全 文 ：用组织培养法诱导白云杉胚形成
许 多 芽和 针 叶 的试 验
Cam P b山 R. A. Dl 咒n D. J
1 7 9 4年德赞等对利 用组织培养法进行树
木育种的可能性及其作用曾作了详细介绍 。
但到目前为止 , 对裸子植物采用组织培 养法
分化器官的报道还是很少 。
1 9 5 0年伐尔最先报道了裸子植物器官的
离体培养 。 他报道了从红杉树瘤培养的愈伤
组织形成芽的现象 。 1 9 6 5年康纳和奥维洛用
iB o at o ir en alt i
s E dn ! 的胚进 行培养 , 从 胚
轴产生了类胚体 , 由类胚体发 育 成 了 芽 。
1 9 72年康纳报道 , 在 iP n u , gaer d ial a 的愈伤
组织上形成 了根和类似芽的组织 。 其后查罗
巴和德赞报道了 ( 1 9 7 3) 挪威云杉冬芽离体培
养 , 由其基部诱导生根的结果 。 1 9 74年索默
和勃朗用三个松树种的胚进行培养 , 从子叶
长出芽 , 从芽发育成生根的小苗 。 格林伍德
(1 96 5
,
1 97 0
,
1 9 7 3 ) 用兰柏氏松休眠胚的切穗
进行离体培养 , 形成了根 。 I Q7 3年德赞等用
白云杉进行悬浮培养 , 形成了一些具有维管
束和形成层的类似茎的丛状芽 。
本试验介绍从 白云杉胚轴切片培养不断
诱导产生许多叶和芽的简单技术 。
穗用德赞等 ( 1 9 7 3) 的培养基进行培养 , 但略
作如下改变 : N且 ; N o 。为 80 0毫克 /升 , K N o 3为
3 4 0毫克 /升 , K CI 』65 毫克 /升 , 蔗糖 3 0 0 0 0毫
克 /升 , N A A 为 1 0一 5、 10 一 7和 O克分子 , 用
B A P代替激动素 , 其量为 10 一 6 、 10 一 7和 0 克
分子 , 琼脂 0 . 7% , 不加氨基酸 。 培养基放
50 x l2 毫米的皮氏培养皿内 , 上 有 密 闭的
盖 ,其量为每培养皿 4 . 5毫克。 切穗共 18 个 ,
分置 9 种不同的培养基内 , 切穗基部埋入培
养基 , 深约一毫米 。 培养温度和光照范围在
2 0℃ , 1 3 . 5小时 ( 2 4 0 , 2 1 0 , 2 2 0 , 户 w e n ` “红光
区 , 远红光区 , 蓝光区 ) 到 70 ℃ , 10 . 5小时
(黑暗条件 ) 之间 。
材 料 和 方 法
把采 自安大略阿许列矿区的白云杉种子
放 5 %过氯化钙和 0 . 2 % 特吉托尔 N P x 溶液
内消毒 4 0分钟 , 然后在 25 ℃下用连续光照进
行催芽 。 由于种子发芽时间不一 , 切取胚轴
切穗时有的在幼芽子叶开始展开以前 , 有的
则在子叶全部展开以后 。 切穗长 度 为 3一 5
毫米 , 切穗时应注意去除顶端分生组织 。 切
试 验 结 果
用蔡乙酸和 6一苇基缥吟培养的结果是 :
切穗基部埋入培养基的部分形成愈伤组织 ,
培养基上面的部分只现膨胀 , 切穗顶部呈棕
色变干 。 培养二月后 , 膨胀部分发生 1 0 个
以上的器官 。 胚轴应该平放 , 但试验时由于
’ 没注意 , 把 1头理在培养基里 , 结果意外地发
生 了上述现象 , 这种现象是过去没看到的 。
当我们重复这一试验时 , 采用常 用的培 养基
结果产生器官的比例为 1 / 2 0。 为了提高诱导
频率 , 用不同浓度 N A A和 B A P进行培养 , 结
果如下 : ①用 10 ` 克 分 子 N A A和 1 0一 5克 分
子 B A P , 诱导频 率 为 1 / 7 ; ② 10 一 “ 克 分 子
B A P加 1。 , 或 。克分子 N A A , 前者的频率为
7 / 1 1
, 后者为 1 1 / 1 6 ; ③ 1 0 7克分子 B A P ,
不加 N A A , 频率为 2 /飞7 。 (下 转 24 页 )
美国黄松种胚离体培养发育初期
观 察 结 果
M
.
