全 文 ：［收稿日期］ 20120507(014)
［基金项目］ 国家科技支撑计划项目(2012BAI30B00) ;石河子
大 学 科 学 技 术 研 究 发 展 计 划 课 题
(ZRKX2009YB21)
［第一作者］ 王响华，本科，副主任药师，E-mail:642329608@
qq． com
［通讯作者］ * 陈文，教授，从事药物制剂与新剂型研究，Tel:
13179930326，E-mail:chen-wen2000@ 126． com
维药刺山柑果实中香草酸和原儿茶酸的含量测定
王响华1，陈文2* ，郭小娜2
(1. 哈密红星医院药剂科，新疆 哈密 839000;
2. 新疆石河子大学药学院，新疆 石河子 832000)
［摘要］ 目的:建立同时测定刺山柑果实中香草酸和原儿茶酸含量的高效液相色谱法。方法:采用 Dikma Kromasil C18柱
(4. 6 mm × 150 mm，5 μm) ，流动相为甲醇-0. 1%磷酸水梯度洗脱，紫外检测波长 258 nm，流速 0. 8 mL·min － 1。结果:刺山柑
果实中香草酸和原儿茶酸分别在 0. 001 50 ～ 0. 009 00，0. 005 80 ～ 0. 034 8 μg 呈良好的线性关系，(r = 0. 999 9) ;平均加样回收
率(n = 3)分别为 105% (RSD 1. 90%)103% (RSD = 1. 81%)。结论:该方法操作简单、结果可靠、重复性好、定量准确，可用于
刺山柑果实中原儿茶酸和香草酸的含量测定。
［关键词］ 高效液相色谱法;刺山柑;香草酸;原儿茶酸
［中图分类号］ R284. 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)23-0071-03
Determination of Vanillic Acid and Protocatechuic Acid
in Cappers spinoza by HPLC
WANG Xiang-hua1，CHEN Wen2* ，GUO Xiao-na2
(1. Pharmacy of Hongxing Hospital，Hami 839000，China;2. Shihezi University，Shihezi 832000，China)
［Abstract］ Objective:To establish a HPLC method for simultaneous determination of vanillic acid and
protocatechuic acid in Capparis spinosa． Method:The samples were separated on a C18 column (4. 6 mm × 150
mm，5 μm) ，the mobile phase was consisted of methanol-0. 1% phosphoric acid with gradient elution at the flow
rate of 0. 8 mL·min － 1 and the detection wavelength was set at 258 nm． Result:The calibration curves for vanillic
acid and protocatechuic acid were linear in the range of 0. 001 50-0. 009 00，0. 005 80-0. 034 8 μg respectively．
All the correlation coefficient were 0. 999 9，and the average recoveries (n = 3)were 105% and 103% with
corresponding RSDs of 1. 90% and 1. 81% respectively． Conclusion:The method is simple， accurate and
sensitive and can be used to determine the content of the vanillic acid and protocatechuic acid in C． spinosa．
［Key words］ Capparis spinosa;HPLC;vanillic acid;protocatechuic acid
刺山柑果实为白花菜科山柑属植物的果实，又
称野西瓜、槌果藤等，其性温，具有祛风、消肿、止痛
等作用［1］。是维药部颁标准的常用维吾尔药材，民
间主要用于抗风湿痛风病［10］等。其化学成分主要
生物碱、酚酸类、黄酮类、挥发油、脂肪族类芥子油苷
等［2-3］，具有抗应激、抗损伤、抗肿瘤、抗氧化、降血
脂、抗炎止痛等药理作用［4-9］。前期的研究表明酚
酸类成分是其主要的有效部位［11］，维药部颁标准中
无有效成分的含量测定。本实验建立了同时测定刺
山柑果实中原儿茶酸及香草酸含量的高效液相色谱
方法，为刺山柑果实药材及后续制剂的质量控制标
准提供依据。
1 仪器及试剂
高效液相色谱仪(配有 LC-20AT 泵，SPD-M20A
检测器，CBM-20A 控制器，SIL-20A 自动进样器，
CTO-10AS 柱温箱日本岛津公司) ，KQ-250DB 数控
·17·
