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山竹果壳色素抗氧化活性研究



全 文 :云南大学学报 (自然科学版),2012,34 (S1):77 ~ 80 CN 53 -1045 /N ISSN 0258 -7971
Journal of Yunnan University http:/ /www. yndxxb. ynu. edu. cn
山竹果壳色素抗氧化活性研究
*
毛绍春,李竹英
(玉溪农业职业技术学院,云南 玉溪 653100)
摘要:利用光度法对山竹果壳的抗氧化活性进行了分析研究.结果表明:山竹果壳色素对羟自由基清除率
为 50. 40%,对超氧阴离子自由基的清除率为 62. 10%,对 DPPH自由基的清除率是 25. 30%,对脂质过氧化的
抑制率是 58. 90% .在实验范围内,山竹果壳色素均有一定的抗氧化活性,且与质量浓度呈正量效关系.
关键词:山竹果壳;色素;抗氧化活性
中图分类号:Q 949. 758. 5 文献标识码:A 文章编号:0258 - 7971(2012)S1 - 0077 - 04
山竹(Garcinia Mangostana) ,别名莽吉柿、凤
果,莽吉柿、倒捻子、山竺、山竹子,属于藤黄科
(Guttiferae)藤黄属(Garcinia) ,热带常绿乔木[1].
山竹果实(Mangosteen)为热带五大名果之一(其余
4 种为芒果、荔枝、菠萝和番荔枝). 山竹原产于马
来半岛和马来群岛,在东南亚地区栽培较多,主要
分布于印度尼西亚、菲律宾、缅甸、马来西亚、越南、
泰国、中国等地,是东南亚地区的传统药材.其果性
平微酸,具有健脾生津、止泻的作用;其果壳深紫
色,性凉味涩,被广泛用于治疗腹痛、腹泻、痢疾、感
染性创伤、化脓、慢性溃疡等疾病治疗[2],并具有
一定的抗疟原虫、抗氧化、抗肿瘤、抗菌、抗炎、抗过
敏和抗 HIV等生物活性[3 - 9]. 近年来,国内外对山
竹果壳的化学成分及应用研究日趋增多. 赵岩
等[10]从山竹果壳的醇提物中分离出 9 种化合物,
其中 8 种为双苯吡酮类化合物,另 1 种为蒽醌类化
合物.
随着人们生活水平的逐渐提高,我国山竹的种
植面积不断扩大,山竹果销售量逐年增加,产生的
果壳也就相应增多. 山竹果壳较厚,是提取天然红
色素的良好原料.目前,对山竹果壳有一定的研究,
但开发应用较少,一方面天然色素原料作为垃圾废
弃物处理,不利于环境保护和植物资源利用;另一
方面,人们在食品中又大量使用毒性较大的合成色
素.因此对山竹果壳的研究开发,具有极其重要的
意义.本文通过构建实验模型,系统研究了山竹色
素在生物体外的抗氧化活性,旨在为山竹果壳色素
的开发提供实验依据.
1 材料与方法
1. 1 仪器与试剂 UV - 25501 紫外分光光度计
(日本岛津) ,HH - 6 数显恒温水浴锅(常州) ,
BS210S电子天平(北京) ,MP - 501A 超级恒温槽
(上海) ;DPPH(1,1 - Diphenyl - 2 - picryl - hydra-
zyl) ,AR,日本东京化成株式会社)、邻二氮菲,磷
酸盐,FeSO4,H2O2,邻苯三酚、卵磷脂、芦丁、Vc 等
均为国产分析纯试剂;山竹果,购于玉溪水果市场.
1. 2 实验方法
1. 2. 1 山竹果壳色素 称取干燥、除杂的山竹果
壳 500 g,粉碎,过 0. 894 mm筛,加入 2000 mL 70%
pH =3 的乙醇溶液,加热回流 4h,趁热过滤,滤渣
再加入 1 000 mL 70% pH = 3 乙醇液提取 2 次,滤
液合并.提取液减压浓缩干燥,得红色粉末样品.
1. 2. 2 抗羟自由基性能检测 用 85%的乙醇作
溶剂,配制质量浓度分别为 0. 00,0. 040,0. 080,
0. 120,0. 160 g·L -1的山竹果壳色素溶液、芦丁溶
* 收稿日期:2012 - 05 - 14
基金项目:云南省教育厅科学研究基金(08Y0387)、玉溪农业职业技术学院科学研究基金联合资助.