B
.
M 0e r
用组织培养技术培养植物体细胞和各个
器官组织的方法早已应用于裸子植物和被子 ·
植物 。 最近 1 0一 2 0年人们开始利用这种方法
来进行针叶树组织的离休培养 。 1 9 6 9年据哈
维和格拉斯报道 , 对 12 种裸子植物进行组织
培养的结果都得到了愈伤组织 , 但试验时需
要采用复杂的培养基和严格控 制 的 消 毒技
术 。 1 9 7 2年维特聂尔报道花旗松愈伤组织分
化出了根 , 康纳 ( 1 9 7 2) 则从 P i n u 。 罗 ar r dsa , , a
愈伤组织分化’出了根和芽 。
从针叶树组织培养分化出根和芽通常是
被认为困难的 。 但 1 9 7 5年索默等用美国长针
(上接 23 页 ) 试验中有时在切穗的
愈伤组织部位发生器官 , 有时切穗 中部不见
膨胀 , 但也产生器官。
当切穗产生器官 (培养约 87 天后 ) 放不
含 N A A或 B A P的培养基上进行转移培养时 ,
4 0天后器官分化出针叶和芽 。 用同样的培养
基再培养 4一 6周 , 外植体发育成许多较长的
芽 。 有一个芽生了根 , 而且小苗 已 移 栽 入
土 。
我们用短叶松胚轴进行诱导培养的初步
结果说明 , 采 用同样方法也能产生器官 , 但
频率很低 。
用白云杉胚轴切穗的基部埋入洋菜培养
基培养能产生器官 。 如用适宜的培养基 , 切
穗形成许多器官的频率可达 69 % 。 另外所作
两个试验的结果 一 i正明 , 这样培养的诱导频率
也很高 。 这说明这种方法所得结果不是偶然
现象 。
诱导过程中B A P的克分子当量起主要作
用 。 如 B A P 为 1 0一 5克分子当量 , N A A为 1 0一 “克
分子时 , 诱导受到抑制 , N A A 为 1 0一 7时 , 不
受抑制 。 但 B A P为 10 7克分子时 , N A A即使
为 1『 7克分子 , 诱导过程仍受抑制 。 这说明
激动素和植物生长素的比例对云杉芽的诱导
来说也与烟草一样是 很重要的 。 B A P一开始
虽然能诱导器官的发生 , 但至 少在高浓度下
会阻止器官的继续发展 。 切穗形成器官后也
只有转移到没有 B A P的培养基上才能分化出
针·叶 。
切穗培养发育的构造与白云杉冬芽离体
培养结果 相似 , 基部变为愈伤组织 , 上面是
一个长轴 , 轴上长有叶原基 。 主要差别是胚
轴切穗上的叶原基是在试验中由许多新生的
分生组织产生的 , 而冬芽的原基是在试验一
开始就由早 已存在的一个分生组织产生的 。
白云杉的胚轴适于用来研究裸子植物器
官形成的控制问题 , 因为这种胚轴不带从种
子切下的胚 , 此外胚轴切穗是一种单纯的 、
比较一致的试验材料 。
试验结果证明 , 一般认为很难用无性繁
殖法繁殖的具有经济价值的树种 , 可以用这
种方法进行无性繁殖 。
摘译自 《 C o n 、 J . B o t》 19 75 ,
V
.
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