全 文 ：基金项目:贵州省中药标准化技术研究中心 (黔科合社字 ［2008］ 5002 号)。
作者简介:敖娇 (1990 －)，女，苗族，2014 级研究生，主要从事中药及民族药质量控制及新药研究。E － mail:747767518@ qq. com
通信作者:鲍家科，E － mail:bjk2005@ 163. com
酢浆草药材薄层鉴别方法研究
敖 娇1 刘建军1 鲍家科2*
1． 贵阳中医学院，贵州 贵阳 550002;2． 贵州省药品审评认证中心，贵州 贵阳 550004
【摘 要】 目的:建立酢浆草药材的薄层鉴别方法。方法:以酢浆草对照药材、β －谷甾醇为对照品，对影响薄层色谱的各个因素进
行考察，筛选出最佳的薄层色谱条件。结果:筛选出酢浆草薄层鉴别的最佳条件，确定了实验方法。结论:建立了酢浆草药材的薄层鉴别
方法，具有斑点清晰、分离度良好、操作简便、方法重复性好的特点，为进一步完善酢浆草的质量标准提供一定依据。
【关键词】 酢浆草;薄层鉴别;方法
【中图分类号】Ｒ282. 5 【文献标志码】A 【文章编号】1007 － 8517 (2016)12 － 0037 － 07
Study on TLC identification methods of Oxalis corniculata L．
AO Jiao1 LIU Jianjun1 BAO Jiake2*
1． Guiyang college of Traditional Chinese Medicine ，Guiyang 550002，China;
2． Guizhou Center for Drug Evaluation and Certification，Guiyang 550004，China
Abstract:Objective To establish a TLC identification method for Oxalis corniculata L． Methods Using both the standard Oxalis
corniculata L． and β － sitosterol as the reference substances of TLC idetification，to investigate the factors affecting the thin layer chro-
matography，select the best thin layer chromatographic conditions． Ｒesults Selected the best thin layer chromatographic conditions of
Oxlis corniculata L．，experiment method was confirmed． Conclusion Established the thin layer identification method of Oxalis cornicu-
lata L． Its characteristics inluded the clear spots，good separating degree，easy operation and the method repeatability well． The meth-
od could provide a certain basis for further improving the quality standards of Oxalis corniculata L．
Key words:Oxalis corniculata L．;TLC identification ;Method
酢浆草为酢浆草科植物酢浆草 Oxalis corniculata L． 的
全草，也称酸浆草、酸草、三叶酸、酸咪咪等，为贵州等
地民间及少数民族习用药材。酢浆草性味功效为酸、凉，
具有清热解毒、利湿消肿、清肺化痰的功效，临床用于治
疗神经衰弱、失眠、肺炎、扁桃体炎、急性肝炎、小儿上
呼吸道感染等多种疾病［1］。酢浆草的化学成分主要有总黄
酮类［2］、羟基肉桂酸、咖啡酸、槲皮素和没食子酸［3］，杨
红原和李胜华对酢浆草进行分离纯化得到胡萝卜苷、β －谷
甾醇等化合物［4 － 5］。目前，在云南、贵州、广西等省份的
地方标准都收载有酢浆草药材，其鉴别项均以对照药材为
对照进行薄层色谱鉴别。为进一步优化该检测项目，实验
以 β －谷甾醇、酢浆草对照药材为对照，对展开剂进行了
调整，在此基础上建立了酢浆草药材的薄层鉴别，该方法
