全 文 ：药物化学
黄毛耳草化学成分的研究
彭江南　冯孝章1　梁晓天1
①
(军事医学科学院放射医学研究所 ,北京 100850)
　　摘要　目的:研究黄毛耳草抗癌活性成分。方法:用硅胶 、聚酰胺 、Sephadex LH-20 等层析方法分离化合物 , 用
光谱和化学方法鉴定结构。结果:鉴定了 23 个化合物 ,其中 5 个新化合物;黄毛耳草碱具有较强的细胞毒活性。
结论:黄毛耳草中主要含有环烯醚萜甙 、黄酮 、香豆素 、木脂素 、生物碱等成分 ,其中生物碱是抗癌活性成分。
关键词:黄毛耳草;抗癌活性
CHEM ICAL S TUDIES ON HEDIOTIS CHRYSOT RICHA
Peng Jiangnan , Feng Xiaozhang , Liang Xiao tian
(Beijing Inst itute of Radiation Medicine ,100850)
ABSTRACT OBJECTIVE:Studies on the bioactive constituents f rom Hedio tis chrysot richa.
METHOD:Isolat ion by chromatog raphy on silica gel , polyamide , Sephadex LH-20 etc and identifica-
tio n by means of spect roscopic and chemical methods.RESULTS:23 compounds were isolated and iden-
tified including five new compounds.Chrysot ricine reveals strong cy totoxic ef fect.CONCLUSION:He-
doitis chrysot richa contained iridoid glycosides , flavonoid , cumarin , lig nan and alkaloid.The alkaloid is
the cyto toxic effective conti tuent of this herb.
KEYWORDS　Hediot is chry so tricha;Cy toto xic effect
　　茜草科耳草属植物在我国有 50 多种 ,其中 20
多种药用 ,大多为清热解毒类中药 ,用于治疗感冒 ,
多种炎症及癌症[ 1] 。我们对该属黄毛耳草的化学
成分进行了研究 ,从中共分离鉴定了 23个化合物的
结构 , 其 中 5 个 新 化 合 物 为 黄 毛 耳 草 碱
(chrysot ricine , 1),耳草甙(hedyoside , 2), 车叶草酸
乙酯(asperulosidic acid ethyl ester , 3), 6 -乙酰去乙
酰车叶草甙(6 -acety l deacety lasperuloside , 4), 6 -
乙酰车叶草甙(6 -acetyl asperuloside , 5)。6β-羟基
京尼平(6β-hydroxy-genipin , 6)为首次从天然界发
现 ,其余化合物鉴定为车叶草甙(asperuloside , 7),鸡
屎藤甙甲酯(scandoside methy l ester ,8), 车叶草酸
(asperulosidic acid ,9), 去乙酰车叶草酸(deacetyl as-
perulosidic acid , 10), 马钱子素(log anin , 11), 去乙
酰车叶草甙(deacetyl asperuloside ,12), 乙酰鸡屎藤
甙甲酯(acety l scandoside methyl ester , 13),咖啡酸
(caf feic acid , 14),东莨菪内酯(csopoletin , 15), 2 , 6-
二甲氧基对苯醌(2 , 6-dimethoxy l-1 ,4-benzoquinone ,
16),七叶内酯(aesculetin ,17),异落叶松树酯醇(iso-
larisiresinol , 18), β-谷甾醇(β-sitosterol , 19),胡萝卜
甙(daucosterol , 20),异鼠李素-3-芸香糖甙(nico ti-
florin , 21),芦丁(rutin , 22),水仙甙(narcissin , 23),
除 7 , 15 ,19外均为首次从该植物中得到。
黄毛耳草碱为新型 β-carboline 类生物碱 ,其结
