全 文 ：不同消毒处理对竹芋组培无菌外植体获得的影响
夏时云 1，付任胜 1，张德岚 2，马武赟 2
（1.天津市农业生物技术研究中心，天津 300192；2.天津农学院，天津 300384）
摘 要：以过渡栽培植株的侧芽或顶芽为外植体，研究了不同消毒处理对竹芋组培无菌外植体获得的影响。结果表明：采用
抗菌素浸泡5 h、熏蒸12 min并配合常规消毒处理（75％酒精浸泡1 min；3.0％～5.0％的次氯酸钠和0.1%升汞1∶1混合溶液浸
泡10～12 min）对外植体进行综合灭菌，能较快地杀灭竹芋外植体表面细菌，使初次接种污染率控制在20％以下。
关键词：竹芋；组织培养；消毒处理；污染率；外植体
中图分类号：S682.1+61 文献标识码：A 文章编号：1006-6500（2009）02-0006-03
Effect of Different Disinfection Treatment on Sterile Explant Obtaining in Tissue Culture of Calathea spp
XIA Shi-yun1，FU Ren-sheng1，ZHANG De-lan2，MA Wu-yun2
(1.Tianjin Research Center of Agricultural Biotechnology，Tianjin 300192，China；2.Tianjin Agricultural College, Tianjin 300384，China)
Abstract：The effect of different disinfection methods on explant obtaining in Calathea spp was studied. The results showed that
pre-treatment and antibiotic marinating for 5 h and suffocating for 12 min as well as ordinary disinfection for 12 min for surface disinfec-
tion could effectively control explant contamination. The contaminate rate with this method would be less than 20%.
Key words: Calathea spp；tissue culture；disinfection treatment；contaminate rate；explant
植物生理与生物技术
收稿日期：2008-12-08；修订日期：2009-02-28
基金项目：天津市科委重点科技攻关专项项目（06YFGZNC07800）
作者简介：夏时云（1963-），男，四川金堂人,副研究员，主要从事观赏花卉植物组织培养和植物细胞工程技术研究工作。
天津农业科学 Tianjin Agricultural Sciences 2009，15（2）：6-8
竹芋 (Calathea spp)是目前比较流行的多年生
观叶常绿草本植物，市场需求一直呈递增趋势。
目前，国内大多竹芋品种是从国外引进的。竹芋
一般分蘗较少，用常规分株繁殖难以扩大生产，因
此，研究竹芋组培快繁技术体系具有重要意义。
竹芋植物的芽大部分位于栽培基质内，且地
下部分有较发达的通气组织，组织内部有大量的
寄生或内生菌，在竹芋组培中，采用常规的酒精、
HgCl2等溶液灭菌，只能杀死表面的细菌，无法渗
入外植体内部，不能彻底杀灭组织材料的内生
菌，在初代培养和增殖过程中易出现严重的细菌
污染 [1]，如培养基表面出现多色的水渍样，有些底
部呈现白色晕状；有时也出现真菌污染，如培养
基表面出现各种霉菌，严重影响组培苗的正常生
长，甚至导致死亡 [1-7]。笔者以过渡栽培植株的侧
芽或顶芽为外植体，采用抗菌素浸泡、熏蒸并配
合常规消毒处理对外植体进行综合灭菌，能较快
地杀灭竹芋外植体表面细菌；在诱导培养基中适
量添加生物杀菌剂，能较大幅度地降低外植体的
污染率，取得较理想效果。
1 材料和方法
1.1 材料
市购盆栽“双线竹芋”、“青苹果”竹芋，购回
后挖出，洗净基质并消毒处理，无土栽培 2～3个
月，每隔 1周喷洒 1次 500倍多菌灵溶液，取植株
萌动的顶芽和侧芽作试验材料。
1.2 方法
1.2.1 预处理 将外植体先用洗衣粉水浸泡 30
min，自来水冲洗 30 min。
1.2.2 抗菌素浸泡 在 500～800倍多菌灵溶液中
分别浸泡 2，3，4，5，6 h，自来水冲洗干净。设未
浸泡的为CK1。
1.2.3 熏蒸 将预处理与抗菌素浸泡后的外植体
在密封玻璃容器中，用高锰酸钾∶甲醛=1∶2 熏
蒸 5，10，15，20 min后备用。设未熏蒸为CK2。
1.2.4 常规消毒处理 超净台上，用 75％酒精浸
