全 文 ：图 9 缓 、 速释层不同载药量对秋水仙碱双层片释药影响
Fig 9 Ef fect of di ff erent layers of drug loading on drug release
由表 1 可知 , 1 ～ 12 h , 以 Right Peppas 方程最能表征
双层片释放过程和释放动力学特征。
一般情况下 , 药物从骨架片中的释放机制可通过 Rit-
ger-Peppas 经验式来描述。公式中释放指数 n 是表征释放机
制的特征参数 , 对于片剂而言 , 当 0.045
当 n>0.089 时 , 为骨架溶蚀机制[ 10] 。从列表中可以看出 ,
在 Ritg er-Peppas 方程中释放指数为 0.4651 , 因此 , 其释药
特征为非 Fick 扩散 (即药物扩散和骨架溶蚀协同作用)。
3 讨论
速/缓释双层片能在迅速达到有效血药浓度的同时降低
血浆药物浓度波动 , 减少给药次数 , 提高药物疗效 , 降低不
良反应 , 而且能改善病人的顺应性 , 使用方便 , 因而越来越
引起人们的关注。体外释放实验是筛选缓释 、 控释制剂处方
和控制其质量的重要手段[ 11] 。根据中国药典及其他缓 、 控
指导原则 , 缓释片体外释放检查最少应取 3 个点 (0 ～ 2 h 为
一个点 , 中间取一个点 , 最终点为一个点)[ 12] , 但除最终的
累计释放量有所规定外 , 对于双层片的各时间点释放量并未
制定具体细则要求 , 本制剂根据临床病理特征 、 速释层比例
及制剂释放特点制定相关释放量 , 释放量标准拟定为 2 h
35%～ 50%、 6 h 60%～ 75%、 12 h 90%以上。本制剂在研
究过程中以 1、 2 、 4、 6 、 8 、 10 、 12 h 累积释放量为考察指
标 , 以精确稳定的 H PLC 系统进行定量分析。考察结果显
示 , 双层片受工艺影响比较小 , 在工业化过程中应该比较容
易控制 , 此外 , 释放介质对体外释放的影响也比较小。尽管
秋水仙碱属于难溶性药物 , 但由于每片含量少 (0.5 mg ·
片-1), 所以不存在漏槽条件的问题。优化后的处方 , 以水
为介质 , 在温度为 37℃, 浆速 100 转的条件下 , 各时间点
释药量均符合所制定标准 , 且释药曲线零级方程拟合的 R
值为 0.985 , 12 h 累积释放量达到了 90%以上 , 且不同批次
双层片稳定性良好 , 因此 , 此研究为秋水仙碱开劈新的口服
剂型提供了一个较有价值的参考。
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(收稿日期:2008-12-07;修回日期:2008-12-28)
高效液相色谱法同时测定蛇床子中蛇床子素和异茴芹素的含量
黄彩虹1 , 雷鹏1 , 刘韶1 , 李新中1＊ , 陈宝进2 (1.中南大学湘雅医院药剂科 , 长沙 410008;2.中南大学药学院 ,
长沙 410013)
摘要:目的 建立高效液相色谱法同时测定蛇床子中蛇床子素和异茴芹素的含量。方法 Promosil C18色谱柱
(4.6 mm×250 mm , 5 μm);流动相为甲醇-0.1%磷酸 (80∶20);流速为 0.8 mL ·min-1 ;检测波长为 265 nm ;
作者简介:黄彩虹 , 女 , 本科 , 药师 , 主要从事中药质量控制研究工作 , E-mail:h ch2007hhxx @163.com ＊通讯作者:李新中 ,
男 , 博士生导师 , 主任药师 , T el:(0731) 4327454 , E-mai l:xy lixin@medmai l.com.cn
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中南药学 2009年 3月第 7卷第 3期 C ent ral S outh Ph armacy.March 2009 , Vol.7 No.3
柱温为 30 ℃。结果 蛇床子素在 0.2191 ～ 2.191 μg 线性关系良好 , 平均回收率为 98.53%;异茴芹素在 0.0126
～ 0.126 μg 线性关系良好 , 平均回收率为 99.23%。结论 该方法简便 、 快速 、 准确 、 重复性好 , 可用于蛇床子中
蛇床子素和异茴芹素的同时测定。
关键词:高效液相色谱法;蛇床子;蛇床子素;异茴芹素;含量测定
