全 文 ：华西药学杂志W CJ· PS　2009, 24(4)：414 ～ 416 　　
图 2　受试者口服受试制剂和参比制剂的平均药 -时曲线
Fig2　Meanplasmaconcentration-timecurveofGliquidoneafter
poGliquidone
表 1　22名健康受试者口服两种制剂的格列喹酮的药物动力学参数
Table1　PharmacokineticparametersofGliquidoneafterpotwo
preparations
参数 受试制剂 参比制剂
Tmax/h 3.4±1.2 2.9±0.8
Cmax/μg·ml-1 1.341±0.404 1.465±0.476t1/2 /h 4.4±2.2 4.1±2.5
Ke/h-1 0.197±0.091 0.223±0.109
Cl/F/L·h-1 7.7±1.7 9.3±3.0
Vd/F/L 46.0±28.7 58.9±45.5
AUC0 ～ t/μg·h·ml-1 7.312±2.203 7.183±2.483AUC0 ～ ∞ /μg·h·ml-1 8.336±2.515 8.002±2.527
F/% 109.7±38.1
2　讨论
文中所建方法操作简单 ,格列喹酮与内标和血
浆内源性杂质分离度合适 ,提取回收率稳定 ,内标法
表 2　受试者口服两种制剂的主要药物动力学参数的方差分析
Table2　Statisticanalysisoftheimportantpharmacokineticparam-
etersafterpotwopreparations
参数 F值制剂间 周期间 个体间
LnAUC0 ～ t 0.230 0.003 1.980
LnAUC0 ～ ∞ 0.570 0.260 2.210LnCmax 0.530 0.220 1.170
的使用可减少系统误差 ,准确度和精密度更好 ,分析
周期较短 ,适合大通量样本的分析 。
试验所得参数 Cmax、Tmax、t1 /2与文献[ 1, 2]报道基
本一致 ,但 t1/2与文献 [ 2]报道的 1.86 h有差异 ,需进
一步研究 。药动学参数的等效性统计分析结果表
明 , 受试制剂的相对生物利用度为 109.7% ±
38.1%,其 AUC0※t、AUC0※∞ 、Cmax的 90 %置信区间
均在参比制剂等效范围内 ,受试制剂和参比制剂在
体内的吸收 、分布 、消除过程相似 ,表明两制剂生物
等效 。
参考文献:
[ 1] 　 孙璐 ,钟大放 ,陈笑艳 , 等.格列喹酮在中国健康受试者体内
的生物等效性研究 [ J] .中国临床药理学杂志 , 2000, 16(2):
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[ 2] 　 陈西敬 ,张晓楠 ,贾萍 , 等.格列喹酮胶囊和片剂的人体药动
学和相对生物利用度 [ J].中国药科大学学报 , 2000, 31(6):
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收稿日期:2008-10
作者简介:赵惠茹(1972-),女 ,副教授 ,硕士 ,从事中药物质基础分析和体内药物分析工作。 Email:hrzhhappy@sohu.com
HPLC测定兔血浆中的藁本内酯
赵惠茹 1 ,周晓棉 2 ,冯素香3 ,靖　会 1
(1.西安医学院药学系 , 陕西 西安 710021;2.沈阳药科大学药学院 , 辽宁 沈阳 , 110016;3.河南中医学院药学院 , 河南 郑州
450008)
摘要:目的　采用 HPLC测定兔血浆中藁本内酯的浓度。方法　样品经正己烷萃取后进样分析。色谱柱为KromasilC18(150
mm×4.6mm, 5μm), 流动相为甲醇 -水(75：25),流速 1.0ml·min-1 , 检测波长 328nm, 测定兔灌胃 100mg·kg-1当归挥发油
有效部位后的血药浓度变化。结果　 藁本内酯在血浆中的线性范围为 0.2 ～ 6.4 μg·ml-1 , 最低检测浓度为 0.1 μg·ml-1 ,日
内和日间 RSD均小于 8%, 平均回收率分别为 97.18%、93.91%。兔灌胃后 , Tpeak=1.28±0.12 h, Cmax=3.86±0.24 μg·ml-1 ,
t1/2α=2.04±0.20 h。结论　所建方法符合生物样品的测定要求 ,可用于兔血浆中藁本内酯的测定和药物动力学研究。
关键词:高效液相色谱法;藁本内酯;药物动力学;当归挥发油
中图分类号:R917　 文献标识码:A　 　文章编号:1006-0103(2009)04-0414-03
DeterminationofligustilideinrabbitplasmabyHPLC
ZHAOHui-ru1 , ZHOUXiao-mian2 , FENGSu-xiang3 , JINGHui1
(1.DepartmentofPharmacy, Xi anMedicalColege, Xi an, Shanxi, 710021 P.R.China;2.SchoolofPharmacy, ShenyangPhar-
maceuticalUniversity, Shenyang, Liaoning, 110016P.R.China;3.SchoolofPharmacy, HenanCollegeofTradiontionalChineseMedi-
cine, Zhengzhou, Henan, 450008 P.R.China)
DOI :10.13375/j .cnk i.wcjps.2009.04.027
Abstract:OBJECTIVE　TodevelopeanHPLCmethodtoassesstheconcentrationofligustilideinrabbitplasma.METHODS　
Afteroraladministrationofvolatileoilatadoseof100mg·kg-1 torabbit, bloodsampleswerecolectedandextractedwithn-hexane.
