全 文 ：紫外分光光度法测定攀茎耳草中总黄酮含量
何可群1，李相兴2，杨 琼1，卢文芸1
(1．贵州民族大学化学与环境科学学院，贵州贵阳 550025;2．贵州民族大学民族学与社会学学院，贵州贵阳 550025)
摘要 ［目的］测定攀茎耳草总黄酮含量。［方法］以芦丁为对照品，用超声辅助提取法提取攀茎耳草中的总黄酮，再用紫外分光光度法
测定总黄酮含量。［结果］在 0． 011 ～0． 110 mg /ml范围内芦丁浓度与吸光度有良好的线性关系，回归方程为 Y = 18． 015X + 0． 020，相
关系数 Ｒ2 = 0． 999 4;攀茎耳草中总黄酮的相对百分含量为 1． 609%，精密度试验 ＲSD为 1． 10%。［结论］该方法操作简便、结果可靠，能
为攀茎耳草药用价值的开发及扩大资源利用提供科学的依据。
关键词 攀茎耳草( Hedyotis scandens Ｒoxb． ) ;紫外分光光度法;总黄酮;含量
中图分类号 S567; TS201 文献标识码 A 文章编号 0517 －6611( 2013) 03 －01032 －02
Determination of Total Flavonoids from Hedyotis scandens Ｒoxb． by UV Spectrophotometry
HE Ke-qun et al ( Department of Chemistry and Environmental Science，Guizhou Minzu University，Guiyang，Guizhou 550025)
Abstract ［Objective］ To detect the content of total flavonoids from Hedyotis scandens Ｒoxb． ［Method］With rutin as the reference sub-
stance，total flavonoids were extracted from H． scandens by ultrasonic-assisted extraction． Then，the content of total flavonoids was detected by
UV Spectrophotometry． ［Ｒesult］Ｒutin concentration and absorbancy had good linear relationship between 0． 011 and 0． 110 mg /ml． The re-
gression equation was Y = 18． 015X + 0． 020; and correlation coefficient was Ｒ2 = 0． 999 4． The relative percentage of total flavonoids in H．
scandens was 1． 609% ． And the ＲSD in precision test was 1． 10% ． ［Conclusion］This method was simple，reliable and could provide scientif-
ic references for the development and utilization of the medicinal value of H． scandens．
Key words UV Spectrophotometry; Hedyotis scandens Ｒoxb． ; Total flavonoids; Content
基金项目 国家社会科学基金( 12XMZ033) 和贵州省科学技术基金( 黔
科合 J字 LKM［2011］06 号) 。
作者简介 何可群( 1971 － ) ，女，白族，云南云龙人，副教授，硕士，从事
药用植物学、分析化学研究，E-mail: hekequn2004@ 163． com。
收稿日期 2012-11-23
攀茎耳草(Hedyotis scandens Ｒoxb． 或 Oldenlandia scan-