作者简介:毛绍春(1963 -) ,男,云南人,教授,主要从事天然产物开发及应用研究.
液和 Vc溶液,按文献[11]的方法测定吸光度.
1. 2. 3 抗超氧阴离子自由基实验 用 85%的乙
醇作溶剂,配制质量浓度分别为 0. 00,0. 040,
0. 080,0. 120,0. 160 g·L -1的山竹果壳色素溶液、
芦丁溶液和 Vc溶液,按文献[12]的方法测定吸光
度.
1. 2. 4 对脂质过氧化抑制活性的检测 用 85%
的乙醇作溶剂,配制质量浓度分别为 0. 00,0. 040,
0. 080,0. 120,0. 160 g·L -1的山竹果壳色素溶液、
芦丁溶液和 Vc溶液,按文献[13]和[14]的方法测
定吸光度.
1. 2. 5 DPPH自由基的清除实验 用 85%的乙醇
作溶剂,配制质量浓度分别为 0. 00,0. 040,0. 080,
0. 120,0. 160 g·L -1的山竹果壳色素溶液、芦丁溶
液和 Vc溶液,按文献[15]的方法测定吸光度.
2 结果及分析
2. 1 抗羟自由基活性 羟基自由基(·OH)是一
种重要的活性氧,从分子式上看是由氢氧根
(OH -)失去一个电子形成. 羟基自由基具有极强
的得电子能力也就是氧化能力,氧化电位 2. 8 V.
是自然界中仅次于氟的氧化剂. 利用邻二氮菲 -
Fe2 +氧化分光光度法检测羟自由基与抗氧化剂的
作用.邻二氮菲 - Fe2 +被羟自由基氧化为邻二氮菲
- Fe3 +后,其在 510 nm处最大吸收峰消失,从而可
以在 510 nm处测其吸光度,吸光度的变化,能反映
出抗氧化剂抗自由基的能力.
定义表观羟自由基清除率
S =(AX - AH)/(AE - AH)× 100%;
式中:AX 既加抗氧化剂,又加 H2O2 的吸光度;AH
不加抗氧化剂,只加 H2O2;AE 既不加抗氧化剂,也
不加 H2O2 .结果见图 1.
从图 1 可以看出,在实验的质量浓度范围内,
当抗氧化剂质量浓度为 0. 04 g·L -1时,Vc、山竹果
壳色素、芦丁抗氧化剂对羟自由基的清除率最低,
分别为 15. 50%、34. 80%、50. 10%,但随着抗氧化
剂质量浓度的增大,清除率也随之增大. 当抗氧化
剂质量浓度增大到 0. 12 g·L -1时,Vc、山竹果壳色
素、芦丁对羟自由基的清除率分别增大到35. 70%、
49. 70%、69. 75%,显示出质量浓度增大,抗氧化活
性显著增强. 当质量浓度达 0. 16 g·L -1时,清除
率达最大,分别为 40. 60%、50. 40%、72. 50% . 抗
氧化剂质量浓度从 0. 12 g· L -1增加至 0. 16
g·L -1时,清除率增加量较小,说明抗氧化活性能
力已接近饱和.
抗氧化剂的抗氧化能力与其质量浓度呈正量
效关系,即随着抗氧化剂用量的增加,对羟自由基
的清除率也增大,这与多数抗氧化剂活性变化相
同[16];3 种抗氧化剂对羟自由基的清除能力其顺
序为:芦丁 >山竹色素 > Vc.
2. 2 抗超氧阴离子自由基活性 超氧阴离子自由
基是第一个生成的氧自由基,又是所有氧自由基的
前身,可以转化为其他氧自由基,对超氧阴离子自
由基的清除可以有效地减少氧自由基的生成.邻苯
三酚在碱性条件下,能迅速自氧化,释放出超氧阴
离子自由基,生成带色的中间产物,在 4 min 内质
量浓度与时间呈线性关系. 加入抗氧化剂后,能抑
制邻苯三酚的自氧化.
定义超氧阴离子自由基清除率
K = [(ΔA自氧化 – ΔA样品)/ΔA自氧化]× 100%;
式中:ΔA自氧化 为不加抗氧化剂的吸光度;ΔA样品 为
加抗氧化剂的吸光度.结果见图 2.
