全 文 ：第 33 卷 第 10 期
2 0 1 5年 1 0 月
中 华 中 医 药 学 刊
CHINESE AＲCHIVES OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol． 33 No． 10
Doc． 2 0 1 5
中
华
中
医
药
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学
刊
DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2015． 10． 050
佛耳草药材质量标准研究
毛颐晴，曹玉，王贞媛，蒋健，张庆
(南京市食品药品监督检验院，江苏 南京 210038)
摘 要:目的:建立佛耳草的质量控制方法，为江苏省中药材标准佛耳草质量修订提供依据。方法:采用性
状、显微鉴别、薄层色谱鉴别、水分测定、浸出物测定及含量测定对佛耳草进行质量评价。采用 HPLC法测定佛耳
草中槲皮素和木犀草素的含量。色谱柱为 Diamonsil C18 柱(4． 6 mm × 200 mm，5 μm) ;流动相:甲醇 － 0． 4%磷酸
溶液(42 ∶ 58) ;检测波长为 360 nm。结果:显微鉴别特征性强;薄层色谱斑点清晰，分离度好。含量测定中槲皮素
在 0． 041 03 ～ 0． 820 6 μg、木犀草素在 0． 041 76 ～ 0． 835 2 μg范围内与峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收
率分别为 98． 3%、98． 9%，ＲSD分别为 1． 2%、1． 5%。结论:该法简便，准确、重复性好，各成分分离良好，可用于控
制佛耳草的质量。
关键词:高效液相色谱法;佛耳草;槲皮素;木犀草素;质量标准
中图分类号:Ｒ286． 0 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2015)10-2468-05
Quality Standard for Herba Laphangium Affinis
MAO Yiqing，CAO Yu，WANG Zhenyuan，JIANG Jian，ZHANG Qing
(Nanjing Institute for Food and Drug Control，Nanjing 210038，Jiangsu，China)
Abstract:Objective:To establish the quality standard for Herba laphangium Affinis． Method:By using characters，mi-
croscopic identification，TLC and the determination of water and extractives，we evaluated the quality of Herba laphangium
Affinis． The contents of quercetin and luteolin were determined by HPLC． The analysis was carried out on a Diamonsil
C18 column (4． 6 mm × 200 mm，5 μm)with metharol － 0． 2% phosphoric acid (42 ∶ 58)as mobile phase． The flow
rate was 1． 0 mL·min －1 and the detection wavelength was 360 nm． Ｒesult:The characteristic microscopic view was spe-
cific． TLC spots were clear and the HPLC method was sensitive． The formulated standard curves were linear over the
range of 0． 041 03 － 0． 820 6 μg for quercetin and 0． 041 76 ～ 0． 835 2 μg for luteolin． The average recoveries were 98．
3% and 98． 9% respectively and the respective ＲSD values were 1． 2% and 1． 5% ． Conclusion:The method is simple and
accurate with good repeatability and can be used for the quality control of Herba laphangium Affinis．
Key words:HPLC;Herba laphangium Affinis;quercetin;luteolin;quality standard
收稿日期:2015 － 05 － 02
作者简介:毛颐晴(1974 －) ，女，浙江湖州人，副主任中药师，研究
方向:中药材及中成药的质量分析。
佛耳草 Laphangium affine (D． Don)Tzvelev 为菊科鼠
曲草属植物，全草入药，又名鼠曲草、黄花菊草等，主产于江
苏、浙江、上海等地，性味甘、平，具有祛痰，止咳，平喘，祛风
湿之功效。现代研究表明佛耳草全草含 5% 黄酮苷，
0． 05%挥发油，微量生物碱和甾醇等成分，花含木犀草素 －
4 － β －葡萄糖苷［1 － 2］。佛耳草药材标准收载于《中华人民
