全 文 ：收稿日期:2012-12-14; 修订日期:2013-05-20
基金项目:福建省科技厅青年人才创新项目(No． 2008F3051) ;
福建省教育厅项目(No． JA08133)
作者简介:陈 红(1977-) ，女(汉族) ，河南许昌人，现任福建中医药大学
药学院副教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事中药质量标准及中
药炮制原理研究工作．
不同提取方法提取长泰砂仁中两种黄酮苷的对比研究
陈 红，程再兴，范振东
(福建中医药大学药学院，福建 福州 350108)
摘要:目的 考察不同提取方法对长泰砂仁中两种黄酮苷含量的影响，确定最佳提取方法。方法 直接回流提取，运用最
佳提取方法提取检测异槲皮苷和槲皮苷含量。结果 异槲皮苷进样量在 0． 017 ～ 0． 085μg 范围内有良好的线性关系，平
均回收率为 100． 3%，ＲSD为 0． 2%;槲皮苷进样量在 0． 042 ～ 0． 378μg范围内线性关系良好，平均回收率为 100． 5%，ＲSD
为 0． 3%。结论 方法简便快捷，可作为长泰砂仁含量测定质量控制方法。
关键词:长泰砂仁; 高效液相色谱法; 槲皮苷; 异槲皮苷
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2013． 10． 031
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2013)10-2387-02
查阅文献发现，大多数学者研究的砂仁为广东产阳春砂，本
文研究对象是采自福建长泰县一带的砂仁，长泰砂仁(福建)为
姜科植物阳春砂或缩砂的成熟果实或种子，又名阳春砂仁 Amo-
mum villosum Lour．［1］，载于宋《开宝本草》，是阳春砂的变异品
种。具有行气开胃、温脾止泻的功效。清乾隆《长泰县志》记载，
该县三娘村一带有人工栽培砂仁，种子是从南洋带回的，后沦为
野生。20 世纪 60 年代以来，长泰及毗邻各县均发展人工栽培，
行销省内外。该地产砂仁以品质优，果实大，药用价值高，而与广
东阳春砂齐名，被列为国家重点发展的南药品种。本文考察了不
同提取方法对砂仁中的槲皮苷和异槲皮苷的含量的影响，确定最
佳提取方法后，同时测定了长泰砂仁中异槲皮苷与槲皮苷的含
量。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 Agilent 1200 高效液相色谱仪，Agilent Chemstation 工
作站;KQ －300E型超声波发生器(昆山市超声仪器有限公司) ;
德国 sartoriusAG － CP225D 天平;AＲ2130 千分之一电子天平(奥
豪斯仪器有限公司制造) ;Milli － Q型纯水器;HH － S型恒温水浴
锅。
1． 2 试药 实验样品分别来自长泰县农民采摘自长泰县吴岗山，
长泰县聚善堂药店、长泰县泰兴门诊、厦门鹭燕医药有限公司，经
福建中医药大学药学院鉴定教研室杨成梓副教授鉴定为姜科植
物阳春砂 Amomum villosum Lour．的成熟果实。槲皮苷标准品(中
国药品生物制品检定所，批号:11538 － 200403) ;异槲皮苷标准品
(成都曼斯特生物科技有限公司，纯度≥98%，批号:MUST －
11121801) ;乙腈为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 phenomenexC18(4． 6mm × 250 mm，5μm) ，流动相
为乙腈 － 0． 1%乙酸溶液(80∶ 20) ，运行时间 30 min;检测波长
350 nm;流速 0． 8 ml·min －1;柱温 30℃。
2． 2 不同提取方法的考察