具有斑点清晰、分离度良好、操作简便、方法重复性好的
特点，为进一步完善酢浆草的质量标准提供一定依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器 METTLEＲ TOLEDO XS205 分析天平;KQ －
300DE型数控超声波清洗器;DK － 98 － IIA 水浴锅 (天津
市泰斯特仪器有限公司)。
1. 2 试药与试剂 β － 谷甾醇对照品 (批号:110851 －
200202、酢浆草对照药材 (批号:1299 － 0301)均购自中
国药 品 生 物 制 品 检 定 所;硅 胶 G 预 制 板 (批 号:
20150406)、硅胶 G (批号:0140121)、硅胶 GF254预制板
(批号:20140703)、硅胶 H 预制板 (批号:20140806)均
为青岛海洋化工厂分厂产品;所用试剂均为分析纯。
1. 3 样品来源 实验收集到来自贵州、云南不同产地的 13
批酢浆草药材，来源见表 1。由贵州省食品药品检验所李杨
老师鉴定为酢浆草 (Oxalis corniculata L.)。
表 1 酢浆草样品信息表
编号 产地 品种 拉丁名
1 贵州 安顺花江 酢浆草 Oxalis corniculata L．
2 贵州 凯里 酢浆草 Oxalis corniculata L．
3 贵州 平塘 酢浆草 Oxalis corniculata L．
4 云南 大桥村 酢浆草 Oxalis corniculata L．
5 贵州 遵义 酢浆草 Oxalis corniculata L．
6 贵州 紫云 酢浆草 Oxalis corniculata L．
7 贵州 六盘水 酢浆草 Oxalis corniculata L．
8 贵州 毕节大方 酢浆草 Oxalis corniculata L．
9 云南 昭通鲁甸 酢浆草 Oxalis corniculata L．
10 云南 昭通旧圃 酢浆草 Oxalis corniculata L．
11 贵州 兴义 酢浆草 Oxalis corniculata L．
12 贵州 六枝 酢浆草 Oxalis corniculata L．
13 贵州 冼马河 酢浆草 Oxalis corniculata L．
2 方法与结果
2. 1 对照品溶液的制备 取 β －谷甾醇对照品适量，精密
称定，甲醇溶解，制成浓度为 0. 312mg /ml的溶液。
2. 2 供试品溶液的制备
2. 2. 1 提取溶剂的考察 取酢浆草药材 4 份，各 1g，精密
称定，分别加入石油醚、乙酸乙酯、甲醇、乙醇 10ml，超声
提取 30min，滤过，滤液作为供试品溶液。按照薄层色谱法
(2015版《中国药典》附录 VI B)实验，分别吸取对照品溶
液 1μl，供试品溶液 2μl，点于同一硅胶 G 薄层板上，以环
己烷 －三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶8∶1. 2∶0. 1)为展开剂，展
开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至
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斑点显色清晰，置于日光下及 365nm紫外光下检视，薄层色
谱图见图 1。结果表明，石油醚提取液斑点不及其它溶剂提
取液的斑点多，乙酸乙酯、甲醇、乙醇提取液的斑点个数及
大小一样，考虑毒性及价格，选择乙醇作为提取溶剂。
2. 2. 2 提取方法的考察 取酢浆草药材 2份，各 1g，精密称
定，加入乙醇 10ml，分别超声提取 30min 和回流提取 30min，
滤过，滤液作为供试品溶液。分别吸取对照品溶液 1μl，供试
品溶液 2μl，点于同一硅胶 G薄层板上，以环己烷 －三氯甲烷
－甲醇 －甲酸 (8∶8∶1. 2∶0. 1)为展开剂，展开，取出，晾干，
喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热至斑点显色清晰，置日
光下及紫外灯下检视，薄层色谱图见图 2。结果表明，超声提
取与回流提取基本无差别，选取超声方法为提取方法。
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2. 3 对照药材溶液的制备 取酢浆草对照药材 1g，精密称
定，按照供试品溶液的方法制备即得。
2. 4 酢浆草药材薄层色谱方法学考察