中图分类号:R284.1 , R927.2 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2009)03-0171-04
Simultaneous determination of osthole and
isopimpinellin in Fructus Cnidii by HPLC
HUANG Cai-hong 1 , LEI Peng1 , LIU Shao1 , LI Xin-zhong 1 , CH EN Bao-jin2 (1.Department o f Pharmacy , X ian-
gya Hospital , Central South Univ ersity , Changsha 410008;2.School o f P harmaceutical Sciences , Central South U-
niv ersity , Changsha 410013)
Abstract:Objective To establish an HPLC method for the simultaneous determination of osthole and isopimpinellin in
Fructus Cnidii.Methods HPLC analy sis was perfo rmed on a Promosil C18 (250 mm×4.6 mm , 5μm)column.The column
temperature was 30 ℃.The mobile phase was a mixed liquid with MeOH - 0.1% H3PO4 (80∶20)and the flow rate w as
0.8 mL·min-1.The detection wavelength was 265 nm.Results A good linearity of osthole was at 0.2191 ～ 2.191μg , and
the average recovery was 98.15%.A good linearity of isopimpinellin was at 0.0126 ～ 0.126 μg , and the average recovery w as
99.23%.Conclusion The method is simple , rapid , accurate and reproducible fo r the simultaneous determination of osthole
and isopimpinellin in Fructus Cnidii.
Key words:HPLC;Fructus Cnidii;osthole;isopimpinellin;determination
蛇床子为伞形科植物蛇床 Cnidium monnieri (L .)
Cuss.的干燥成熟果实 , 是临床上常用的攻毒杀虫药之一。
气香 , 味辛 、 苦 , 入肾 、 肝经 , 具有温肾助阳 , 祛风燥湿 ,
杀虫 、 止痒等功效。一般内服治男子阳痿 、 阴囊湿痒 , 女子
宫寒不孕及风湿痹痛 , 外用治疗滴虫性阴道炎 、 急性渗出性
皮肤病等病症[ 1-3] 。现代药理研究发现蛇床子还防治骨质疏
松及促进透皮吸收等方面具有一定作用[ 4-6] 。蛇床子主要含
蛇床子素 、 异茴芹素 、 欧前胡素等香豆素类成分 , 目前 , 蛇
床子中蛇床子素的含量测定已有报道[ 7-10] , 而异茴芹素的含
量测定相关文献甚少 , 为更全面地反应蛇床子的质量 , 本实
验建立了 H PLC 法同时测定蛇床子中蛇床子素 、 异茴芹素
含量的方法。
1 仪器与试药
Agilent 1100 高效液相色谱仪 (G1311A 四元梯度泵 ,
G1313A 自动进样器 , G1311A 柱温箱 , G1313A 二级管
阵列检测器 , 美国安捷伦公司);AG285 分析天平 (德
国梅特勒公司);KS-600D超声清洗器 (宁波科生仪器
厂)。
蛇床子素对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号:
110822-200305 , 供含量测定用);异茴芹素对照品 (自制 ,
归一法计算含量大于 98%)。蛇床子药材 (市售 , 经湘雅医
院药剂科徐平声副主任药师鉴定为伞形科植物蛇床 Cnid ium
monnieri (L.)Cuss.的干燥成熟果实)。甲醇 (色谱纯),
