全 文 ：[文章编号 ] 　1000-4718(2007)11-2268-02 ·短篇论著 ·
　[收稿日期 ] 2006-04-06　　　[修回日期 ] 2006-08-09
＊[基金项目 ] 广东省中医药局课题资助项目
■通讯作者 Tel:0759-2388331;E-mail:mqy1586@sina.com
粗江蓠多糖对大鼠淋巴细胞周期的影响＊
王亚飞 , 　孟庆勇■ , 　蔡康荣
(广东医学院分析中心 , 广东 湛江 524023)
　　[摘　要 ] 　目的:研究粗江蓠多糖(GHPS)对正常大鼠胸腺和脾淋巴细胞周期的影响。方法:采用体外培养
淋巴细胞的方法 , 通过流式细胞术 , 研究不同浓度的 GHPS(1.0、 3.0、 6.0 g/L)对大鼠淋巴细胞周期的调节作用。
结果:1.0、3.0、6.0 g/L的 GHPS能降低 G0 /G1期和 G2 /M期胸腺细胞百分率 , 增加 S期胸腺细胞百分率;1.0、3.0、
6.0g/L的 GHPS可以增加 G0 /G1期脾细胞百分率 ,减少 S期和 G2 /M期脾细胞百分率。结论:一定浓度的 GHPS
可以促进胸腺细胞增殖 ,抑制脾细胞的增殖。
[关键词 ] 　粗江蓠多糖;淋巴细胞;细胞周期
　　[ KEYWORDS] 　GracilariaGigasHarveypolysaccharides;Lymphocytes;Cellcycle
　　[中图分类号 ] 　R818　　　[文献标识码 ] 　A
　　随着天然药物的开发 ,越来越多的研究转向丰富的海藻
资源。海藻中含丰富的多糖 , 具有抗辐射 、抗肿瘤 、抗感染 、
抗凝血和延缓衰老等生理活性 [ 1-3] 。大量研究表明海藻多糖
是通过调节机体免疫系统功能发挥上述作用的。 为寻找天
然低毒高效的免疫调节剂 ,本研究探讨粗江蓠多糖对正常 SD
大鼠胸腺细胞和脾细胞周期的影响。
材　料　和　方　法
1　材料
1.1　动物　SD大鼠 , 8-10周龄 , 广东医学院实验动物中心
提供。
1.2　试剂　生理盐水 , RPMI-1640培养基(Gibco), 小牛血
清(杭州四季青公司), PI(propidiumiodide, 碘化丙啶 , Sig-
ma),粗江蓠(购于湛江市新台兴海洋生物制品有限公司)。
1.3　仪器　Epics-XL型流式细胞仪(Coulter), SW-CJ-
1D型净化工作台(苏州净化设备厂), TC2323型 CO2培养箱
(SHELLAB), 台式离心机(上海安亭科学仪器厂)。
2　方法
2.1　多糖的提取　粗江蓠多糖(GHPS)为本室提取:粗江蓠
洗净 、干燥粉碎 ,经热水浸提 , 乙醇沉淀 , Sevag法去蛋白 ,乙醇
和有机溶剂多次洗涤 , 真空干燥为灰白色粉末。用生理盐水
配制成 10%的多糖原液 , 10磅 10 min高压消毒 。用 RPMI-
1640培养液配制成 1.0、 3.0、6.0 g/L终浓度的多糖溶液。
2.2　单细胞悬液的制备　将大鼠颈椎脱位处死后 , 置 70%
乙醇中浸泡 5 min, 无菌取出脾脏和胸腺置于平皿中 , 除掉结
缔组织 , 用生理盐水清洗 3次。加入 2 mLRPMI-1640完全
培养液 , 用剪刀分别将脾和胸腺剪成 1 mm×1 mm×1 mm碎
块后 , 用毛玻片轻柔研磨组织碎片 , 经 8层纱布过滤制成单细
胞悬液 , 经 Hanks液离心洗涤后 , 将细胞悬浮于含 10%小牛
血清的 RPMI-1640培养液。台盼蓝染色 , 计数活细胞在
95%以上 , 调整细胞数至 5×1010cels/L。
2.3　脾细胞和胸腺细胞周期的测定　取 6孔培养板每孔加
入配好的 5×1010cels/L细胞悬液 1 mL, 分别加入 1.0、3.0、
