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收稿日期：2012-06-10
百香果中绿原酸含量的高效液
相色谱法测定
丘秀珍，郭会时*，王少玲，何慕贞
（韶关学院化学与环境工程学院，广东韶关 512005）
摘 要：建立一种快速测定百香果中绿原酸含量的方法。百香果果肉用微波辅助提取后，采用高效液相色谱法
（HPLC）测定。色谱条件为：Eclipse XDB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm）；流动相：A相为水+1 %乙酸，B相为乙腈，
采用梯度洗脱，最佳流速 0.8 mL/min，检测波长 320 nm，柱温 40 ℃，进样量 10 μL。结果表明，绿原酸线性范围为
19.80 mg/L~99.60 mg/L（R2=0.999 7），平均加标回收率为 97.68 %（n=5），绿原酸平均含量为 20.53 mg/g。该方法快速、准
确，溶剂用量少，为快速测定百香果中的绿原酸提供参考。
关键词：百香果；绿原酸；微波辅助提取；高效液相色谱
Determination of Chlorogenic Acid in Passiflora Eduist by Microwave Extraction-HPLC Detection
QIU Xiu-zhen， GUO Hui-shi*， WANG Shao-ling， HE Mu-zhen
（College of Chemistry and Environmental Engineering， Shaoguan University， Shaoguan 512005， Guangdong，
China）
Abstract：A rapid method for the determination of chlorogenic acid in Passiflora eduis using high performance
liquid chromatography （HPLC）method was established. The samples were extracted with method by microwave-
食品研究与开发
Food Research And Development
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.06.022
基金项目：教育部留学回国人员科研启动基金资助项目（第 39批）；广东省自然科学基金资助项目（9151200501000008）；韶关学院科研立项资
助项目[韶学院（2009）150号]
作者简介：丘秀珍（1982—），女（汉），讲师，硕士，研究方向：色谱分析。
*通信作者：郭会时，男，教授，研究方向：仪器分析。
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检测分析
2013年 3月
第 34卷第 6期
80
百香果（学名 Passiflora edulis Sims），因其果汁具
有蟠桃、石榴、菠萝、芒果、香蕉等多种水果的香气而得
名[1]。百香果原产于巴西，故又名巴西果，现已在我国
南方地区大面积种植。据研究，百香果果汁富含多种
对人体有益的营养成分，是纯天然保健水果。目前对
百香果的研究多集中在果核和果仔上[2-3]，对其果汁活
性成分研究甚少。绿原酸是百香果的主要活性成分之
一。绿原酸（chlorogenic acid）又名 3—咖啡酰奎宁酸，
是许多中草药如金银花、杜仲、茵陈等的主要有效成
分之一。绿原酸具有抗菌、抗病毒、升高白细胞、保肝
利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、清除自由基等多种药理
活性[4]，在医药领域上用途十分广泛。
目前绿原酸的测定方法主要有紫外可见分光光
度法[4]、高效液相色谱法[5-8]等，提取方法主要有超声波
提取法和索氏提取法。微波辅助提取法因其具有提取
率高、提取时间短、溶剂用量少等优点，近年来得到广
泛应用[9-12]。本文采用微波辅助提取——高效液相色谱
法测定百香果中绿原酸含量，采用正交试验法优化了
百香果中绿原酸的微波提取工艺，建立了快速、简便、
准确测定百香果中绿原酸的方法，并进行了分析方法
科学性考察，为进一步开发利用丰富的百香果资源提
供了科学的理论参考。
1 材料与方法
1.1 仪器与试剂
LC-20AT 高效液相色谱仪：日本岛津公司；
KJ23C-AN2微波炉：美的公司；电子分析天平：上海精
密科学仪器有限公司；KQ-3200B型超声波清洗仪：昆
山市超声仪器有限公司；SYZ—550石英亚沸高纯水蒸
馏器；聚乙烯消解罐等。
绿原酸标准品：纯度为 98.26 %，陕西绿清生物工
程有限公司生产，批号为 HK090910；正己烷（AR），乙
酸乙酯（AR），无水乙醇（AR），甲醇（GR），乙腈（GR），
二次蒸馏水（经 0.45 μm水系滤膜过滤）。
百香果：原产于广东省韶关市乳源县。
1.2 方法
1.2.1 供试品的制备
准确称取 3.000 0 g百香果果肉，分别用正己醇、
乙酸乙酯萃取，过滤。把滤渣连同滤纸置于微波消
解罐中，加入 30 mL 80 %乙醇作提取剂，微波功率
选定中高火，微波加热提取 4 min。提取结束后取出
消解罐，待冷却后，减压抽滤，收集滤液。滤液置于
50 mL 的容量瓶中，用 80 %乙醇定容，即得供试品
溶液。
1.2.2 对照品溶液的制备
精密称取绿原酸标准品0.096 6 g，置于 100 mL的
容量瓶中，用 80 %乙醇溶解，定容，配制得质量浓度为
996.0 mg/L的对照品储备液，备用。
1.2.3 色谱条件
百香果中绿原酸的最佳色谱条件：Eclipse XDB-
C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相：A相为二
次蒸馏水+1 %乙酸，B相为乙腈；梯度洗脱程序为：
0~5min，B=5%（体积分数）；5min~10min，B=60%（体积