其他试剂分析纯 , 流动相用水为重蒸馏水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为 P romosil C18柱 (4.6 mm ×250 mm , 5 μm);
流动相为甲醇-0.1%H3PO 4 (80 ∶20 );流速 0.8 mL ·
min-1 ;检测波长为 265 nm;柱温为 30 ℃;进样量为5 μL。
理论塔板数按蛇床子素 、 异茴芹素计算应均≥4 000 , 在上
述色谱条件下 , 对照品和供试品的色谱图见图 1。
图 1 HPLC色谱图
Fig 1 HPLC ch romatogram
A.对照品 (referen ce sub stance);B.供试品 (sam ple);1蛇床子素 (osthole);2异茴芹素 (i sopimpinellin)
172
C ent ral S outh Ph arm acy.M arch 2009 , Vol.7 No.3 中南药学 2009年 3月第 7卷第 3期
2.2 对照品溶液制备
精密称取蛇床子素对照品 21.91 mg , 置 50 mL 容量瓶 ,
加甲醇溶解 , 并稀释至刻度 , 摇匀 , 得到浓度为 438.2μg·
mL-1的蛇床子素对照品溶液;精密吸取异茴芹素对照品
6.30 mg , 置 50 mL 容量瓶 , 加甲醇溶解 , 并稀释至刻度 ,
摇匀 , 得到浓度为 126.0 μg ·mL-1的异茴芹素对照品溶液;
精密吸取蛇床子素对照品溶液 (438.2 μg ·m L-1) 5 mL ,
异茴芹素对照品溶液 (126.0 μg ·m L-1)1 m L , 置 10 mL
量瓶中 , 加甲醇至刻度 , 摇匀 , 得混合对照品溶液 (蛇床子
素 219.1μg ·mL-1 , 异茴芹素 12.6 μg·mL -1)。
2.3 供试品溶液制备
取蛇床子粉末约 0.2 g , 精密称定 , 置 25 m L 量瓶中 ,
加甲醇 20 m L , 超声提取 30 min , 室温放置 30 min , 加甲醇
至刻度 , 摇匀 , 滤过 , 取续滤液 , 用微孔滤膜 (0.45 μm)
过滤 , 即得。
2.4 线性关系的考察
分别精密吸取混合对照品溶液 1、 2、 4 、 6、 8 、 10 μL ,
进样 , 按上述色谱条件测定色谱峰面积 , 以进样量为横坐标
(X)、 以峰面积积分值为纵坐标 (Y)绘制标准曲线。得蛇床
子素回归方程为:Y = 902.9 X - 0.881 5 , r=0.999 9 , 线
性范围 0.2191 ～ 2.191μg;异茴芹素回归方程:Y =5 093 X
+22.413 , r=0.999 8 , 线性范围 0.0126 ～ 0.126μg。
2.5 精密度实验
精密吸取同一供试品溶液 5 μL , 按上述色谱条件 ,
重复进样 6 次 , 记录峰面积 , 结果蛇床子素 、 异茴芹素
峰面积的 RSD 分别为 0.63%、 0.20%。 表明仪器精密度
良好 。
2.6 稳定性考察
取同一供试品溶液 , 按上述色谱条件 , 分别在 0 、 2 、
4 、 6、 8 、 12 h 进样 , 记录峰面积 , 结果蛇床子素 、 异茴芹
素峰面积的 RSD 分别为 1.02%、 0.29%。表明供试品溶液
在 0 ～ 12 h 内稳定性良好。
2.7 重复性试验
取同一批药材粉末 6 份 , 精密称定 , 按 “ 2.3” 项下方
法制备并测定 , 蛇床子素平均含量为 2.328 %, RSD 为
1.85%;异茴芹素平均含量为 0.114 %, RSD 为 1.10%。
表明本方法重复性好。
2.8 加样回收率试验
取已知含量蛇床子粉末 6 份 , 每份约 0.1 g , 精密称定 ,
分别添加浓度为 438.2 μg · m L-1的蛇床子素对照品溶液
5 mL 及 126.0 μg·mL -1的异茴芹素对照品溶液 1 m L , 按
“ 2.3” 项下方法制备并测定 , 计算 , 蛇床子素 、 异茴芹素的
平均回收率分别为 98.53%、 99.23%, 其 RSD 分别为
1.77%、 1.68%, 结果见表 1。
2.9 样品测定
分别精密吸取混合对照品溶液与供试品溶液各 5 μL ,
按上述色谱条件测定 , 并计算蛇床子素 、 异茴芹素的含量。
结果见表 2。
3 讨论
根据对蛇床子素 、 异茴芹素对照品溶液 UV 扫描结果 ,
表 1 加样回收率试验结果
Tab 1 Recovery
取样量
(sam ple