图 1 抗氧化剂质量浓度对羟自由基清除率的影响
Fig. 1 Effect of concentration of antioxidant on S
图 2 抗氧化剂质量浓度对超氧阴离子自由基的影响
Fig. 2 Effect of concentration of antioxidant on K
87 云南大学学报(自然科学版) 第 34 卷
从图 2 可以看出,在实验的质量浓度范围内,
当抗氧化剂质量浓度为 0. 04 g·L -1时,Vc、山竹果
壳色素、芦丁抗氧化剂对超氧阴离子自由基的清除
率最低,分别为 65. 30%、41. 50%、45. 70%,但随
着抗氧化剂质量浓度的增大,清除率也随之增大.
当抗氧化剂质量浓度增大到 0. 12 g·L -1时,Vc、山
竹果壳色素、芦丁对超氧阴离子自由基的清除率分
别增大到 79. 40%、54. 30%、60. 60%,显示出质量
浓度增大,抗氧化活性显著增强的趋势. 当抗氧化
剂质量浓度达 0. 16 g·L -1时,清除率达最大,分
别为 87. 40%、62. 10%、69. 50%,但清除增加量较
小,说明抗氧化活性能力已接近饱和.
抗氧化剂的抗氧化能力与其质量浓度呈正量
效关系,即随着抗氧化剂用量的增加,对超氧阴离
子自由基的清除率也增大;3 种抗氧化剂对超氧阴
离子自由基的清除能力其顺序为:Vc >芦丁 >山
竹色素.
2. 3 对脂质过氧化的抑制率 脂质过氧化过程中
发生的 ROS氧化生物膜的过程,即 ROS 与生物膜
的磷脂、酶和膜受体相关的多不饱和脂肪酸的侧链
及核酸等大分子物质起脂质过氧化反应形成脂质
过氧化产物(Lipid PerOxide,LPO)如丙二醛 (Mal-
onaldehyde,MDA)和 4 - 羟基壬烯酸 (4 -
hydroxynonenal,HNE) ,从而使细胞膜的流动性和
通透性发生改变,最终导致细胞结构和功能的改
变.
定义脂质过氧化抑制率
(Ar%)=[(A模型– A样品)/(A模型– A空白) ]×
100%,
式中:A模型为模型管的吸光度,A样品为样品的吸光
度,A空白为空白管的吸光度.结果见图 3.
从图 3 可以看出,在实验的浓度范围内,当抗
氧化剂质量浓度为 0. 04 g·L -1时,Vc、山竹果壳色
素、芦丁抗氧化剂对脂质过氧化抑制率最低,分别
为 6. 07%、41. 12%、29. 32%,但随着抗氧化剂质
量浓度的增大,抑制率也随之增大. 当抗氧化剂质
量浓度增大到 0. 12 g·L -1时,Vc、山竹果壳色素、
芦丁对脂质过氧化抑制率分别增大到 19. 20%、
55. 30%、45. 20%,显示出质量浓度增大,抗氧化活
性显著增强的趋势.当质是量浓度达 0. 16 g·L -1
时,抑制率达最大,分别为 22. 60%、58. 90%、
49. 70%,但抑制率增加量较小,说明抗氧化活性能
力已接近饱和.
抗氧化剂的抗氧化能力与其浓度呈正量效关
系,即随着抗氧化剂用量的增加,对脂质过氧化抑
制率也增大;3 种抗氧化剂对脂质过氧化抑制率的
顺序为:山竹色素 >芦丁 > Vc.
2. 4 抗 DPPH自由基活性 DPPH可产生长寿命
的氮氧自由基,其在 517 nm处有一强吸收,其醇溶
液呈紫色的特性. 当有自由基清除剂存在时,由于
与其单电子配对而使其吸收逐渐消失,其褪色程度
与其接受的电子数量成定量关系,因而可用分光光
度计进行快速的定量分析[17].
定义抗氧化剂对 DPPH自由基的清除率
Q =[1 -(Ai - Aj)/Ac]× 100%,
式中:Ai 为加抗氧化剂后 DPPH 溶液的吸光度;Aj
为不加 DPPH溶液,只加抗氧化剂和水的溶液的吸
光度;Ac 为不加抗氧化剂,只加 DPPH 溶液和水的
溶液的吸光度.结果见图 4.