dens(Ｒoxb．)O． Ktze．)是茜草科(Ｒubiaceae)耳草属(Hedyo-
tis)多年生攀茎状草质藤本植物，又名攀援耳草、凉喉茶、理
肺散、接骨丹和小接骨。其长可达 5 ～ 10 m;主根发达，圆柱
形，多弯曲;茎圆柱形，有槽及细条纹，具分枝，无毛，具明显
托叶鞘;叶对生;近无柄或具长 2 ～3 mm的叶柄;叶片纸质长
椭圆形或椭圆状披针形，先端渐尖，基部楔形，上面绿色，下
面绿白色，两面平滑无毛，侧脉 3 ～ 4 对;全缘;聚伞花序顶
生，密集;总花梗被柔毛;苞片线形，长 2 ～ 3 mm，被毛，花梗
长3 ～4 mm;花萼漏斗状，长2 mm，先端具4浅齿，齿间有2 ～
3枚腺体外凸;花冠白色，花冠简长 2 mm，裂片 4，长约 4 mm，
反曲，基部密生曲长柔毛;雄蕊 4，花药外露，柱头 2，密生短
柔毛;蒴果球形，直径约 5 mm，黑色;花期 8 月［1 －2］。攀茎耳
草仅分布于在我国云南和国外的喜马拉雅山脉和缅甸等
地［3］。其全株均可入药，具有清热解毒、润肺止咳和续筋接
骨的功效，主治肺炎、支气管炎、口腔炎、肺结核和骨折等，是
我国云南白族、哈尼族和傣族等常用的中草药［1 －2，4］。研究
表明，耳草属植物的化学成分主要有五环三萜及其苷类、环
烯醚萜类、黄酮类、蒽醌类和生物碱类等，生物活性有调节免
疫、抗诱变、抗肿瘤、抗菌消炎和对中枢神经系统的作用
等［5］。目前，只有邓芳叶等报道了从攀茎耳草中分离得到齐
墩果酸、山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、芹菜素等三萜类
及黄酮类化学成分［6］，而有关攀茎耳草总黄酮测定的研究鲜
有报道。笔者对攀茎耳草根皮的浓度 70%乙醇提取液的紫
外光谱及总黄酮含量进行研究，以期为该民族药的进一步开
发及扩大资源利用提供科学依据。
1 材料与方法
1． 1 材料
1． 1． 1 研究对象。攀茎耳草(Hedyotis scandens Ｒoxb．) ，购自
云南省云龙县，标本保存于贵州民族大学化学与环境科学学
院药学教研室。
1． 1． 2 主要仪器。756PC紫外 －可见分光光度计，购自上海
舜宇恒平科学仪器有限公司;METTLEＲAE240 电子分析天
平，购自上海天平仪器厂;BGZ-30 电热鼓风干燥箱，购自上
海博迅实业有限公司医疗设备厂;SG3200HE超声清洗仪，购
自上海冠特超声仪器有限公司;数显恒温水浴锅，购自常州
博远实验分析仪器有限公司。
1． 1． 3 主要试剂。芦丁对照品，色谱纯，购自贵州迪大科技
有限责任公司;氢氧化钠、亚硝酸钠、硝酸铝、无水乙醇、石油
醚均为分析纯，市售。
1． 2 方法
1． 2． 1 攀茎耳草总黄酮的提取［7 －9］。将自然晾干的攀茎耳
草根皮在电热鼓风干燥箱中于(60 ±1)℃烘干 5 h，精确称取
干燥、研碎的攀茎耳草根皮粉末适量，按 1∶ 20(W/V，g /ml，下
同)的料液比加入浓度 70%的乙醇浸泡，超声提取。提取条
件为:时间 30 min，超声频率 40 kHz，功率 150 W，提取结束
后，合并提取液，过滤、冷却、用浓度 70%的乙醇定容、摇匀
备用。
1． 2． 2 芦丁标准溶液的制备。精确称取 27． 5 mg于 120 ℃
干燥至恒质量的芦丁对照品，置 50 ml 容量瓶中，加入浓度
70%乙醇适量，置水浴上微热使其溶解、冷却，再加入浓度
70%乙醇至刻度，摇匀，即得。
1． 2． 3 芦丁、攀茎耳草紫外吸收光谱的研究。精确吸取芦
丁标准溶液(0． 550 mg /ml)、攀茎耳草根皮的提取液各 1． 00
责任编辑 石金友 责任校对 李岩安徽农业科学，Journal of Anhui Agri． Sci． 2013，41(3):1032 － 1033，1046
DOI:10.13989/j.cnki.0517-6611.2013.03.064
ml，分别置于2支10 ml比色管中，加浓度70%的乙醇补足至
10． 00 ml，再以浓度 70%的乙醇溶液建立基线，在 200 ～ 700
nm波长范围进行波长扫描，得到芦丁和攀茎耳草根皮提取