w eigh t)
/ g
样品含量
(sam ple
content)
/mg
加入量
(added
amount)
/m g
测得量
(measu red
amount)
/mg
回收率
(recovery)
/ %
平均回收率
(average
recovery)
/ %
RSD
/ %
蛇 0.102 5 2.386 2.191 4.512 97.02
床 0.100 6 2.342 2.191 4.505 98.72
子 0.095 8 2.230 2.191 4.428 100.31
素 0.105 4 2.454 2.191 4.569 96.54 98.53 1.77
0.103 6 2.412 2.191 4.554 97.77
0.098 1 2.284 2.191 4.493 100.83
异 0.102 5 0.117 0.126 0.241 98.53
茴 0.100 6 0.115 0.126 0.243 101.84
芹 0.095 8 0.109 0.126 0.235 99.83
素 0.105 4 0.120 0.126 0.245 99.08 99.23 1.68
0.103 6 0.118 0.126 0.240 96.74
0.098 1 0.112 0.126 0.237 99.34
表 2 蛇床子中蛇床子素和异茴芹素的含量测定结果/ % (n=2)
Tab 2 Content determination of osthole and isopimpinellin in the sample/ %(n
=2)
购置地
(place of purchcase)
蛇床子素
(osthole)
异茴芹素
(idopimpinellin)
万众药房 2.328 0.114
老百姓大药房 2.046 0.097
双舟药房 1.210 0.056
湘雅医院 2.176 0.116
蛇床子素在 322 nm 及 265 nm 处有最大吸收 , 异茴芹素在
270 nm 处有最大吸收 , 为了同时对这 2 种成分进行定量且
不降低检测灵敏度 , 作者在波长 265 nm 处进行检测。 色谱
条件摸索时 , 发现流动相的 pH 值对色谱峰的峰形及分离度
影响很大 , 比较甲醇-不同浓度的磷酸溶液等多种溶剂系统 ,
确定流动相为甲醇- 0.1 %磷酸 (80∶20), 得到的色谱峰峰
形尖锐 , 分离度高 , 且基线稳定。此方法准确 、 快速 、 简
便 , 重现性好 , 可为其质量控制方法提供参考。
本试验在供试品溶液的制备过程中 , 曾选用甲醇 、 50%
甲醇 、 乙醇 、 50%乙醇分别超声处理 , 结果以甲醇超声提取
的供试液测定值最高 , 故确定以甲醇为超声处理的溶剂。并
对不同超声处理时间 (10、 20、 30 、 45、 60 min)进行考
察 , 结果在 10～ 30 min 之间 , 蛇床子素和异茴芹素的含量
逐渐增高;在 30～ 60 min 之间 , 含量增加很小 , 基本稳定 ,
故确定超声处理时间为 30 min。
本文建立了同时检测蛇床子中蛇床子素 、 异茴芹素含量
的方法 , 弥补了以前只对蛇床子药材中蛇床子素含量进行测
定的不足, 能全面反映出蛇床子药材中有效成分的含量情况 ,
对蛇床子药材及其制剂的质量控制具有一定的指导意义。
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(收稿日期:2009-01-12;修回日期:2009-02-05)
正交试验法筛选石杉碱甲骨架片处方的研究
唐宇1 , 2 , 贺福元2 , 3 , 周伟1 , 刘姹1 , 杨大坚1＊ (1.深圳市中药药学及分子药理学研究重点实验室暨香港理工大学现
代中药研究所 , 广东 深圳 518057;2.湖南中医药大学药学院 , 长沙 410208 ;3.中南大学临床药理研究所 , 长沙 410007)
摘要:目的 优化石杉碱甲骨架片的处方。方法 以石杉碱甲骨架片的硬度 、 体外累积释放度为指标 , 采用 3 因素
3水平正交设计法优化石杉碱甲骨架片的处方。结果 优化所得处方 H PMCK15M 用量为 48%, PVPP 用量为 6%,
CMCNa 用量为 10%, 硬度范围合适 , 体外溶出度符合缓释制剂要求。结论 该优化所得的石杉碱甲骨架片处方可
行 , 合理稳定。
关键词:正交试验;石杉碱甲;骨架片;缓释制剂
中图分类号:R944.9 文献标识码:A 文章编号:1672-2981 (2009)03-0174-03