图 3 抗氧化剂质量浓度对脂质过氧化率的影响
Fig. 3 Effect of concentration of antiovidant on Ar
图 4 抗氧化剂质量浓度对 DPPH自由基的影响
Fig. 4 Effect of concentration of antioxidant on Q
97第 S1 期 毛绍春等:山竹果壳色素抗氧化活性研究
从图 4 可以看出,在实验的质量浓度范围内,
当抗氧化剂质量浓度为 0. 04 g·L -1时,Vc、山竹果
壳色素、芦丁抗氧化剂对 DPPH自由基的清除率最
低,分别为 38. 60%、9. 10%、32. 40%,但随着抗氧
化剂质量浓度的增大,清除率也随之增大. 当抗氧
化剂质是浓度增大到 0. 12 g·L -1时,Vc、山竹果壳
色素、芦丁对 DPPH 自由基的清除率分别增大到
57. 30%、21. 70%、51. 70%,显示出质量浓度增大,
抗氧化活性显著增强的趋势. 当质量浓度达 0. 16
g· L -1 时,清除率达最大,分别为 60. 50%、
25. 30%、58. 20%,但清除率增加量较小,说明抗氧
化活性能力已接近饱和.
抗氧化剂的抗氧化能力与其质量浓度呈正量
效关系,即随着抗氧化剂用量的增加,对 DPPH 自
由基的清除率也增大;3 种抗氧化剂对 DPPH 自由
基清除能力的顺序为:Vc >芦丁 >山竹色素.
3 结论与讨论
芦丁即芸香苷,其结构为槲皮素 - 3 - O -芸
香糖苷[18],具有典型的 6C - 3C - 6C 黄酮结构特
征,A环、B环上均有酚羟基,可发生抽氢反应而具
有还原性;山竹果壳色素主要成分为双苯吡酮类和
蒽醌类化合物[10],不具有黄酮的典型结构,但在芳
环上也具有酚羟基;Vc结构中含烯醇结构,也能脱
氢形成酮.因此 3 类物质都具有抗氧化活性,但由
于结构不同,它们的抗氧化活性也不同,故 3 类物
质对同一种自由基的清除率也不相同,而且差异较
大.由于自由基的结构不同,故同一种抗氧化剂对
它的清除率也不相同. 但在实验的质量浓度范围
内,抗氧化剂的抗氧化能力与其质量浓度呈正量效
关系,即在一定质量浓度范围内,质量浓度越大,抗
氧化能力超强.提示针对不同的自由基,应合理使
用抗氧化剂的种类和数量,才能达到有效的清除作
用.
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(下转第 84 页)
08 云南大学学报(自然科学版) 第 34 卷
现代化,2005,7(3) :65-70.
Studies on different optimum extraction method of
total flavonoids from Artemisia Rupestris L.
QIN Rui,XIE Cheng-xi
(Physical and Chemical Analysis Center,Xinjiang University,Urumqi 830046,China)
Abstract:It is studied that the different extraction method of total flavonoids from Artemisia Rupestris L. u-
sing the orthogonal method to develop an optimal process. Based on extraction ratio as standard,reflux method is
the best ,the net equity extraction of flavonoids reached 47. 8 mg /g,followed by microwave - assisted method,the
net equity extraction of flavonoids reached 42. 13 mg /g,the lowest is the ultrasonic method,the net equity extrac-
tion of flavonoids is just 38. 89 mg /g. For the extraction efficiency,microwave extraction is the optimal method,
followed by ultrasonic extraction,reflux method has the minimum efficiency.
Key words:Artemisia Rupestris L;total flavonoids;orthogonal test;ultrasonic extraction;microwave extraction
**************************************
(上接第 80 页)
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社,2008:142.
Study on antioxidative activity of pigment from Mangosteen husk
MAO Shao-chun,LI Zhu-ying
(Yuxi Agricultural Vocational Institute,Yuxi 653100,China)
Abstract:Antioxidative activity of pigment from Mangosteen husk were studied by photometric method. The
scavenging percentage of pigment from Mangosteen husk to hydroxyl radical is 50. 40%,to superoxide radical is
62. 10%,to DPPH radical is 25. 30%,inhibitory effect on lipid peroxidantion is 58. 90% . Within the experimen-
tal concentration,pigment from Mangosteen husk has certain antioxidative activity,and antioxidative activity of
pigment from Mangosteen husk was a positive dose - effect with it's concentration.
Key words:Mangosteen husk;pigment;antioxidative activity
48 云南大学学报(自然科学版) 第 34 卷