液显色前的紫外吸收光谱;精确吸取芦丁标准溶液(0． 550
mg /ml)、攀茎耳草根皮的提取液各 1． 00 ml，分别置于 2支 10
ml比色管中，加浓度 70%的乙醇补足至 5． 0 ml，分别加入
0. 40 ml浓度 50 g /L的亚硝酸钠溶液，摇匀，放置 6 min 后，
精确加入0． 40 ml浓度50 g /L硝酸铝溶液，摇匀，放置6 min，
再精确加入 4． 00 ml 浓度 40 g /L 氢氧化钠溶液，并用浓度
70%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置 12 min。以试剂空白建立
基线，在 200 ～700 nm 波长范围进行波长扫描，得到芦丁和
攀茎耳草根皮提取液显色后的紫外吸收光谱。
1． 2． 4 方法学考察［10 －17］。(1)线性关系的考察。精确吸取
质量浓度 0． 550 mg /ml的芦丁标准溶液 0、0． 25、0． 50、1． 00、
2． 00、3． 00和 4． 00 ml分别置于 7支 10 ml 比色管中，加入浓
度 70%的乙醇补足至 5． 0 ml，分别加入 0． 40 ml浓度 50 g /L
的亚硝酸钠溶液，摇匀，放置 6 min 后，精确加入 0． 40 ml 浓
度 50 g /L硝酸铝溶液，摇匀，放置 6 min，再精确加入 4． 00 ml
浓度 40 g /L氢氧化钠溶液，并用浓度 70%乙醇稀释至刻度，
摇匀，静置 12 min。以试剂空白为参比，于 370 nm波长下测
定吸光度，以吸光度为纵坐标，显色液中芦丁的质量浓度 C
(mg /ml)为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。(2)重复
性试验。精确称取攀茎耳草根皮样品 5份，按线性关系方法
进行测定，计算 ＲSD。(3)加标回收试验。精确称取一定量
攀茎耳草根皮样品 3 份，再精确加入芦丁标准溶液(浓度为
0． 550 mg /ml)2． 00 ml，按样品线性关系方法进行提取、测定，
计算平均加标回收率及 ＲSD。
1． 2． 5 样品测定［10 －17］。精确量取 1． 00 ml“1． 2． 1”所得攀
茎耳草根皮浓度 70%乙醇提取液，按标准曲线的绘制方法加
显色剂处理，于 370 nm波长下测得攀茎耳草的吸光度，代入
回归方程得攀茎耳草根皮的总黄酮类化合物以芦丁计算的
质量浓度 C(mg /ml) ，换算为干燥药材中总黄酮含量。
2 结果与分析
2． 1 芦丁、攀茎耳草紫外吸收光谱的研究 很多文献报道
以芦丁为对照品，用 NaNO2-Al(NO)3-NaOH为显色剂进行总
黄酮含量测定时选用 500 nm或 510 nm作为测定波长，但有
些黄酮类物质在 500 nm处无吸收峰而有些非黄酮类物质在
500 nm处有较强吸收［18］，攀茎耳草样品溶液在 500 nm附近
无吸收峰，故试验参照文献［18］，用 370 nm作为测定波长。图
1 ～2表明，在加显色剂前后，芦丁标准溶液和攀茎耳草样品
溶液的紫外吸收光谱均有所改变，显色后在 370 nm 处有最
大吸收峰，适于定量测定。
2． 2 方法学考察 (1)线性关系的考察。计算得回归方程
为:Y = 18． 015X + 0． 020，相关系数 Ｒ2 = 0． 999 4。试验结果
表明，在 0． 011 ～0． 110 mg /ml范围内芦丁浓度与吸光度的线
性关系良好。(2)重复性试验。计算得 ＲSD为 1． 10%，表明
试验重复性良好。(3)加标回收率试验。由表 1 可知，平均
加标回收率在 97． 85%，ＲSD为 0． 286%。试验结果表明，该
注:1为未加显色剂的样品溶液;2为显色后的样品溶液。
图 1 芦丁标准溶液的紫外吸收光谱
注:1为未加显色剂的样品溶液;2为显色后的样品溶液。
图 2 攀茎耳草样品的紫外吸收光谱
方法操作简便、结果可靠，可用于攀茎耳草中总黄酮的含量
测定。
表 1 加标回收试验结果
样品重量
mg
样品黄酮
含量∥mg
加标量
mg
测得量
mg
回收率
%
平均值
%
ＲSD
%