6.0g/L的多糖溶液 1 mL, 3复孔培养。空白对照孔加 1 mL
RPMI-1640培养液。轻轻混匀 , 置 37 ℃、 5%CO2培养箱中
培养 48h。 1 000 r· min-1 , 离心 15 min收集细胞 , 分别加
70%冰乙醇 3 mL固定细胞 , 4℃保存备用。
　　将 70%冰乙醇固定的单细胞悬液以 1 000r· min-1 , 离
心 10min,弃乙醇 , 用生理盐水洗 2次后 , 弃上清 ,加 1 mLPI
(含 0.1%RNase)染液混匀 , 避光放置 15 min, 400目尼龙网
过滤后 , 用流式细胞仪检测细胞周期。
3　统计学处理
用 SAS8.0软件进行单因素方差分析 , 组间差异的显著
性检验用 q检验 ,多个样本均数与对照组样本均数之间的比
较用 t检验 。
结　　果
1　GHPS对正常大鼠胸腺细胞周期的影响
从表 1中可以看出 1.0、3.0、6.0 g/LGHPS作用于正常
大鼠胸腺细胞 48h后 , B、C组 G
0
/G
1
期胸腺细胞明显低于 A
组(P<0.01), D组 G
0
/G
1
期细胞百分率与 A组相比虽有减
少 , 但无统计学差异(P>0.05);B、C、D组 S期细胞百分率明
显高于 A组(P<0.01);B、C、D组 G
2
/M期细胞百分数明显
低于 A组(P<0.01)。
·2268· 中国病理生理杂志　ChineseJournalofPathophysiology　2007, 23(11):2268-2269
2　GHPS对正常大鼠脾细胞周期的影响
从表 2可以看出 1.0、 3.0、 6.0 g/LGHPS作用于正常大
鼠脾细胞 48h后 , B组与 A组相比 G
0
/G
1
期脾细胞百分率无
统计学差异(P>0.05), C、D组 G
0
/G
1
期脾细胞百分率多于
A组(P<0.01);B、C组与 A组相比 S期脾细胞百分率变化
不大 , 无统计学差异(P>0.05), D组 S期脾细胞百分率少于
A组(P<0.01);B、C、D组与 A组相比 G2 /M期脾细胞百分
率明显减少(P<0.01)。
表 1　GHPS对正常大鼠胸腺细胞周期的影响
Tab1　EffectofGHPSonprogressionofcelcycleinthethymo-
cytesofrats( x±s.n=3)
Group GHPS(g/L)
Thymocytes
G0 /G1(%) S(%) G2 /M(%)
A 0.0 81.80±2.76 9.30±1.90 9.60±0.90
B 1.0 57.00±3.48＊＊ 39.80±2.33＊＊ 3.20±0.61＊＊
C 3.0 63.20±3.80＊＊ 33.60±1.20＊＊ 3.30±0.75＊＊
D 6.0 76.80±1.10 21.90±1.91＊＊ 1.30±0.44＊＊
　＊＊P<0.01vsgroupA.
表 2　GHPS对正常大鼠脾细胞周期的影响
Tab2　EffectofGHPSonprogressionofcelcycleinthespleno-
cytesofrats( x±s.n=3)
Group GHPS(g/L)
Splenocytes
G0 /G1(%) S(%) G2 /M(%)
A 0.0 76.60±1.39 16.80±0.95 6.60±0.96
B 1.0 79.00±3.72 16.50±0.61 4.20±0.30＊＊
C 3.0 82.40±1.37＊＊ 16.00±0.36 1.70±0.26＊＊
D 6.0 85.80±1.64＊＊ 14.20±0.70＊＊ 0.10±0.10＊＊
　＊＊P<0.01vsgroupA.