TheHPLCsystemconsistedofC18(150mm×4.6 mm, 5 μm)columnusingMeOH-H2O(75：25)asmobilephaseataflowrateof
1.0 anddetectionat328nm.RESULTS　Linearcalibrationwasobtainedoveraconcentrationrangeof0.2-6.4μg·ml-1 forligustil-
ide.Theminimumlimitofdetectionwas0.1 μg·ml-1.Theinter-dayandintra-dayprecisionwerelessthan8% andtherecovery
ofligusitilideinplasmawere97.18% and93.91%.Pharmacokineticparameterswereestimatedasfolows:Tpeak 1.28±0.12 h, Cmax
3.86±0.24μg·ml-1 , t1/2α 2.04±0.20 h, respectively.CONCLUSION　Thismethodissuitableforthepharmacokineticstudyof
ligustilideinrabbit.
Keywords:HPLC;Ligustilide;Pharmacokinetiestudy
CLCnumber:R917　　　 Documentcode:A　 　ArticleID:1006-0103(2009)04-0414-03
　　藁本内酯是从伞形科植物当归Angelicasinensis
(Oliv.)Diels中提取的活性成分 ,对心脑血管 、循环
系统及免疫功能具有较强的作用 ,并有很强的解痉 、
平喘 、镇定作用[ 1] 。对藁本内酯的研究 ,主要集中
在理化性质 、药理作用 、植物来源 、提取分离 、稳定
性 、化学合成和含量测定等方面 [ 2] ,其中 ,有不少关
于 GC法测定含量的报道 ,但液相色谱方法报道较
少 。现采用 HPLC法测定藁本内酯的血药浓度 ,并
进行了家兔灌胃给药后药物动力学行为的研究 。
1　实验部分
1.1　仪器 、试药与动物
　　高效液相色谱系统 (日本岛津);D-37520冷
冻离心机(HERAEUS德国)。藁本内酯对照品(纯
度 >98%,河南中医学院药物分析实验室);当归挥
发油有效部位(自制 , HPLC法含藁本内酯 84.37%);
当归生药(市售 ,经鉴定为伞形科植物当归的干燥
根);甲醇为色谱纯;水为三蒸水;其余试剂为分析
纯 。健康新西兰纯种白兔(第四军医大学实验动物
中心), ♀♂兼用 ,体重 2.0±0.3kg。
1.2　方法与结果
1.2.1　色谱条件 　色谱柱为 KromasilC18色谱柱
(150 mm×4.6 mm, 5 μm), 流动相为甲醇 -水
(75：25),流速 1.0 ml·min-1 ,检测波长 328 nm,柱
温为室温 。
1.2.2　给药方式与血浆样品的处理　在新西兰白
兔的耳缘静脉插管 ,按 100 mg·kg-1 ig当归挥发油
有效部位 ,分别于给药后 0.25、0.5、1、1.5、2、3、4、
5、6、8、10、12、24 h由耳缘静脉取 1 ml血 ,立刻置于
用 10%肝素钠润洗过的离心管中 ,加入 200 mg氯
化钠 ,摇匀 , 静置 5 min后 , 4 ×103 r·min-1离心 5
min,分离血浆后置冰箱待测 。吸取 0.5 ml血浆 ,加
入 1.5 ml正己烷 ,涡旋振荡 3 min,于 4×103离心 5
min,吸取正己烷层 ,再用正己烷提取(1 ml×2),合
并正己烷提取液 ,氮气流吹干 ,残余物用 100 μl流
动相溶解后 ,涡旋振荡 30 s, 3×103 r·min-1离心 5
min后 ,精密吸取 20 μl上清液进样。
1.2.3　方法专属性考察　在 “ 1.2.1”项条件下 ,血
浆内源性杂质无干扰 ,藁本内酯的峰形良好 , tR =
7.6 min(图 1)。
图 1　空白血浆(A)、空白血浆加对照品(B)和血浆样品(C)溶液的色谱图
Fig1　Chromatogramsofblankplasmasolution(A), blankplasmaspikedwithcontrolsolution(B)andplasmasamplesolution(C)
1.2.4　标准曲线的制作　精密称取藁本内酯对照
品适量 ,加甲醇溶解 ,配成 1 mg·ml-1的贮备液 ,取
0.1ml贮备液 ,用甲醇稀释成 10 μg·ml-1的对照品
溶液。分别取 0.5 ml兔新鲜血浆 ,依次加入对照品
