Results of recovery
样品量
(mg)
加样量
(mg)
测得量
(mg)
回收率
(%)
平均值
(%)
RSD
(%)
0.186 3 0.166 4 0.350 3 98.56
0.189 0 0.166 4 0.357 4 101.20
0.193 2 0.166 4 0.365 4 103.49 99.71 2.95
0.180 7 0.166 4 0.339 8 95.61
0.178 5 0.166 4 0.344 4 99.70
2.4　样品测定　按样品制备方法分别制备 3个批
次的飞龙掌血药材的样品液 ,每个批次平行做 3
份 ,用上述方法测定 ,结果见表 2。
表2　飞龙掌血样品中茴芹香豆素含量测定(n=3)
Tab.2　Measurement results of the samples
批次 茴芹香豆素的含量(%)
1 2 3
平均含量
(%)
1 1.885 1.859 1.812 1.852
2 1.402 1.435 1.386 1.408
3 1.529 1.556 1.482 1.552
3　讨论
　　制备飞龙掌血样品溶液时 ,分别用不同溶剂甲
醇和无水乙醇提取 ,结果表明甲醇提取率高于无水
乙醇 ,故采用甲醇为提取溶剂 。香豆素类的化合物
多具有生理活性 ,该化合物在飞龙掌血药材中的含
量较高 ,具有进一步开发研究的价值。HPCL 法简
便 、准确 、重现性好 、稳定 、可靠 ,可为制定其质量标
准提供依据。
本工作得到贵州省 、中国科学院天然产物化学
重点实验室杨小生研究员 、汪冶博士 、徐必学同志
及仪器组张建新副研究员 、周欣教授及实验室其他
同志的大力支持 ,在此表示致谢。
4　参考文献
[ 1] 江苏新医学院.中药大辞典[ S] .上海:上海科学技术出
版社 , 1977.279.
[ 2] 任先达.飞龙掌血水提物的扩血管作用及原理初探
[ J] .暨南大学学报 , 1990 , 11(2):29.
[ 3] 任先达 ,李素梅.龙晶一号对离体大鼠主动脉环的作用
[ J] .中国病理生理杂志 , 1993 , 9(2):129.
[ 4] 何小萍 , 任先达.飞龙掌血水提物对垂体后叶素所致
大鼠缺血心肌的保护作用[ J] .1998 , 14(3):383.
[ 5] 孙文基 ,绳金房.天然活性成分简明手册[ M] .北京:中
国医药科技出版社 , 1998.448.
(2003-02-27收稿 , 2003-05-22 修回)
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贵 阳 医 学 院 学 报　　　　　　　　　　　　　　28卷