100． 00 1． 609 1． 100 2． 643 97． 56
100． 00 1． 609 1． 100 2． 651 97． 86 97． 85 0． 286
100． 00 1． 609 1． 100 2． 658 98． 12
2． 3 样品总黄酮含量的测定 由表 2 可知，攀茎耳草样品
中总黄酮的平均含量为 1． 609%，ＲSD为 1． 10%。
表 2 总黄酮测定及精密度试验结果
试验号 样品总黄酮含量∥% 平均值∥% ＲSD∥%
1 1． 587
2 1． 595
3 1． 615 1． 609 1． 10
4 1． 622
5 1． 628
3 结论
试验以芦丁为对照品，采用超声辅助提取法提取攀茎耳
草中的总黄酮，再用紫外分光光度法测定总黄酮含量。试验
结果表明，攀茎耳草干燥全草中总黄酮的含量为 1． 609%。
该方法操作简便、结果可靠，为攀茎耳草药用价值的开发及
扩大资源利用提供了科学依据。
参考文献
［1］云南省卫生厅．云南中草药［M］．昆明:云南人民出版社，1971．
(下转第 1046页)
330141 卷 3 期 何可群等 紫外分光光度法测定攀茎耳草中总黄酮含量
表 3 栽培土壤 AP12和 AP43测定结果比较
镉形态
AP12各态含量
μg /g
AP12各态所占
比例∥%
ＲSD
%
AP43各态含量
μg /g
AP43各态所占
比例∥%
ＲSD
%
离子态 0． 193 52． 06 2． 18 0． 233 24． 13 1． 89
碳酸盐结合态 0． 037 9． 82 1． 22 0． 232 24． 08 1． 76
Fe，Mm氧化物结合态 0． 016 4． 40 1． 68 0． 104 10． 74 2． 92
有机态 0． 059 15． 92 2． 31 0． 192 19． 93 2． 64
残留态 0． 066 17． 80 2． 25 0． 203 21． 12 0． 33
含 Cd总量∥μg /g 0． 371 － － 0． 964 － －
2． 4 AP43和 AP12川芎药材和土壤的含镉量比较 由表 4
可知，川芎药材 AP12含镉量为 2． 124 μg /g，远高于其土壤含
镉量(0． 385 μg /g) ，且土壤离子态镉百分比为 52． 06%;川芎
药材 AP43 含镉量为 0． 304 μg /g，远低于其土壤含镉量
(1. 083 μg /g) ，且土壤离子态镉百分比为 24. 13%。研究结
果表明，川芎药材含镉量随着离子态镉百分比增加而增加。
表 4 土壤离子态镉百分比与 pH的关系
土壤类型 pH 离子态镉百分比∥% 药材中镉含量∥μg /g ＲSD∥% 土壤中总镉含量∥μg /g ＲSD∥%
AP12湿土 5． 57 － － － － －
AP12干土 5． 71 52． 06 2． 124 0． 80 0． 385 2． 25
AP43湿土 7． 20 － － － － －
AP43干土 7． 11 24． 13 0． 304 1． 13 1． 083 1． 52
3 结论与讨论
研究结果表明，土壤中镉的存在形态与土壤 pH值有关，
pH值越小，酸度越强，离子态镉比例越大。栽培土壤酸度增
加，土壤中离子态镉比例越大，川芎药材中镉的含量越大。
在 AP43 土壤(pH 7． 21 ～ 7． 53)中，虽然离子态镉比例低
(24. 11%) ，但含量绝对值高(0． 233 μg /g) ，而 AP43 川芎药
材中镉含量相对较低。这一结果表明，小土壤 pH的变化不
仅使土壤离子态镉比例发生改变，很可能还影响了川芎植物
对镉的吸收和富集生理功能。
参考文献
［1］张敏，周莉，曹建华，等．桂林毛村土壤钙，铅，锌有效性与 PH关系初探
［J］．广西农业科学，2008，39(6):796 －799．
［2］吴涛，曾英，倪师军，等．成都市郊区域农田中土壤镉形态研究［J］．上
海环境科学，2004，23(6):236 －239．
［3］李晓念，陈幸，李彬，等．川产道地药材川芎中重金属的来源途径研究
［J］．安徽农业科学，2010，38(34):19361 －19363．