构最终经 X-射线衍射确定。黄毛耳草碱在不同溶
剂中的1H , 13 C NMR数据有显著差异 ,我们推断它
有图 1所示的互变异构体。体外实验显示黄毛耳草
碱有较强的细胞毒活性 , 在 10 μmol/L 浓度下对
HL-60细胞抑制率为 63%。
1　仪器试剂
熔点用 Boetius显微熔点测定仪测定 ,温度未校
正 ,红外光谱用 Perkin-Elmer 683 型红外光谱仪测
定 , 紫外用 Shimadzu UV-240 型紫外光谱仪测定 ,
质谱用 JMS-DX 300 型质谱仪测定 ,核磁用 Bruker
AM-500核磁共振仪测定。大孔树脂 GDX-104 型
为天津试剂二厂产品;Sephadex LH-20为 Pharmacia
进口分装 ,柱层析及薄层层析硅胶为青岛海洋化工
厂产品 ,其余溶剂试剂均为分析纯。
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　Chinese New Drugs Jou rnal 1999 , Vol.8 No.11 中国新药杂志 1999年第 8卷第 11期　
① 1　中国医学科学院协和医科大学药物研究所
图 1　互变异构体结构
2　提取分离
将黄毛耳草 38 kg 切碎 ,用 95%EtOH 回流提
取 2次 ,提取物用 10L 水溶解 ,除去黑绿色不溶物 ,
滤取底层的黄色沉淀为 HC3部分;水液用 Et2O 萃
取得乙醚提取物 HC4部分;水液挥去 Et2O后 ,通过
大孔树脂柱 , 水洗液弃去 , 25%EtOH 洗脱部分为
HC1 , 95%EtOH 洗脱部分为 HC2。取 HC1 部分
35g , 先以 450g 硅胶行减压柱层析 , CHCl3-MeOH
(99∶5 ～ 70∶30)梯度洗脱得到 fr1 ～ f r6 。各组份再
通过 Sephadex LH-20 和 PTLC 等层析得到化合物
2 , 3 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14。将 HC2部分
180g 拌硅藻土 150g ,并以 250g 硅藻土短柱层析 ,
CHCl3-MeOH (96∶4)洗脱 ,得洗脱物 35g ,此部分用
250g 硅胶行 VLC , CHCl3-MeOH 梯度洗脱得 4 个
流分 ,再用硅胶 、聚酰胺 、反相柱层析得化合物1 , 4 ,
5 , 15 , 16 , 17 , 18 。HC3部分 500 mg ,以聚酰胺柱
层析 , CHCl3-MeOH(85∶15)洗脱 ,得化合物 21 , 22 ,
23。HC4 用硅胶柱层析分离 , CHCl3 及 CHCl3-
MeOH 梯度洗脱 ,CHCl3-MeOH (98∶2)洗脱得到化
合物 19 ,CHCl3-MeOH(85∶15)洗脱得到化合物 20。
3　结构鉴定
化合物 1　黄色柱晶(丙酮), mp 160 ～ 161o ,
[ α] D 26(MeOH , 0.05)紫外灯下呈强烈的亮蓝色荧
光 ,UVλmax(nm):255 ,309 , 376 。IRv(KBr)cm-1:
2990 ,1624 , 1600 , 1450 ,1340 ,1277 ,1155 , 1050 , 748 ,
762。元素分析:测定值 C 74.53 ,H 7.70 ,N 8.32 ,
由此推断分子式为 C21H26N2O2 ,理论值 C 74.56 , H
7.69 , N 8.28。EIM S m/ z (%):338(4 , M +), 320
(4),279(11),249(3), 237(37), 221(10), 196(100),
195(10),181(5), 154(6), 143(2), 85(5), 71(12)。
HRMS:338.1990 (C21H26N2O2 , ■=-0.4mmu),
196.1003 (C13H12N2 , ■=+0.3mmu), 181.0762
(C12H9N2 , ■=-0.4mmu)。1H NMR δ(CD3OD)
ppm:7.82(d , 64 H5), 8.13(d , 6 , 4H6), 8.18(dt ,
1.2 ,8.1 ,H9),7.14(ddd , 1.0 ,6.8 ,8.1 , H10),7.52
(ddd ,1.2 ,6.8 ,8.5 ,H11),7.79(dt , 1.0 ,8.5 ,H12),
3.78(br ,H14), 2.19(m ,H16), 1.96(mH16), 1.72