共和国药典》1977 年版(称鼠曲草)、《江苏省中药材标准》
1989 年版，其药材标准中仅有性状、理化鉴别项［3 － 4］，佛耳
草中槲皮素等黄酮类化合物具有抗氧化、抗炎、抑菌作
用，［3 － 6］为佛耳草的活性成分，可作为控制质量的指标。本
文收集了 10 批不同来源的佛耳草，以槲皮素和木犀草素为
对照品，对佛耳草进行薄层色谱鉴别，采用 HPLC法测定其
含量，并对佛耳草药材进行了性状、显微鉴别、水分、灰分、
酸不溶性灰分、农残、重金属、浸出物测定的质量标准研究，
为佛耳草的质量评价提供一定的科学依据。
1 仪器与试药
Olympus DP － 12 显微数码摄影系统，CAMAG 薄层色
谱系统，SHIMADZU LC － 20AB 高效液相色谱仪;Diamon-
sil，C18(200 mm ×4． 6 mm，5 μm)色谱柱;KQ － 250B 超声
波清洗仪(昆山超声仪器有限公司) ;HH － 4 数显恒温水浴
锅(国华电器有限公司) ;XS205 型天平(Mettler ToleDo 公
司)
槲皮素对照品(批号 100081 － 200907，含量 96． 5%，使
用前不需干燥)、木犀草素对照品(批号 111520 － 200504，
使用前置五氧化二磷干燥器减压干燥 12 h以上)均购自中
国食品药品检定研究院;甲醇为色谱纯，购于美国 Fisher公
司，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。
佛耳草药材分别购自安徽亳州永刚中药饮片厂，南京
中药饮片有限公司等。药材经江苏省中药材标准修订专家
组鉴定为佛耳草。
2 方法与结果
2． 1 性状
根据综合 10 批佛耳草样品的性状确定:本品密被灰白
色绵毛。根较细，灰棕色。茎常自基部分枝成丛，长 15 ～
30 cm，直径 0． 1 ～ 0． 2 cm。基生叶已脱落;茎生叶互生，无
柄，叶片皱缩，展平后呈条状匙形或倒披针形，长 2 ～ 6 cm，
宽 4 ～ 12 mm，全缘，两面均密被灰白色绵毛。头状花序多
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数，金黄色或棕黄色。气微，味微甘。以身干、色灰白、叶
多、带花者为佳。见ⅩⅩⅣ图 1。
2． 2 显微鉴别
2． 2． 1 茎横切面鉴别 表面非腺毛众多，呈细线状，常扭
曲交织成团。表皮细胞 1 列，呈长方形，排列紧密，壁增厚。
皮层细胞 4 ～ 7 层，类方形或多角形。中柱鞘纤维断续排列
成环，20 ～ 28 个，常破碎成裂隙。韧皮部较小，为颓废细胞
组织;形成层明显，成环;木质部导管径向排列或散在，导管
直径往髓部渐小。髓部宽广，薄壁细胞呈圆形或多角形。
见ⅩⅩⅣ图 2。
2． 2． 2 粉末鉴别 叶表皮气孔不定式，3 ～ 5 个副卫细胞;
叶表皮密布非腺毛。单细胞非腺毛有两种，一种细长多弯
曲，直径 5 ～ 19 μm;另一种分枝状，长 517 ～ 940 μm，直径
23． 5 ～ 47 μm。多细胞非腺毛基部膨大;腺毛少见，头部多
细胞，柄单细胞。花粉粒类圆形，直径 10 ～ 20 μm，外壁有
齿状突起;茎表皮细胞长方形，壁呈连珠状增厚;茎表皮气
孔直轴式。导管多为螺纹和网纹导管。见ⅩⅩⅣ图 3。
2． 3 薄层色谱
取本品粉末 1 g，加甲醇 30 mL，超声处理 30 min，滤过，
滤液蒸干，残渣加甲醇 1 mL 使溶解，作为供试品溶液。另
取佛耳草对照药材 1 g，同法制成对照药材溶液。再取槲皮
素、木犀草素对照品，加甲醇制成每 1 mL各含 0． 1 mg的溶
液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药
典》2010 年版一部附录 VI B)实验，吸取对照品溶液各 1
μL，对照药材溶液和供试品溶液各 10 μL，分别点于同一硅
胶 G薄层板上，以甲苯—乙酸乙酯—甲酸(10 ∶ 4 ∶ 0． 5)为
展开剂，展开，取出，晾干，喷以 3%三氯化铝乙醇溶液，105
℃加热数分钟，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品色谱
中，在与对照药材和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色
的荧光斑点。
对不同薄层板(默克硅胶 G 板、青岛海洋硅胶 G 板) ，
不同点样量(5 μL、10 μL、20 μL)和不同温、湿度(t:5 ℃，
ＲH:50%;t:18 ℃，ＲH:50%;t:18 ℃，ＲH:75%，t:18 ℃，
ＲH:20%)进行了比较，优化了薄层色谱条件。结果表明，
选用默克硅胶 G 板，在室温条件下，按上述薄层色谱条件
实验，薄层层析斑点清晰、一致。见插页ⅩⅩⅤ图 4。
2． 4 检查
2． 4． 1 水分 按照《中华人民共和国药典》2010 年版一部
附录 IX H水分测定法第二法(甲苯法)依法测定样品 10
批，以平均测定值的 120%设限，不得过 8． 0%。
2． 4． 2 总灰分和酸不溶性灰分 由于本品密被灰白色绵
毛，野生于田埂、荒地、路旁，总灰分和酸不溶性灰分数据很
大，本项目未收入标准正文。
2． 4． 3 重金属及有害元素考察 按照《中华人民共和国药
典》2010 年版 1 部附录Ⅸ B 铅、铬、砷、汞、铜测定法测定，
结果所测样品中有 9 批镉含量在千万分之五至千万分之十
二之间，超出《中华人民共和国药典》对有关品种规定的限
度值(千万分之三) ，其它重金属含量均低于《中华人民共
和国药典》对有关品种规定的限度值。