Optimization of formulation of Huperzine-A matrix
tablets by orthogonal design
TANG Yu1 ,2 , HE Fu-yuan2 ,3 , ZH OU Wei1 , LIU Cha1 , YANG Da-jian1＊ (1.S hengzhen S tate Key Laboratory of
China Medicine and Molecular Pharmacology & Hongkong Poly technic University Institute of Modern Medicine ,
Shenzhen 518507;2.College of Pharmaceutics , H unan University of T raditional Chinese Medicine.Changsha
410208;3.I nstitute of Clinical Pharmacology , Central South University , Changsha 410007)
Abstract:Objective To optimize the formulation o f Huperzine-A matrix tablets (HA-M T).Methods Acco rding
to the o rthogonal design method with 3 factor s and 3 levels , the formulation was optimized using hardne ss and cumula-
tive re lease as evalua tion parame te rs.Results The optimum fo rmula wa s as fo llow s:HPMCK15M (48%), PVPP
(6%), CMCNa (10%).The hardne ss was pr ope r and the cumulativ e release fulfilled the requirement o f sustained-re-
lease do sage form design.Conclusion The fo rmula tion of ma trix tablets is feasible and stable.
Key words:or thogonal design;Hupe rzine-A;matrix-tablet;sustained-release
石杉碱甲 (Huperzine-A , HA)是从石杉科植物蛇足石
杉 (Ly lopodium serratum Thunb.ver.Long i petiola tum
spring)中提取的一种石松生物碱 , 是一种天然的高效 、 高
选择性可逆中枢乙酰胆碱酯酶抑制剂[1] , 临床上用于治疗重
症肌无力和脑动脉硬化引起的记忆障碍 , 包括老年健忘症和
老年性痴呆症等[ 2] 。具有作用时间长 、 口服生物利用度高 、
易通过血脑屏障 、 不良反应低等特点。国内已有石杉碱甲注
射剂 、 石杉碱甲胶囊 、 石杉碱甲片等产品[ 3] 。与普通口服制
剂相比 , 口服缓控释制剂具有多方面的优势。本品骨架片是
选用胶体骨架材料压成的缓释骨架片 , 片剂遇水后形成一定
黏度的凝胶 , 药物通过扩散和溶蚀方法释药 , 其特点是骨架
最后可以完全溶解 , 药物全部释放 , 故生物利用度较高。本
品少数患者给药后见耳鸣 , 头晕等不良反应 , 我们采用较简
单的处方和工艺将石杉碱甲制成含药量仅为 0.5%的骨架缓
释片 , 能减少服药次数 , 降低血药浓度波动 , 提高药物的安
全性和有效性。
作者简介:唐宇 , 女 , 硕士研究生 , 主要从事新药研究和评价 , Tel:(0755)26737179 , E-mail:t angyu44@sina.com ＊通讯作者:
杨大坚 , 男 , 教授 , 主要从事药物设计研究 , Tel:(0755) 26737136 , E-m ail:b cyangdj@inet.polyu.edu.hk
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C ent ral S outh Ph arm acy.M arch 2009 , Vol.7 No.3 中南药学 2009年 3月第 7卷第 3期