(m ,H17),1.47(m ,H17), 3.20(brs , H18), 4.44(s ,
H20),1.38(s ,3H ,H21),1.12(s , 3H ,H22), 1.07(s ,
3H ,H23)。13C NMR δ(CD3OD)ppm:143.4(C2),
157.5(C3), 128.2(C5), 115.1(C6), 132.4(C7),
132.4(C8),123.0(C9), 118.9(C10), 129.5(C11),
118.8(C12),147.0(C13), 86.4(C14),86.3(C15),
38.3(C16), 27.2(C17), 88.3(C18), 71.7(C19),
45.6(C20),29.1(C21), 26.2(C22),25.4(C23)。
X-射线衍射:结晶属三斜晶系 ,空间群为 P1 ,晶
胞参数 a=7.782(4), b=8.127(3), c=8.441(4)
A ,α=99.89(3),β=101.63(4), γ=116.0493 ,晶胞
体积 V=448.8(3)A3 , 晶胞内分子数 Z=1 ,晶体密
度 Dx =1.252(mg·mm-3)。用 R3m/E四元衍射仪
收集数据 , MoKα辐射 ,石墨单色器 , ω/2θ扫描 , 2θ
范围 2 ～ 48o。独立衍射点 1 370个 ,可观察点 1 320
个 。用直接法(shelx s-86)解析分子结构 ,从 E 图上
获得 25个非氢原子位置 ,经最小二乘法修正结构参
数 ,最终可靠因子 Rf=0.035 , Rw =0.035。
化合物 2 　白色粉末 , [ α] D-26(C 0.049 ,
MeOH)。茴香醛-硫酸试剂显蓝色。酸水解薄层检
识[ 2] ,所含糖为葡萄糖 。FAB-MS m/z(%):447
(67 , M +H),469(15 ,M +Na),539(M +gly cerol+
H), 285(35 , ag lycone +H), 267(12 , aglycone -
OH), 227[ 83 , 285-OC(CH3)2] , 209(100 , 227-
H2O)。1HNMR , 13CNMR见表 1 ,2。
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　Chinese New Drugs Jou rnal 1999 , Vol.8 No.11 中国新药杂志 1999年第 8卷第 11期　
表 1　化合物 2 , 3 , 4 , 5的氢谱数据(1HNMR)
No. 化合物
2 3 4 5
1 5.29(d , 5.5) 5.03(d , 9.0) 5.73(d , 2.0) 5.75(brs)
3 7.49(d ,1.1) 7.75(d , 1.0) 7.25(d , 2.0) 7.26(d , 1.8)
5 3.18(q ,8.4) 3.18(brt , 6.1) 3.54(m) 3.55(td , 1.7 , 6.7)
6 2.23(dd , 7.5 , 14.5) 4.88(m) 5.54(m) 5.55(brd , 6.6)
1.64(ddd ,4.5 , 8.8 , 14.5)
7 4.50(m) 6.13(br) 5.56(m) 5.68(brs)
8 1.99(m)
9 2.47(m) 2.78(t , 8.2) 3.21(m) 3.24(brd , 6.7)
10 4.25(dd , 4.2 , 12.5) 4.96(d , 14.7) 4.08(br , 2H) 4.67(brd , 13.9)
3.83(dd , 2.1 , 12.5) 4.90(d , 14.7) 4.55(brd , 13.9)
10-AcO 2.18(s , 3H) 1.99(s, 3H)
Me2CO2 1.51(s , 3H)
1.38(s , 3H)
CH2 4.25(q , 7.2)
CH3 1.32(t , 7.2)
1 4.80(d , 8.1) 4.87(d , 9.0) 4.73(d , 9.1) 4.74(d , 8.0)
2 3.31(dd , 8.1 , 9.2) 3.15(t , 8.5) 3.17(dd , 8.0 , 8.2)
3 3.50(t , 9.2) 3.36 ～ 3.53(m ,4H) 3.36(m)
4 3.39(t , 9.0) 3.36～ 3.56(m , 3H) 3.36(m)
5 3.47(ddd , 2.2 ,5.9 ,9.0) 3.58(m)