2． 4． 4 有机氯农药残留考察 按照《中华人民共和国药
典》2010 年版一部附录Ⅸ Q 农药残留量测定法测定，结果
所测样品中均未检出六六六、滴滴涕和五氯硝基苯。
2． 4． 5 浸出物 按照《中华人民共和国药典》2010 年版一
部附录Ⅹ A浸出物测定法，分别采用不同浸出方法(冷浸
法、热浸法) ，不同浸出溶剂(水、稀乙醇、75%乙醇、乙醇)
进行比较。结果采用以 75%乙醇为溶剂，热浸法测定本品
浸出物。依法测定 10 批样品，以平均测定值的 80%设限，
拟定浸出物不得少于 12． 0%。
2． 5 含量测定
2． 5． 1 色谱条件 Diamonsil C18 柱(4． 6 mm × 200 mm，5
μm) ;流动相为甲醇 － 0． 4%磷酸溶液(42 ∶ 58) ，检测波长
为 360 nm;流速为 1． 0 mL·min －1。柱温:30 ℃。对照品
和样品色谱图见插页ⅩⅩⅤ图 5。
2． 5． 2 溶液的制备 (1)对照品溶液的制备:分别精密称
取槲皮素(10． 63mg)和木犀草素对照品(10． 78 mg) ，加甲
醇溶解制成每 1 mL含 0． 2 mg的对照品溶液作为对照品储
备液。精密吸取槲皮素和木犀草素对照品储备液各 2 mL
置于同一 50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。作为混
合对照品溶液。
(2)供试品溶液的制备:取本品粉末(过四号筛)约 0． 2
g，精密称定，精密加入甲醇 － 25%盐酸(4 ∶ 1)混合溶液 20
mL，称定重量，加热回流 30 min，放冷，再称定重量，用甲醇
－ 25%盐酸(4 ∶ 1)混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，
取续滤液，即得。
2． 5． 3 线性关系的考察 精密吸取槲皮素和木犀草素对
照品贮备液各 5 mL置于同一 25 mL量瓶中，加甲醇稀释至
刻度，摇匀。分别精密吸取 1． 0、2． 0、4． 0、6． 0、8． 0、10． 0、
20． 0 μL，注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品浓度
(10 －2μg)为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，槲皮
素回归方程为 y = 37 993． 31x － 1 833． 92，r = 0． 999 98，木犀
草素回归方程为 y = 38 293． 35x － 785． 03，r = 0． 999 97，结
果表明槲皮素对照品浓度在 0． 041 03 ～ 0． 820 6 μg范围内
呈现良好的线性关系，木犀草素对照品浓度在 0． 041 76 ～
0． 835 2 μg范围内呈现良好的线性关系。
2． 5． 4 精密度实验 日内精密度:以上述混合对照品溶
液每 3 h 1 次连续进样 6 次，每次 10 μL，槲皮素、木犀草素
峰面积积分值的 ＲSD分别为 0． 62%，0． 80%。
日间精密度:每天 1 次，以混合对照品溶液连续进样 5
d，每次 10 μL，槲皮素、木犀草素峰面积积分值分别为
0． 86%、1． 22%。
2． 5． 5 重复性实验 精密称取同批佛耳草药材粉末 6
份，每份 0． 2 g，按(2)项下方法制备供试品溶液，进样 10
μL，测定。样品中槲皮素和木犀草素合计含量平均值分别
为 0． 217%。ＲSD分别为 1． 0%。表明本方法重复性好。
2． 5． 6 稳定性实验 取“重复性实验”项下同一供试品溶
液，0、6、12、24、36、48 h连续进样 6 次，进样 10 μL，测定 48
h内的峰面积，计算 ＲSD 分别为 0． 83%、0． 70%。表明溶
液在 48 h内稳定。
2． 5． 7 加样回收率实验 取已知含量的同一批样品 0． 1
g，共 6 份，分别精密加入混合对照品溶液 5 mL，按(2)项下
制得供试品溶液，进样 10 μL，测定含量，计算加样回收率，
结果槲皮素的平均回收率 98． 3%，ＲSD = 1． 2%(n = 6)、木
犀草素的的平均回收率 98． 9%，ＲSD = 1． 5%(n = 6)。
2． 5． 8 检测限和定量限 槲皮素最低定量限为 0． 561 9
μg /mL、最低检测限为 0． 112 4 μg /mL，木犀草素最低定量
限为 0． 642 6 μg /mL，最低检测限为 0． 128 5 μg /mL。
2． 5． 9 样品测定 取 10 批次的佛耳草药材，以建立的方
法测定槲皮素和木犀草素的合计含量，结果分别为0． 217%、
0． 273%、0． 079%、0． 076%、0． 101%、0． 143%、0． 067%、
0. 069%、0． 041%、0． 054%。
3 讨论
本文对 10批佛耳草的质量进行了包括性状、显微、薄层
以及水分、灰分、安全性指标(重金属及有害元素、有机氯农
药残留)、浸出物、含量测定等项目的考察，在佛耳草原标准
的基础上，增订了佛耳草的显微鉴别、薄层色谱鉴别、水分、
浸出物检查项以及含量测定方法。结果表明提高后的标准
可操作性强、重复性好，可作为佛耳草的质量控制标准。
参考文献
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上海:上海科学技术出版社，1999:848．
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Vol． 33 No． 10
Doc． 2 0 1 5
中