讨　　论
目前肿瘤的治疗除手术外 , 放疗是主要的治疗手段。但
放疗缺乏特异性 , 在杀死肿瘤细胞的同时 , 也损伤正常细胞 ,
特别是对免疫系统和造血组织的损伤尤为严重。 放疗引起
免疫系统和造血组织的抑制将会导致机体出现感染 、出血等
并发症 , 加重病情的恶化 , 这往往是肿瘤治疗失败的主要原
因。因此 , 寻找增强机体免疫力药物的研究越来越多。
许多研究表明海藻多糖是一种免疫调节剂 , 可以提高免
疫功能低下小鼠的 T细胞数 , 促进其 T、B淋巴细胞增殖 , 还
可以调节大鼠红细胞免疫功能并减轻自由基损伤。孟庆勇
等 [ 4]研究表明马尾藻多糖可以促进辐射损伤小鼠脾淋巴细
胞 CD4+分子的表达。这些研究表明海藻多糖可以通过多个
水平和多种途径调节机体免疫功能。本研究表明粗江蓠多
糖在没有其它物质介导时能增加正常大鼠胸腺 S期细胞数
量 , 表现于 B、C、D组胸腺 S期细胞比 A组明显增加(P<
0.01), 说明粗江蓠多糖能直接诱导胸腺细胞 DNA的合成 ,促
进未成熟淋巴细胞发育成熟。曾群力等 [ 5]发现肉苁蓉多糖
可以刺激体外胸腺细胞增殖 , 使分裂期细胞增加 , 与本实验
结果一致。由表 1可以看出 D组大鼠胸腺细胞 S期细胞数
量明显低于 B、C组 , 说明 6.0g/L粗江蓠多糖促进胸腺细胞
的增殖作用小于 1.0和 3.0g/L多糖 ,提示GHPS促进胸腺细
胞增殖的最适浓度在 1-3 g/L之间。从表 2可以看出 C、D
组大鼠脾细胞 G0 /G1期细胞百分率明显高于 A组 ,说明大鼠
脾细胞发生 G0 /G1期阻滞。 D组大鼠脾细胞 S期细胞百分率
明显低于 A组 , 一方面说明 6 g/L粗江蓠多糖对脾细胞 DNA
合成有抑制作用 , 另一方面也可能是 G0 /G1期阻滞所致。 B、
C、D组大鼠脾细胞 G2 /M期细胞明显低于 A组 , 说明粗江蓠
多糖对大鼠脾 G2 /M期细胞增殖有抑制作用 , 这也可能是源
于 G0 /G1期细胞阻滞引起的后续细胞减少 , 表明 GHPS可以
抑制脾淋巴细胞增殖。本研究结果表明粗江蓠多糖的免疫
调节作用与细胞周期有关 , 但其调节机制还有待于深入
研究。
[参　考　文　献 ]
[ 1] 　DiasPF, SiqueiraJMJr, VendruscoloLF, etal.Antian-
giogenicandantitumoralpropertiesofapolysaccharideiso-
latedfromtheseaweedSargassumstenophylum[ J] .Canc-
erChemotherPharmacol, 2005, 56(4):436-446.
[ 2] 　DamonteEB, MatulewiczMC, CerezoAS.Sulfatedsea-
weedpolysaccharidesasantiviralagents[ J] .CurrMed
Chem, 2004, 11(18):2399-2419.
[ 3] 　孟庆勇 , 刘志辉 , 徐美奕 , 等.半叶马尾藻多糖对
[ 60Co] γ射线损伤小鼠骨髓细胞的影响 [ J] .中国病理
生理杂志 , 2006, 22(9):1850-1851, 1870.
[ 4] 　孟庆勇 , 刘志辉 , 徐美奕.半叶马尾藻多糖对辐射损
伤小鼠脾细胞的影响 [ J] .核技术 , 2005, 28(7):543
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[ 5] 　曾群力 , 郑一凡 , 吕志良.肉苁蓉多糖的免疫活性作
用及机制 [ J] .浙江大学学报(医学版), 2002, 31(4):
284-287.
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