分数）；10 min~15 min，B= 80 %（体积分数）；15 min~
25 min，B = 100 %（体积分数）；25 min ~40 min，
B= 100 %（体积分数），流速 0.8 mL/min，检测波长
320 nm，柱温 40℃，进样量 10 μL。
1.2.4 标准曲线的绘制
分别准确吸取绿原酸标准储备液 0.00、1.00、2.00、
3.00、4.00、5.00 mL于 50 mL容量瓶中，用乙醇定容至
刻度。各浓度标准溶液按 1.2.3色谱条件进样测定。以
标准溶液的质量浓度为横坐标；对应的峰面积为纵坐
标，绘制标准曲线，并进行回归计算。研究得出回归方
程为：Y = 178 659X-77 143，R2=0.999 7。表明绿原酸在
19.80 mg/L~99.60 mg/L范围内线性良好。
1.2.5 样品含量测定
准确吸取试样溶液 10 μL，按 1.2.3色谱条件进样
测定，平行测定 3次。根据标准曲线回归方程计算百
assisted extraction and detected directly by HPLC method. The separation of chlorogenic acid was performed on
Eclipse XDB -C18 column （4.6 mm×150 mm， 5 μm）， using acetonitrile - water as mobile phase with gradient
elution， at the flow rate of 0.8mL/min. The detectionwas carried out at 40℃with wavelength of 320 nmand injection
volume of 10 μL. Under the optimized conditions， the calibration curve of chlorogenic acid was linearly over the
ranges of 19.80mg/L-99.60mg/L （R2=0.999 7）. The average content of chlorogenic acid in Passiflora eduis samples
was found to be 20.53 mg/g and an average recovery rate of 97.68 %（n=5） was obtained. The proposed method has
many advantages such as high sensitivity， fastness， aswell as small amounts of organic solvent consuming.
Key words：Passiflora eduist； chlorogenic acid； microwave-assisted extraction； HPLC
检测分析 丘秀珍，等：百香果中绿原酸含量的高效液相色谱法测定
81
香果中绿原酸的含量。
2 结果与讨论
2.1 色谱分离条件的优化
2.1.1 流动相的选择
本研究系统考察了甲醇-水、甲醇-水+乙酸和乙
腈-水+乙酸体系作流动相对样品分离效果的影响。研
究表明用乙腈-水+1.0 %乙酸作流动相分离效果最佳。
样品按 1.2.3的梯度条件洗脱时，色谱峰可实现较好分
离，且出峰时间短，峰形对称，见图 1、图 2。其主要原因
是绿原酸为有机弱酸，加入少量乙酸溶液，可调节流
动相的酸度，抑制绿原酸解离，减少拖尾现象。
2.1.2 检测波长的选择
取绿原酸对照品在 200 nm～400 nm波长范围内进
行扫描，绿原酸在 320 nm处有最大吸收，且在此波长
下样品的杂质峰干扰较小，故选择检测波长为 320 nm。
2.2 样品测定
按照供试品溶液的制备方法平行制备样品 6份，
按 1.2.3色谱条件分别进样分析，按照回归方程计算绿
原酸含量。实验测得 6份试样中绿原酸的质量浓度分
别为：20.00、20.85、20.65、20.87、20.01、20.82 mg/g，平均
含量为 20.53 mg/g，6 次提取测定绿原酸含量的 RSD
为 1.56 %。实验结果还表明该方法的重现性良好。
3 分析方法学考察
3.1 精密度实验
按照供试品制备方法制备样品 1份，在 1.2.3色谱
条件下连续进样 6次，测定绿原酸的峰面积，计算得绿
原酸峰面积的 RSD=0.94 %，表明该方法精密度良好。
3.2 稳定性实验
制备供试品溶液 1份，分别于 0、2、4、8、12、24 h
内进样测定。测得绿原酸峰面积的 RSD=1.14 %，表明
该供试品溶液在 24 h内稳定。
3.3 回收率实验
取已测知含量的样品 5 份，分别准确加入
0.996 0 mg/mL 的对照品溶液 10.00 mL，按照供试品
溶液的制备方法提取，于 1.2.3色谱条件下进样 20 μL，
按样品含量测定方法测定，计算平均回收率，结果如
表1。
4 结论
本文采用微波辅助提取与高效液相色谱法测定
了百香果果肉中绿原酸的含量。百香果果肉经微波辅
助提取后，用反相高效液相色谱测定。实验测得百香
果果肉中的绿原酸质量浓度为 20.53 mg/g。该方法快
速、简便，准确度高，且溶剂用量少，节约环保，可为开
发利用丰富的百香果资源提供理论参考。
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图 1 标准品色谱图
Fig.1 Chromatogram of standard sample
图 2 供试品色谱图
Fig.2 Chromatogram of tested sample
1 750
1 500
1 250
1 000
750
500
250
0
-250
0.0 1.0 2.0 3.0
时间/min
A/
m
AU
4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.011.0
6.