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DOI:10． 13193 / j． issn． 1673-7717． 2015． 10． 051
丹参酮 IIA磺酸钠对阿霉素肾病大鼠肾损伤的干预机制研究
吕波1，2，杨茂波1，肖洪彬1
(1．黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150042;2．黑龙江省中医医院，黑龙江 哈尔滨 150036)
摘 要:目的:观察丹参酮 IIA磺酸钠对阿霉素肾病大鼠 24 h 尿蛋白定量，血浆黏度，病理组织形态、肾组织
PAI － 1、TGF － β1 的影响，并探讨其作用机理。方法:SD雄性大鼠随机分为空白组，模型组、阳性药对照组、丹参
酮ⅡA低剂量组、丹参酮ⅡA高剂量组。采用阿霉素尾静脉注射，复制阿霉素肾病模型。造模 3 周后各给药组分
别给予相应剂量药物腹腔注射。给药 2 周后检测 24 h 尿蛋白定量、全血黏度、血浆黏度、病理组组形态、肾组织
TGF － β1、PAI － 1 的含量表达。结果:丹参酮 IIA磺酸钠可以降低阿霉素肾病大鼠 24 h尿蛋白定量，降低血浆黏
度，肾组织 TGF － β1、PAI － 1 的表达明显增强，与模型对照组比较有显著性差异(P ＜ 0． 05)。结论:丹参酮 IIA磺
酸钠可降低阿霉素肾病降低 24 h尿蛋白定量、改善病理组织损伤、可能与抑制肾组织 TGF － β1、PAI － 1 的表达有
关。
关键词:丹参酮 IIA磺酸钠;阿霉素肾病;转化生长因子 － β1;大鼠
中图分类号:Ｒ285． 5 文献标志码:A 文章编号:1673-7717(2015)10-2470-04
Ｒesearch on Intervention Mechanism of Tanshinone Type IIA
Sulfonate of Adriamycin Nephrosis Ｒats Kidney Injury
LV Bo1，2，Yang Maobo2，XIAO Hongbin2
(1． Heilongjiang University of Chinese Medicine，Harbin 15004，Heilongjiang，China;
2． Heilongjiang Province Hospital of Traditional Chinese Medicine，Harbin 150042，Heilongjiang，China)
Abstract:Objective:To observe the effects of tanshinone type IIA sulfonate of adriamycin nephrosis rats quantitative
24 h urine protein，blood plasma viscosity，histopathologic morphology，kidney tissues TGF － 1 and PAI － 1 and to explore
its mechanism． Methods:SD male rats were randomly divided into blank group，model group，positive control group，tan-
shinone ⅡA low dose group，tanshinoneⅡA high dose group． Adriamycin nephrosis model was established by injection of
adriamycin the tail intravenous，3 weeks after injection，each dose group were given corresponding doses of intraperitoneal
injection of drugs． 2 weeks later，test the 24 hours urinary protein quantitative，pathological way form，kidney tissues TGF
－ 1 and PAI － 1 expressions． Ｒesults:Tanshinone type IIA sulfonate can reduce adriamycin nephrosis rats 24 hours urina-
ry protein quantitative，improve blood viscosity，kidney tissues PAI － 1and TGF － β1 expressions and compared with model
control group there was significant difference (P ＜ 0． 05)． Conclusion:Tanshinone type IIA sulfonate may be by reducing
the 24 h urine protein quantitative and improving pathological tissue damage and inhibiting kidney tissues TGFβ － 1 and
PAI － 1 to treat adriamycin nephropathy．
收稿日期:2015 － 05 － 15
作者简介:吕波(1982 －) ，男，主治医师，博士研究生，研究方向:中医肾病、方剂配伍规律研究。
通讯作者:肖洪彬(1957 －) ，男，教授，博士研究生导师，研究方向:中药药理研究。