6 3.91(dd , 2.1 , 12.4) 3.90(dd ,1.7 ,12.4) 4.29(dd ,2.1 ,12.3) 4.30(dd , 2.0 , 12.3)
3.71(dd , 2.1 , 12.4) 3.71(dd ,6.0 ,12.4) 4.17(dd ,5.0 ,12.3) 4.18(dd , 5.0 , 12.3)
6 -AcO 1.99(s ,3H) 1.96(s, 3H)
　　　　在 500MHz下测定 ,溶剂为 D2O ,内标为 TSP
表 2　化合物 2 , 3 , 4 , 5的碳谱数据(13CNMR)
No. 化 合物
2 3 4 5
1 100.2 103.9 95.7 95.6
3 154.5 157.8 152.6 152.6
4 115.2 110.0 107.6 107.4
5 34.1 43.2 38.6 38.6
6 42.4 76.7 89.4 89.0
7 74.7 134.2 127.6 130.9
8 42.4 146.9 149.9 144.8
9 43.6 47.6 45.9 46.2
10 63.6 66.0 61.3 64.2
11 172.9 172.4 176.5 176.0
10-AcO 177.0 22.9
10-AcO 23.3 176.7
CH 2 64.4
CH 3 16.4
M e2CO2 101.9
30.8
21.9
1 101.8 102.0 101.3 101.4
2 75.6 75.9 75.2 75.2
3 78.6 79.2 78.0 78.0
4 72.5 72.6 72.1 72.1
5 79.2 78.4 76.5 76.5
6 62.6 63.9 65.8 65.6
6 -AcO 176.8 176.4
6 -AcO 22.9 22.9
　　　　在 125MHz下测定 ,溶剂为 D2O ,内标为 TSP
　　化合物 3　白色粉末 , [ α] 25D-25.0 (C 0.06 ,
MeOH)。茴香醛-硫酸试剂显蓝色 。酸水解薄层检
识 ,所含糖为葡萄糖 。UV (MeOH)λmax 234 nm 。
IR (KBr)Vmax 3427 , 1727 , 1709 , 1633 , 1267 ,
1078 cm-1 ,FABMS m/ z 921 [ 2M +H] + ,443 [ M +
H -H2O ] + , 281[ M -g lucosy l-OH] +。1HNMR ,
13　C NMR见表1 ,2。
化合物 4　白色粉末 , [ α] 25D-156.6 (C 0.06 ,
MeOH)。茴香醛-硫酸试剂显蓝色。酸水解薄层检
识 ,所含糖为葡萄糖。UV(MeOH)λmax 233 nm , IR
(KBr)Vmax 3446 , 1742 ,1658 , 1246 , 1018 cm-1 ,
FABMS m/ z 507[ M +glycerol] + , 415[ M +H] + ,
210[ ag ly cone] + , 205[ 100 , 6 -AcO-glc] +。1HNMR ,
13　C NMR 见表 1 , 2。
化合物 5 　白色粉末 , [ α] D -156(C 0.06 ,
MeOH)。茴香醛-硫酸试剂显蓝色。酸水解薄层检
识 ,所含糖为葡萄糖 。UVλmax (EtOH):233nm , IR
(KBr)cm-1:3446 , 1742 , 1658 , 1246 , 1018 ,FAB-
MS m/ z(100):457(100 , M +H), 549(15 , M +
glycerol+H), 253(45 , aglycone +H), 235(34 ,
ag ly cone-OH), 205(55 ,6-AcO-glu),193(60 , ag ly-
cone-COOCH3)。1HNMR , 13CNMR见表 1 ,2。
致谢:光谱由本所仪器分析室测定 , 原药材由安徽芜湖
中医学校刘晓龙教授采集鉴定。
参 考 文 献
1　中国医学科学院药物研究所等编.新华本草纲要.第 2卷.上海:
上海科技出版社 , 1991.442
2　赵萍萍 , 李宝明 , 何丽一.甙中结合糖的薄层鉴定.药学学报 ,
1987 , 22(1)∶70
(收稿:1999-09-15　修回:1999-11-08)
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　Chinese New Drugs Jou rnal 1999 , Vol.8 No.11 中国新药杂志 1999年第 8卷第 11期