2. 4. 1 显色剂的考察 取“2. 2 项”下的 4 个供试品溶
液，照薄层色谱法试验，分别吸取对照品溶液 1μl，对照药
材溶液 2μl，供试品溶液 2μl，点于同一硅胶 G 薄层板上，
以环己烷 －三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶ 8∶ 1. 2∶ 0. 1)为展开
剂，四张薄层板同时展开，取出，晾干，分别喷以 10%硫
酸乙醇溶液、5%香草醛硫酸溶液、10%磷钼酸溶液以及碘
蒸气熏，在 105℃加热至斑点显色清晰，置日光下及 365nm
紫外光下检视。结果表明:在日光下检视，10%硫酸乙醇
溶液和 5%香草醛硫酸溶液显色后斑点较清晰，颜色鲜明，
显色的斑点个数一致;磷钼酸溶液显色后斑点虽然清晰，
但是不能反映出其他有的斑点的颜色，斑点个数较少;碘
蒸汽熏的方法能使斑点显色，但斑点个数较少，所需时间
较长，不及其他显色剂方便。在 365nm 紫外光下观察，
10%硫酸乙醇溶液显色后的斑点更明显，在与对照品相对
应的位置处显蓝色荧光;5%香草醛硫酸溶液及其他显色剂
显色后均不显荧光斑点。为更好体现样品与对照药材中的
斑点信息，选取 10%硫酸乙醇溶液作为显色剂。
2. 4. 2 展开系统的考察 取“2. 2 项”下的 4 个供试品溶
液，照薄层色谱法试验，分别吸取对照品溶液 1μl，对照药
材溶液 2μl，供试品溶液 2μl，点于硅胶 G薄层板上，所考
察的展开系统及结果见表 2。经过对比及重复试验可知环己
烷 －三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶ 8∶ 1. 2∶ 0. 1)的展开系统稳
定，展开的斑点较多，斑点间距离合适，分离度好，重现
性好。因此选环己烷 －三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶ 8∶ 1. 2∶
0. 1)作为实验的展开系统。
表 2 展开剂考察结果
展开剂 结果
三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (9∶5∶1)［6］ 斑点接近溶剂前沿，有包裹现象。
环己烷 －异丙醇 －甲酸 (12∶1. 2∶0. 15) 斑点之间距离很近，有重叠现象。
二氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶0. 2∶0. 1) 斑点分开，但室温环境 (22℃)，展开系统气压不稳，斑点展开效果不稳定。
环己烷 －三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶8∶0. 5∶0. 1) 斑点有重叠现象。原点处有斑点未展开。
环己烷 －三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶8∶0. 8∶0. 1) 斑点有重叠现象，原点处斑点展开。
环己烷 －三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶8∶1. 2∶0. 1) 斑点间距离合适，相邻斑点分离度好，无重叠现象。
2. 4. 3 点样量的考察 依次精密吸取供试品溶液 1、2、3、
4 μl;β －谷甾醇对照品溶液 1、2、3、4μl。点于同一薄层
板上进行考察。结果表明，供试品溶液随着点样量的增加，
斑点越加明显，但也出现拖尾现象，2μl的点样量合适;β －
谷甾醇对照品溶液 1μl即很清晰及圆整。因此最佳点样量确
定为供试品溶液为 2μl;β －谷甾醇对照品溶液为 1μl。
2. 4. 4 展开距离考察 考察 7、8、10、13cm 的不同展开
距离。结果表明，展开距离为 7cm 与 8cm 的斑点距离及个
数相当，斑点分离好。展开距离为 10cm 的斑点距离拉大，
但斑点个数与 7cm、8cm一样。展开距离为 13cm 靠近溶剂
前沿的斑点不圆整，扁平状，且出现边缘效应。因此实验
选用 7cm作为展开距离。
2. 4. 5 薄层板饱和时间考察 考察 0、8、15、30min 的不
同饱和时间。结果表明，饱和时间越长，斑点移动距离越
长，15min时，溶剂前沿附近斑点出现重叠，30min 时，溶
剂前沿附近斑点重叠严重。0min 和 8min 时，斑点分离好，
但 0min时，有时会出现边缘效应，因此，实验选择 8min
作为薄层板的饱和时间。
2. 5 方法耐用性考察
2. 5. 1 不同薄层板的考察 实验考察硅胶 H预制板板、硅