2． 2． 1 直接超声法 取砂仁粉末约 2． 0 g，精密称定，置具塞三角
瓶中，加甲醇 50 ml，超声两次，每次 30 min。过滤，合并滤液，置
蒸发皿中水浴挥至溶液体积 5 ～ 7ml，残渣加甲醇溶解置 10 ml容
量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
2． 2． 2 脱脂超声法 取砂仁粉末约 2． 0 g，精密称定，滤纸包裹，
置索氏提取器中，加石油醚(60 ～ 90℃)100 ml，提取 4 ～ 6 h。取
出脱脂后的药材，挥干石油醚，放入具塞三角瓶中，加甲醇 50 ml，
下同“2． 2． 1”项下操作。
2． 2． 3 直接回流法 取砂仁粉末约 2． 0 g，精密称定，置圆底烧瓶
中，加甲醇 50 ml，回流提取 1h，滤过，残渣加甲醇 50 ml，再回流
提取 1 h，滤过，合并滤液，置蒸发皿中水浴挥至溶液体积 5 ～ 7
ml，残渣加甲醇溶解置 10 ml 容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即
得。
2． 2． 4 脱脂回流法 取砂仁粉末约 2． 0g，索氏提取同“2． 2． 2”项
下操作。取出脱脂后的药材，挥干石油醚，放入圆底烧瓶中，下同
“2． 2． 3”项下操作。
2． 2． 5 4 种方法测定结果 见表 1。
表 1 不同提取方法异槲皮苷与槲皮苷含量 mg·g － 1
提取方法 异槲皮苷 槲皮苷
直接超声法 0． 019 3 0． 100 2
脱脂超声法 0． 020 0 0． 109 1
直接回流法 0． 027 8 0． 112 4
脱脂回流法 0． 027 7 0． 112 6
n = 3
从以上结果可以看出，回流提取法两种化合物的提取得率均
比超声法高，脱脂后回流与直接回流得率基本一样，考虑省时、节
能等因素，确定直接回流提取为最佳方法。
2． 3 方法学考察
2． 3． 1 对照品与供试品溶液的制备 分别取一定量的槲皮苷和
异槲皮苷，精密称定，置于 10ml 容量瓶中，加甲醇配制成异槲皮
苷浓度 0． 017mg /ml、槲皮苷浓度 0． 042mg /ml。供试液的制备按
照“2． 2． 3”项下方法。
2． 3． 2 线性关系考察 精密吸取异槲皮苷对照品溶液 1，2，3，4，
5μl注入高效液相色谱仪，记录峰面积。以峰面积 A 为纵坐标，
进样量为横坐标，绘制标准曲线，计算异槲皮苷回归方程为Y =
31． 5X － 0． 7，r = 0． 9995，进样量在 0． 017 ～ 0． 085μg有良好的线
性关系，精密吸取槲皮苷对照品溶液 1，3，5，7，9μl 注入高效液
相色谱仪，同法计算的槲皮苷回归方程为 Y = 34． 376X +
8． 036 8，r = 0． 9996，进样量在 0． 042 ～ 0． 378 μg内有良好的线性
关系。
2． 3． 3 精密度试验 分别取异槲皮苷和槲皮苷对照品溶液
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2013 VOL． 24 NO． 10 时珍国医国药 2013 年第 24 卷第 10 期
10μl，重复进样 6 次，记录色谱峰面积，计算得异槲皮苷、槲皮苷
ＲSD分别 1． 9%和 2． 0%。
2． 3． 4 稳定性试验 取供试液于制备后 0，2，4，6，8，10，12，24 h
进样，测定异槲皮苷与槲皮苷的峰面积，计算 ＲSD 分别为 1． 0%
和 0． 9%，表明药材供试液在 24h内稳定。
2． 3． 5 重复性试验 取同一样品，按照“2． 2． 3”项制备供试液，
平行操作 6 份。取 10μl进样，测定异槲皮苷与槲皮苷峰面积，异
槲皮苷与槲皮苷的 ＲSD分别为 1． 7%与 1． 0%，表明此种方法的
重复性良好。