第 18 卷第 23 期
2012 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 23
Dec．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.23.006
超声波清洗器(昆明市超声仪器有限公司) ，
Sartorius BP211D 十万分之一分析天平(北京赛多
利斯仪器系统有限公司) ，艾柯超纯水机(成都唐
氏康宁科技发展有限公司) ，微孔滤膜(上海兴亚
净化材料厂) ，高速离心机(上海冠戈实业有限公
司)。
刺山柑果实(干果购于乌鲁木齐，产于阿克苏，
经石河子大学成玉怀教授鉴定为刺山柑果实
Capparis spinosa L．) ;原儿茶酸对照品(中国药品生
物制品检定所，批号 110809-200604) ;香草酸对照
品(中 国 药 品 生 物 制 品 检 定 所，批 号 110776-
200402) ;甲醇为色谱纯，磷酸、乙醇及其他试剂均
为分析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件 固定相:Dikma Kromasil C18柱(4. 6
mm × 150 mm，5 μm) ，流动相甲醇-0. 1%磷酸水梯
度洗脱(0 ～ 40 min，甲醇 20% ～ 100%) ，流速 0. 8
mL·min － 1，柱温 30 ℃，检测波长 258 nm，进样量
10 μL。依上述色谱条件，吸取对照品溶液和供试品
溶液各 10 μL 分别进样，在对照品溶液和供试品溶
液色谱峰具有相同保留时间，见图 1。
A． 对照品;B． 供试品;1. 原儿茶酸;2. 香草酸
图 1 香草酸与原儿茶酸的 HPLC
2. 2 对照品溶液的制备 精密称取香草酸对照品
1. 87 mg 及原儿茶酸对照品 2. 90 mg 置于 25 mL 量
瓶中，用甲醇溶解并定容，得到质量浓度分别为
75. 0，116 mg·L － 1的对照品贮备液。
2. 3 供试品溶液的制备 称取刺山柑果实粉末
25. 0 g，加入 70%的乙醇 200 mL 浸润，80 ℃水浴回
流提取 3 次，每次 30 min。合并 3 次提取液，过滤、
浓缩至 100 mL 以内，并用盐酸调节 pH 3。将浓缩
液置于分液漏斗中，加入与药液等体积乙醚振摇萃
取，取醚层并低温将其挥干，残渣用流动相溶解置
25 ml，离心(10 000 r·min － 1，5 min)取上清液即得
供试品溶液，微孔滤膜过滤，备用。
2. 4 线性关系考察 精密量取 2. 2 项下香草酸对
照品贮备液 0. 2，0. 4，0. 6，0. 8，1. 0，1. 2 mL 及原
儿茶酸对照品贮备液 0. 5，1. 0，1. 5，2. 0，2. 5，3. 0
mL 分别置于 10 mL 量瓶中，流动相定容，摇匀，制得
混合对照品溶液，取 10 μL 进样，按照上述色谱条件
测定。以峰面积(Y)为纵坐标，对照品浓度(X)为
横坐标，绘制标准曲线。结果表明香草酸及原儿茶
酸分别在 0. 001 50 ～ 0. 009 00，0. 005 80 ～ 0. 034
8mg 线性关系良好，相应的回归方程及相关系数分
别为 Y = 4. 70 × 104X + 0. 075 × 104 (r = 0. 999 9) ;
Y = 4. 98 × 104X + 0. 022 × 104(r = 0. 999 9)。
2. 5 精密度试验 精密量取香草酸、原儿茶酸混合
对照品溶液(香草酸质量浓度为 75 mg·L － 1，原儿茶
酸质量浓度为 116 mg·L － 1)重复进样 5 次，每次进
样10 μL，以峰面积计算 RSD，其中香草酸及原儿茶
酸 的 相 对 标 准 偏 差 (RSD ) 分 别 为
0. 240%，0. 210%。
2. 6 重复性试验 按照 2. 3 项下方法制备 5 份供
试品溶液，分别进样 10 μL，依照上述选择的色谱条
件测定，结果香草酸的平均含量为 22. 0 μg·g － 1其
RSD 0. 950%，原儿茶酸的平均含量为 13. 4 μg·g － 1其
RSD 1. 73%。
2. 7 稳定性试验 按照供试品溶液的制备方法制
各供试品溶液。在室温分别放置 0，2，4，6，12 h 后
进样 10 μL 依照上述选择的色谱条件测定，结果香
草酸 含 量 的 RSD 1. 94%，原 儿 茶 酸 含 量 的
RSD 1. 32%。
2. 8 加样回收率试验 称取刺山柑果实粉末 25. 0 g
用 70%的乙醇 200 mL 浸润，加入精密称定的混合
对照品(设低、中、高浓度) ，提取。精密量取提取
液，放入小烧杯中甲醇超声溶解，转移置 10 mL 量瓶
中并定容摇匀，离心(10 000 r·min － 1，5 min)之后
取上清夜，进样 3 次每次 10 μL，依照上述选择的色
谱条件测定。结果见表 1。
2. 9 样品含量测定 按 2. 3 项下供试品溶液的制
备方法制备 5 份供试品溶液，依照上述选择的色谱
条件，进样 10 μL，结果见表 2。
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第 18 卷第 23 期
2012 年 12 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 23