胶 GF254 预制板板、硅胶 G 预制板、硅胶 G (批号:
0140121)自制板 4 种类型的薄层板，薄层色谱图见 3。结
果表明:斑点在 4 种类型的薄层板上均能分离，硅胶 H 板
接近溶剂前沿的斑点较硅胶 G 板上的斑点扁平，有斑点有
少量重叠。硅胶 GF254板上的斑点日光下检视与硅胶 G板相
当，在 365nm紫外光下斑点显荧光，但不及硅胶 G板清晰;
在 254nm紫外光下斑点显黑色，不清晰。硅胶 G 自制板斑
点与相邻斑点分离度好，其它斑点移动距离不及硅胶 G 预
制板上斑点移动距离远，但不影响斑点分离效果。硅胶 G
预制板与自制板均可作为本实验用薄层板。
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2. 5. 2 温度的考察 分别在低温 (4℃)、室温 (22℃)、
高温 (40℃)进行温度的考察。结果表明:供试品和对照
品在不同温度下的色谱行为一致，各斑点能较好的分离，
说明温度对本实验方法影响不大，薄层色谱图见 4。
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2. 5. 3 湿度的考察 分别在高湿 (72%)、中湿 (47%)
和低湿 (18%)条件下进行考察，湿度以不同浓度的硫酸溶
液进行控制。将点样后的薄层板放入展开缸，另一侧的展
开槽里放一定浓度的硫酸，密闭 10min后再加展开剂展开。
当硫酸 －水 (27. 5 ∶ 100，V/V)时，相对湿度为 72%;当
硫酸 －水 (50 ∶ 100，V/V)时，相对湿度为 47%;当硫酸
－水 (100∶ 95. 5，V/V)时，相对湿度为 18%。结果表明
供试品和对照品在高湿、中湿和低湿环境各斑点均能实现
较好的分离，说明本方法具有良好的环境适应性，薄层色
谱图见 5。
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2. 5. 4 色谱条件的确定 取对照品溶液 1μl，对照药材溶
液 2μl，供试品溶液 2μl，点于同一硅胶 G薄层板上，以环
己烷 －三氯甲烷 －甲醇 －甲酸 (8∶ 8∶ 1. 2∶ 0. 1)为展开剂展
开，取出，晾干，喷以 10%硫酸乙醇溶液，在 105℃加热
至斑点显色清晰，置日光下及 365nm紫外光下检视。
2. 6 酢浆草药材的薄层色谱图 将收集到的 13 批酢浆草
药材，按“2. 2 项”下制备供试品溶液后，按“2. 5. 4”确
定的色谱条件进行检测，薄层色谱图见 6。结果表明，本试
验建立的方法分离度高，重现性好，操作简单，可用于标
准不完善的酢浆草药材的质量控制。
3 讨论
在展开剂考察过程中，曾试用二氯甲烷代替三氯甲烷，
但二氯甲烷的沸点低，在常温下挥发性较三氯甲烷大，气
压不稳定，展开的斑点位置不稳定，且斑点不及三氯甲烷
的展开体系展开的斑点清晰，因此选用三氯甲烷为展开
溶剂。
在预实验中，发现酢浆草对照药材溶液与样品溶液点
样斑点大小一致，因此点样量的考察选用了样品溶液。
有关酢浆草的文献有用到异荭草素［7］、芦丁［2］为对照
品进行总黄酮类含量测定，用刺槐素 － 6 － C － β － D －葡萄
糖苷为对照品进行薄层鉴别，刺槐素 － 6 － C － β － D －葡萄
糖苷为实验室自制［8］。β －谷甾醇是一种植物甾醇，药理研
究表明:β －谷甾醇具有降低血清胆固醇、抗炎退热、抑制
肿瘤，抑制乳腺增生等作用［9］。在抗癌机制的探讨中，β －
谷甾醇对人肝癌 HepG2 细胞生长具有较强的抑制作用，对
正常肝细胞 QSG7701 的生长及凋亡相关蛋白几乎没有影
响，其通过线粒体途径及膜死亡受体途径诱导该细胞凋
亡［10］。考虑到 β －谷甾醇可能是酢浆草的功效成分之一，
实验采用 β －谷甾醇作为酢浆草薄层检测的对照，对照品易
于获得，检测成本较为低廉。选用环己烷 －三氯甲烷 －甲
醇 －甲酸 (8∶8∶1. 2∶0. 1)为展开剂，选用 10%硫酸乙醇作
为显色剂，样品中在与对照品及对照药材的位置处都显相
同颜色的斑点，斑点颜色清晰，且分离度高、重现性好，
为完善酢浆草的质量标准可提供实验依据。
参考文献
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(下转第 46 页)
·34·中国民族民间医药 2016年 6月第 25卷第 12期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2016，Vol. 25，No. 12