［4］陈媛．土壤中镉及镉的赋存形态研究进展［J］．广东微量元素科学，
2007，14(7):7 －12．
［5］查立新，马玲，刘文长，等．振荡提取和超声提取用于土壤样品中元素
形态分析［J］．岩旷测试，2011，30(4):393 －399．
［6］刘云惠，魏显有，王秀敏，等．土壤中铅镉的化学形态和有效态的提取
与分离研究［J］．河北农业大学学报，1998，10(4):44 －47．
［7］中华人民共和国药典委员会．中华人民共和国药典一部［S］．北京:化
学工业出版社，2010:附录
檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪檪
48．
( 上接第 1033页)
［2］黎光南．云南中药志［M］．昆明:云南科技出版社，1990．
［3］王瑞江，赵南先．耳草属的起源及地理分布［J］．热带亚热带植物学报，
2001，9(3):219 －228．
［4］GHOＲBANI A，LANGENBEＲGEＲ G，FENG L，et al． Ethnobotanical study
of medicinal plants utilised by Hani ethnicity in Naban Ｒiver Watershed
National Nature Ｒeserve，Yunnan，China［J］． Journal of Ethnopharmacolo-
gy，2011，134(3):651 －667．
［5］斯建勇，陈迪华，潘瑞乐，等．耳草属植物化学成分及药理活性研究进
展［J］．天然产物研究与开发，2007(19):517 －523．
［6］邓芳叶，王国才，王春华，等．理肺散化学成分研究［J］．中草药，2012
(5):38 －42．
［7］方敏，占才贵，宫智勇．玉米须总黄酮的提取与抗氧化活性研究［J］．食
品科学，2009，30(18):206 － 208．
［8］南江，王星，黄伟敏，等．超声辅助提取野菊花黄色素及其稳定性研究
［J］．食品与发酵工业，2011，37(4):243 －246．
［9］景小楠，钟菡，张宏，等．黑骨藤中总黄酮含量的测定［J］．四川师范大
学学报:自然科学版，2010，33(1):89 －92．
［10］李艳提，赵金凤，张卫明，等．罗布麻茶总黄酮含量测定方法研究［J］．
食品科技，2010，35(6):274 －278．
［11］何书美，刘敬兰．芹菜中黄酮类物质的提取和测定［J］．分析试验室，
2006，25(8):84 －87．
［12］蔡定建，柳茶花，钟鸿鸣，等．野菊花中黄酮类物质的提取和鉴定［J］．
中国食品添加剂，2010(2):143 －147．
［13］张桂兰．茶藨子中总黄酮的测定［J］．食品科学，2007，28(11):506 －
508．
［14］甄会贤，李平，张虹，等．白英中总黄酮的含量测定［J］．中华中医药学
刊，2008，26(10):2231 －2233．
［15］熊春华，姚彩萍．浙产菊米中总黄酮的含量测定［J］．食品科技，2008
(5):213 －215．
［16］左爱华，韦群辉，曾元儿，等．紫外可见分光光度法测定青刺尖总黄酮
含量［J］．云南中医中药杂志，2008，29(6):43 －45．
［17］张岭苓，李楠，徐凌川，等．不同炮制方法的杜梨叶中总黄酮含量测定
［J］．食品科技，2011，35(10):269 －271．
［18］陈丽芬，黄琼，林翠梧，等．紫外分光光度法测定战骨中总黄酮的含量
［J］．广西轻工业，2008(1):27，24．
［19］SHI Y D，YUAN T J，JIA L，et al． Comparison of Total Flavonoids in Erig-
eron breviscapus(Vant．)Hand Mazz． from Different Habitats［J］． Medici-
nal Plant，2011，2(1):37 －39．
［20］刘珊珊，马先梅，杨红兵．分光光度法测定角果藜中总黄酮含量［J］．
安徽农业科学，2011，39(29):17865 －17866．
6401 安徽农业科学 2013 年