溶液 ,配成 0.2、0.4、0.8、1.6、3.2、6.4 μg·ml-1的系
列标准溶液。按 “ 1.2.2”项方法操作 ,依次测定峰
面积 ,与进样浓度进行线性回归 , 得线性方程为:
Y=2.735×103X+427.1(r=0.9982),线性范围为
0.2 ～ 6.4 μg·ml-1 ,最低检测限为 0.1 μg·ml-1。
1.2.5　回收率和精密度试验　取兔空白血浆 ,加入
415第 4期 赵惠茹 , 等。 HPLC测定兔血浆中的藁本内酯 　　　
藁本内酯对照品溶液 , 配成高 、中 、低浓度 (0.4、
1.6、6.4 μg·ml-1)的样品 ,按 “ 1.2.2”项法制备 ,在
“ 1.2.1”项条件下进样分析。用当日随行的标准曲
线测定样品浓度 ,每个浓度 5个样本 ,连续进行 5d,
计算日内和日间的 RSD和相对回收率(表 1)。
表 1　藁本内酯的回收率和精密度试验( x±s, n=5)
Table1　Intra-dayandinter-dayprecisionandaccuracyofligu-
stilideinrabbitplasma( x±s, n=5)
1.2.6　稳定性考察　取 0.5 ml兔空白血浆加藁本
内酯的对照品 ,配制成高 、中 、低浓度(0.4、1.6、6.4
μg·ml-1)共 9份样品 ,每个浓度平行配 3份 ,分别
在 0 h、 -20℃冷冻 7d、冷冻 ,复融后再冷冻 7d后 ,
按 “1.2.2”项方法制备 ,进样 20 μl,样品中藁本内
酯浓度的 RSD<10%,提示样品经 2次冻融后仍保
持稳定 。
1.2.7　血药浓度 -时间曲线　以家兔 ig当归挥发
油有效部位后 ,各时间点藁本内酯的血药浓度对时
间作图 ,得到藁本内酯的药 -时曲线(图 2)。从药
物动力学参数可知 ,藁本内酯达峰时间为 1.28 ±
0.12h,最大血药浓度为 3.86±0.24 μg·ml-1 ,吸收
相半衰期为 2.04±0.20 h,表观分布容积为 6.25±
0.28L·kg-1 ,血浆总清除率为 4.93 ±0.31 L·h-1·
kg-1 ,说明在体内分布很快达到平衡 ,在血中清除
较快。
2　讨论
曾考察了甲醇 、石油醚 、乙醚 、正己烷 、正己烷 -
乙醚的提取效果 。甲醇沉淀蛋白 ,浓缩后残渣杂质
图 2　兔ig当归挥发油有效部位后藁本内酯的平均血药浓度 -时间
曲线( x±s, n=6)
Fig2　Meanplasmaconcentration-timecurveofliguistilideafter
oraladministrationofvolatileoilofAngelicasinensis( x±s,
n=6)
较多 ,干扰大。采用石油醚和乙醚提取血浆样品时
提取率较低。正己烷 -乙醚以一定比例提取时有乳
化现象。而单纯用正己烷提取既不产生乳化现象 ,
藁本内酯提取率也较高 ,这可能与藁本内酯在正己
烷中稳定性较高有一定关系 。由于藁本内酯纯品在
室温下极不稳定 ,在相同条件下 ,其在挥发油中和在
血浆样品中基本稳定 ,不会出现纯品状态下的异构
化反应[ 3, 4] ,故实验所用藁本内酯对照品需要新鲜
制备 。
参考文献:
[ 1] 　 阴健 ,郭力弓.中药现代研究与临床应用Ⅰ [ M] .北京:学苑
出版社 , 1993.285-287.
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量 [ J] .中国中药杂志 , 2005, 30(21):1699-1702.
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[ J] .江西中医学院学报 , 2005, 15(1):56-59.
[ 4] 　 赵一 ,何晓强 ,席佳 ,等.当归挥发油中 Z-藁本内酯的分离纯
化及其制剂的稳定性 [ J].华西药学杂志 , 2008, 23(5):533-
535.
收稿日期:2008-10
《华西药学杂志 》被俄罗斯 《文摘杂志 》收录
　　《华西药学杂志 》被世界六大著名检索系统之一的俄罗斯《文摘杂志》收录。
众所周知 ,美国的 SCI(《科学引文索引》)、EI(《工程索引》)、CA(《化学文摘 》)、英国的 SA(《科学
文摘 》)、俄罗斯的 pж(《文摘杂志》)和日本的 CBST(《科学技术文献速报 》)统称为世界六大著名检索
系统 。 《华西药学杂志》已先后被美国的 《化学文摘》(1993年)和俄罗斯的 《文摘杂志》(2006年)收录 ,
本刊还进入美国《化学文摘》2006年引文频次最高的 1000种期刊表 ,这表明 《华西药学杂志 》杂志的学
术水平已逐渐被国际学术界所认可 。
416 　 华 西 药 学 杂 志　　　 第 24卷