泡 1 min；在 3.0％～5.0％次氯酸钠∶0.1%升汞＝
1∶1混合溶液中分别浸泡 8，10，12，15 min，无菌
第2期
水冲洗 5～6次。
1.3 培养条件
取已消毒的外植体，剥离茎尖接种于适量添
加生物杀菌剂的诱导培养基内。温度（25±2）℃，
光照强度 2 000～2 500 lx，光照周期 14 h/d。10 d
后观察污染情况。
2 结果与分析
2.1 不同抗菌素浸泡时间对竹芋初代培养外植体
污染率的影响
将预处理后的外植体用抗菌素不同时间浸泡
并熏蒸 15 min、常规消毒 15 min处理(见材料和方
法，下同)，无菌水冲洗后的外植体接种在培养基
中，培养 10 d后，调查外植体污染情况。从表 1可
见：（1）经不同时间抗菌素浸泡后，初代培养外植
体的污染率显著不同，并随浸泡时间延长而降
低，污染率在 12.0％～84.0%，而未经浸泡的高达
96.7%；（2）在浸泡处理中，以抗菌素浸泡 5 h的效
果好，污染率只有 18.1%；（3）本试验中，虽然抗菌
素浸泡 6 h能获得更低的污染率（12.0%），但我们
发现，浸泡 6 h后，初代培养时受到抑制，茎尖几
乎停止生长，对竹芋诱导培养极为不利。
本试验只用了较高浓度的多菌灵浸泡处理，
取得了较好的效果。但其它抗菌素如代森锰锌、
百菌清及链霉素、庆大霉素等是否有效，以及配
合使用的协同效果，需进一步试验。
2.2 不同熏蒸时间对竹芋初代培养外植体污染率
的影响
将预处理后的外植体先用抗菌素浸泡 5 h，再
进行不同时间熏蒸处理，最后常规消毒 15 min，无
菌水冲洗的外植体接种在培养基中，培养 10 d后，
调查污染情况。从表 2可见，经不同时间的熏蒸处
理，初代培养的外植体污染率为 23.5％～77.2%，
随熏蒸时间延长而降低。在不同处理中，以熏蒸
15 min的效果最好，污染率为 26.2%，比对照降低
53.5个百分点。熏蒸 20 min能获得更低的污染率
（23.5%），但初代培养时茎尖灰白，生长不良。因
此，熏蒸时间不宜过长，时间过长对熏蒸的外植
体杀伤力太大。可采取熏蒸 12～15 min，再结合
其他灭菌处理，可以取得较理想的效果。
2.3 不同时间常规消毒对竹芋初代培养外植体污
染率的影响
外植体经预处理和抗菌素浸泡 5 h及熏蒸 12
min后，在超净台上进行不同时间的常规消毒处
理，无菌水冲洗后接种在培养基中，培养 10 d后
的外植体污染率见表 3。从表 3可见，常规消毒时
间不同，初代培养的外植体污染率也不同，并随
常规消毒时间延长而降低，污染率在 14.6％～
48.7%。表明常规消毒对竹芋外植体消毒灭菌有
很好的效果。在常规消毒中，以消毒 10～12 min
较好，污染率为 31.1％～32.9%。处理 15 min容易
使初代培养的茎尖死亡。
3 结论
植物组织培养过程中，外植体消毒处理难，易
出现污染是最常见的问题 [2-7]。从以前所报道的
试验结果来看，在竹芋外植体消毒灭菌方法中，
大多数研究者只提供了 1种或 2种表面灭菌的方
法，且还只停留在实验室阶段 [1]。我们以过渡栽
培植株的侧芽或顶芽为外植体，研究了不同消毒
浸泡时间/ h
2
3
4
5
6
CK1
污染数/个
63
56
36
12
9
58
污染率/%
84.0
82.4
49.3
18.1
12.0
96.7
接种数/个
75
68
73
66
75
60
表 1 不同抗菌素浸泡时间
对竹芋初代培养外植体污染率的影响
熏蒸时间/ min
5
10
15
20
CK2
污染数/个
71
50
22
23
51
污染率/%
77.2
57.5
26.2
23.5
79.7
接种数/个
92
87
84
98
64
表 2 不同熏蒸时间
对竹芋初代培养外植体污染率的影响
消毒时间/ min
8
10
12
15
污染数/个
36
23
24
12
污染率/%
48.7
32.9
31.1
14.6
接种数/个
74
70
77
82
表 3 不同时间常规消毒
对竹芋初代培养外植体污染率的影响
夏时云等：不同消毒处理对竹芋组培无菌外植体获得的影响 ·· 7
第15卷天津农业科学
处理对竹芋组培无菌外植体获得的影响。结果
表明：采用抗菌素浸泡 5 h、熏蒸 12 min、常规消毒
处理 10～12 min对外植体进行综合灭菌，能较快
地杀灭竹芋外植体表面细菌。在诱导培养基中
适量添加生物杀菌剂，能较大幅度地降低外植体
的污染率，使初次接种污染率控制在 20％以下，
为今后竹芋工厂化组培快繁中的污染问题提供
了一种有效的克服方法。这些方法在其他植物
的组培苗工厂化生产中，也有较好的借鉴意义和
应用前景。在生产上应对外植体进行彻底灭菌
和严格的无菌操作，避免出现污染，尽可能多地
获得无菌外植体，为建立起竹芋初次培养无菌体
系奠定基础。
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