Dec．，2012
表 1 香草酸及原儿茶酸加样回收率(n = 3)
成分
平均
称样量
/ g
样品中
平均含量
/μg
加入量
/μg
平均
测得量
/μg
加样
回收率
/%
平均加样
回收率
/%
RSD
/%
香草酸 25. 0 57. 5 46. 1 107 105 105 1. 90
46. 2 107 106
46. 1 106 104
57. 1 118 106
57. 0 119 108
57. 1 117 104
69. 2 129 102
69. 2 128 102
69. 1 130 106
原儿茶酸 25. 0 33. 6 26. 9 60. 8 101 103 1. 81
26. 9 61. 0 101
26. 8 60. 7 101
33. 5 68. 8 105
33. 4 69. 0 106
33. 7 68. 6 104
40. 4 75. 0 103
40. 5 74. 9 102
40. 3 74. 5 102
表 2 样品中 2 种成分的含量测定 μg·g － 1
批号 香草酸 原儿茶酸
20110303 23. 9 13. 7
20110312 22. 9 13. 5
20110318 23. 0 13. 5
20110326 22. 7 13. 3
20110410 22. 6 13. 3
3 小结与讨论
多次试验结果表明，在等梯度的情况下，只用甲
醇和水溶液做流动相同时测定原儿茶酸及香草酸，
难以使两者达到较好检测水平。流动相加入磷酸
后，发现原儿茶酸和香草酸分离的选择性提高了。
根据实验中色谱峰的出峰规律，最终将甲醇-磷酸
水-0. 1% H3PO4(梯度洗脱)作为定量检测用的流动
相条件。
［参考文献］
［1］ 刘勇民 ． 维吾尔药志 ． 下册［M］． 乌鲁木齐:新疆科
技出版社，1999:868.
［2］ zcan M，kgl A． Influence of species，harvest date
and size on composition of capers (Capparis spinosa L．)
flower buds［J］． Nahrung，1998，42:102.
［3］ 甘永祥，陈文，王新春，等 ． 刺山柑果实的化学成分
［J］． 石 河 子 大 学 学 报:自 然 科 学 版，2009， 27
(3) :334.
［4］ Trombetta D，Occhiuto F，Perri D． Antiallergic and
Antihistaminic effect of two extracts of Capparis spinosa
L． flowering buds ［J］． Phytother Research． 2005，19
(1) :29.
［5］ Arslan R，Bektas N，Ozturk Y． Antinociceptive activity
of methanol extract of fruits of Capparis ovata in mice
［J］． Ethnopharmacology，2008，131:28.
［6］ Matsuyama M O Villareal K，El Omri J Han A，Isoda
H． Effect of tunisian Capparis spinosa L． extract on
melanogenesisin b16 murine melanoma cells［J］． Nat
Med． 2009，63:468．
［7］ T Kulisic-bilusic，Ivica Blaevic
，
，Branka dejanovic
，
，et
al． Evaluation of the antioxidant activity of essentialoils
from Caper (Capparis spinosa L．) and sea fennel
(crithmum maritimum)by different methods［J］． Food
Biochemistry． 2010，34:286．
［8］ M Eddouks，A Lemhadri，J B Michel． Hypolipidemic
activity of aqueous extract of Capparis spinosa L． in
normal and diabetic rats ［J］． Ethnopharmacology，
2005，98:345.
［9］ Trombetta D，O Cchiuto F，Perri D，et al． Antiallergic
and anti-histaminic effect of two extracts of Capparis
spinosa L． flowering buds ［J］． Phytotherapy Res，
2005，19(1) :29.
［10］ 罗俊，谢阳 ． 维药刺山柑果治疗痛风风湿病 15 例
［J］． 中国民族医药杂志，1999，5(2) :3.
［11］ 张华，朱晓薇，甘永祥，等 ． 不同提取方法对槌果藤指
标成分及主要药效的影响［J］． 中成药，2010，32
(2) :298．
［责任编辑 顾雪竹］
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