85
9
绿原酸
3.
37
9
5.
09
2
7.
75
1
4.
33
4
4.
83
5
6.
36
7
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
-100
0.0 1.0 2.0 3.0
时间/min
A/
m
AU
4.0 5.0 6.0 7.0 8.0 9.0 10.0
6.
91
0
绿原酸
4.
39
1
4.
72
0
5.
13
7
表 1 绿原酸的加标回收率
Table 1 Spiked recovery of chlorogenic acid
样品含量/mg 加入量/mg 测得量/mg 回收率/ % 平均值/% RSD/%
10.57 9.960 20.08 97.81
97.68 1.12
10.57 9.960 20.22 98.49
10.57 9.960 19.83 96.59
10.57 9.960 20.25 98.64
10.57 9.960 19.89 96.88
检测分析丘秀珍，等：百香果中绿原酸含量的高效液相色谱法测定
82
2013年 3月
第 34卷第 6期
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收稿日期：2012-06-05
HPLC法测定骏枣中芦丁、
槲皮素及异鼠李素含量
王迎进，李洁，张海容
（忻州师范学院生化分析技术研究所，山西忻州 034000）
摘 要：建立高效液相色谱法同时测定骏枣中芦丁、槲皮素和异鼠李素的测定方法。采用 Kromasil C18色谱柱；甲醇-
0.2 %磷酸（60∶40，体积比）为流动相；流速 1 mL/min；检测波长 370 nm。结果表明：芦丁回归方程 y=726 083x+1 938（r=
0.999 8），在 0.038 3 μg~0.612 μg 范围内线性关系良好，平均加样回收率 99.34 %，RSD=1.42 %；槲皮素回归方
程 y=8 667 980.8x-2 869.6（r=0.999 9），在 0.005 8 μg~0.092 μg范围内线性关系良好，平均加样回收率 99.82 %，RSD=
2.27 %；异鼠李素回归方程 y=325 300x+2 611.4（r=0.999 2），在 0.027 5 μg~0.440 μg范围内线性关系良好，平均加样回
收率 98.90 %，RSD=2.44 %。该法操作简便、准确，重复性好，可用于骏枣中芦丁、槲皮素和异鼠李素含量的测定。
关键词：骏枣；芦丁；槲皮素；异鼠李素；高效液相色谱
Simultaneous Determination of Rutin，Quercetin and Isorhamnetin in
Zizyphus jujuba cv. Jun by HPLC
WANG Ying-jin， LI Jie， ZHANG Hai-rong
（Lab of Biochemical Analysis， Xinzhou Teachers University， Xinzhou 034000，Shanxi，China）
Abstract：The contents of rutin， quercetin and isorhamnetin in Zizyphus jujuba cv. Jun were determined by high
performance liquid chromatography （HPLC）usingKromasilC18（150mm×4.6mm，5μm）column，Methanol-0.2%
phosphoric aicd （60∶40，v∶v）as mobile phase at a flow rate of 1.0 mL/min and detection wavelength of 370 nm. The
results showed that the linear range of rutin concentration was from 0.038 3 μg to 0.612μg， the regression equation
was y=726 083x+1 938 （r=0.999 8）， the average recovery was 99.34% with the RSD of 1.42%. The linear range of
quercetin concentration was from 0.005 8 μg to 0.092μg， the regression equation was y=8 667 980.8x-2 869.6 （r=
0.999 9）， the average recovery was 99.82%with the RSD of 2.27%. The linear range of isorhamnetin concentration
was from0.0275 μg to 0.440μg， the regression equationwas y=325 300x+2611.4 （r=0.999 2）， the average recovery
was 98.90%with theRSD of 2.44%. The proposedmethod had highly repeatability and selectivity. It was simple，fast
and could be used for the detemination of rutin，quercetin and isorhamnetin inZizyphus jujuba cv. Jun.
Key words：Zizyphus jujuba cv. Jun； Rutin； Quercetin； Isorhamnetin； HPLC
食品研究与开发
Food Research And Development
DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2013.06.023
基金项目：忻州师范学院科研资助项目（2009-54）
作者简介：王迎进（1980—），男（汉），讲师，硕士，主要从事天然植物有效成分分离研究工作。
检测分析
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