2． 3． 6 加样回收率试验 取同一批次已知含量的药材粉末 6 份，
精密称定，分别置圆底烧瓶中，精密加入等量的异槲皮苷和槲皮
苷对照品溶液，按“2． 2． 3”项处理，测定，计算异槲皮苷平均回收
率为 100． 3%，ＲSD为 0． 2%;槲皮苷平均回收率 100． 5%，ＲSD为
0． 3%。结果见表 2。
表 2 异槲皮苷和槲皮苷加样回收率试验
成分
样品中含
量 /mg
加入量
/mg
测得值
/mg
回收率
(%)
平均回收
率(%)
ＲSD
(%)
0． 0288 0． 028 0． 0566 99． 29
0． 0280 0． 028 0． 0568 102． 86
异槲皮苷 0． 0274 0． 028 0． 0550 100． 71 100． 3 0． 2
0． 0290 0． 028 0． 0568 99． 29
0． 0282 0． 028 0． 0558 97． 86
0． 0264 0． 028 0． 0540 101． 57
0． 1124 0． 119 0． 2330 101． 34
0． 1162 0． 119 0． 2348 99． 67
槲皮苷 0． 1198 0． 119 0． 2390 100． 17 100． 5 0． 3
0． 1157 0． 119 0． 2346 103． 91
0． 1154 0． 119 0． 2323 98． 23
0． 1129 0． 119 0． 2314 99． 57
n =6
2． 4 含量测定 取各供试品溶液 10μl 进样，测定异槲皮苷与槲
皮苷峰面积(见图 1)。计算其含量(见表 3)。
A －异槲皮苷对照品 B －槲皮苷对照品
C －样品中异槲皮苷与槲皮苷
图 1 异槲皮苷与槲皮苷含量测定结果
表 3 异槲皮苷与槲皮苷含量测定结果 %
成分 长泰吴岗山
长泰聚善堂
药店
长泰泰兴
门诊
厦门鹭燕医药
公司
异槲皮苷 0． 278 0． 250 0． 203 0． 157
槲皮苷 1． 124 1． 130 0． 910 0． 708
n =3
3 讨论
从含量测定结果可以看出，福建长泰砂仁中槲皮苷含量较
高，异槲皮苷含量较低，无论测得二者的含量高低，二者的含量比
值相对比较稳定，异槲皮苷 /槲皮苷含量:长泰吴岗山 0． 2473，长
泰聚善堂 0． 2212，长泰泰兴门诊 0． 2213，厦门鹭燕医药有限公司
0． 2218，基本在 0． 2 左右，笔者也测定了广东、海南、云南产砂仁
中的二者的含量，其二者对应比值分别为:0． 2354、0． 0785、
0． 3960。不同产地二者含量比值不同，福建长泰砂仁与广东阳春
砂二者的比值比较接近，这是否与长泰砂仁是阳春砂的变异品种
有关，需进一步研究。
文献报道［2］砂仁中异槲皮苷和槲皮苷的含量测定的流动相
为甲醇 － 0． 4%磷酸水体积比 44∶ 56。实际操作中很难重复得
到分离效果较好的图，尤其是槲皮苷难以实现基线分离。本实验
经过反复摸索，最终确定乙腈 － 0． 1%乙酸水体积比 20∶ 80，能
够很好地实现异槲皮苷、槲皮苷的基线分离。
因砂仁中富含油脂类成分可能会影响其他成分的提取，故本
研究考察了脱脂与不脱脂条件下的回流与超声提取。本实验中
的提取方法中有浓缩供试液的步骤，浓缩中有部分物质析出，考
察了将析出物质重新溶解与弃去析出物质后的供试品中槲皮苷
和异槲皮苷含量的对比，发现结果没有明显差异，但在浓缩中还
是注意浓缩体积为 6 ～ 8 ml为宜。
参考文献:
［1］ 中药辞海编写组．中药辞海，第 2 卷［M］．北京:中国医药科技出版
社，1996:1185．
［2］ 李宗主，潘瑞乐，李 展，等． 阳春砂仁中总黄酮、异槲皮苷和槲皮
苷含量测定研究［J］．科技导报，2009，27(9) :31．
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