续表 1 部分夏桑菊颗粒抽样的迷迭香酸的含量测定
序号 批号 每包含 (mg /包) 序号 批号 每包含 (mg /包)
11 20110309 3. 38 38 20110509 0. 95
12 20110513 4. 06 39 20100408 0. 78
13 20120407 3. 91 40 110102 0. 07
14 20120504 3. 24 41 100913 0. 01
15 20120701 3. 37 42 110202 0. 04
16 20110608 3. 78 43 101001 0. 27
17 1011232 0. 81 44 111D151 0. 72
18 1101201 0. 72 45 110703 0. 09
19 1106152 0. 99 46 110304 0. 05
20 1107142 1. 01 47 110303 0. 10
21 1108282 2. 29 48 110401 0. 19
22 1109192 2. 11 49 1204002 0. 48
23 1206111 0. 46 50 110104 0. 27
24 1108042 1. 08 51 100710 0. 44
25 20100605 2. 29 52 20120104 0. 31
26 20110202 1. 67 53 110604 0. 65
27 20110712 2. 77 54 110306 0. 17
3 讨论
3. 1 提取条件 首先对超声提取及回流提取进行对比考
察，结果在提取率相同的条件下，超声提取具有用时短、
操作方便等优点，因此选用甲醇超声提取。为充分提取样
品中迷迭香酸，实验以提取溶剂、提取时间、溶剂量作为 3
因素进行提取方法正交试验筛选，由正交试验直观分析结
果表明，3 因素对提取影响顺序为，溶剂量 ＞提取时间 ＞
提取溶剂，确定选用溶剂量为 50ml，超声 30min，因提取
溶剂对含量影响无显著性差异，在为 75%甲醇中样品颗粒
可全溶解，因此选用 75%甲醇提取。
3. 2 波长的选择 取迷迭香酸对照品适量，加入甲醇溶液
配成对照品溶液，于紫外分光光度计上在 190 ～ 400nm进行
扫描，迷迭香酸对照品在 329nm 处有最大吸收，选取
329nm作为检测波长。
3. 3 流动相选择 研究尝试了甲醇 －水、乙腈 － 1%醋酸、
乙腈 － 0. 1%磷酸等流动相，结果发现采用乙腈 － 1%醋酸
溶液 (19% ～ 81%)水进行分析，所得色谱的分离较好，
峰型对称。
3. 4 不同色谱柱的比较 取同一批号为 IA10378 批夏桑菊
颗粒，按供试品溶液配制方法，平衡操作配制 3 份，分别
用 Zorbax Eclipse XDB － C18、Gemini 5μm C18 110A、Hypersil
ODS － 2 三种品牌的色谱柱测定，结果用三种品牌的色谱柱
测定同一批号为 IA10378 的夏桑菊颗粒的迷迭香酸含量为
3. 36、3. 27、3. 22，ＲSD 为 2. 16%。结果表明，既定的色
谱条件，均适用于上述的色谱柱。
3. 5 含量限度的确定 研究考察了星群公司近期样品、3
年有效期及过期 1 年内的有糖及无糖型夏桑菊留样中迷迭
香酸含量情况，结果样品中迷迭迭香酸含量均不低于 2. 0
mg /包。实验同时考察了其他 19 个不同生产厂家夏桑菊中
迷迭香酸含量情况，结果样品中迷迭香酸含量波动较大
(0. 01 ～ 5. 7mg /包)。考虑大生产及原材料药材的波动等因
素影响，药典规定夏枯草药材迷迭香酸含量不得低于
0. 2%，一般转移率不得少于 20%，根据处方计算迷迭香酸
含量应不得低于 2mg /包。
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檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾檾
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(上接第 43 页)
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(收稿日期:2016. 04. 29)
·64· 中国民族民间医药 2016年 6月第 25卷第 12期 Chinese Journal of Ethnomedicine and Ethnopharmacy，2016，Vol. 25，No. 12