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石花菜和海蒿子提取物抗菌活性初步研究



全 文 :
2011,40(1):28-30.
Subtropical Plant Science


石花菜和海蒿子提取物抗菌活性初步研究
林雄平1,周逢芳1,陈晓清2,彭 彪1
(1.宁德师范学院 生物工程系,福建 宁德 352100;2.漳州师范学院 生物科学与技术系,福建 漳州 363000)

摘 要:采用圆形纸片法,对石花菜和海蒿子粗提取物及萃取得到的不同极性组分进行抗菌实验。结果表明,
石花菜和海蒿子均有不同程度的抗菌作用,海蒿子粗取物的抗细菌活性强于抗真菌活性,而石花菜乙醇提取物
抗黑曲霉活性大于抗大肠杆菌、金黄色葡萄球菌以及枯草杆菌活性,其抑菌圈可达 4 mm。
关键词:石花菜; 海蒿子; 粗提取物; 抗菌; 圆形纸片法
Doi: 10.3969/j.issn.1009-7791.2011.01.007
中图分类号:Q949.96 文献标识码:A 文章编号:1009-7791(2011)01-0028-03

Research on the Antimicrobial Activities of Extracts from
Gelidium amansii and Sargassum pallidum
LIN Xiong-ping1, ZHOU Feng-fang1, CHEN Xiao-qing2, PENG Biao1
(1.Department of Bioengineering, Ningde Normal University,Ningde 352100, Fujian China; 2.Department of Biological
Science & Technology, Zhangzhou Normal University, Zhangzhou 363000, Fujian China)

Abstract: Crude extracts and fractions separated from ethanol extracts from Gelidium amansii and
Sargassum pallidum were tested for their efficacy against bacterial by the circle agar disc diffusion
method. As a result, Gelidium amansii and Sargassum pallidum had different degree of antimicrobial
activitics. The antibacterial activities of crude extracts from Sargassum pallidum were stronger than
antifungal activities. The ethanol extracts from Gelidium amansii showed the antifungal activities
against Aspergillus niger with the inhibition zone 4 diameters, which were stronger than the
antibacterial activities against Bacillus subtilis, Escherichia coli and Staphylococcus aurens.
Key words: Gelidium amansii; Sargassum pallidum; crude extracts; antimicrobial; the circle agar
disc diffusion method

石花菜(Gelidium amansii)别名牛毛菜、鸡毛菜、海草、草珊瑚、海冬菜等,为红藻门石花菜科石
花菜属多年生植物。近年研究表明,石花菜的粘性多糖-琼脂可用于医药、食品和作细菌培养基[1]。海
蒿子(Sargassum pallidum)为褐藻门马尾藻科马尾藻属多年生植物。《中药大辞典》[2]记载,海蒿子具有
“软坚、消痰、利水、泻热”之功效,可用于治疗“水肿、脚气、睾丸肿痛”等症。海蒿子粗提取物
对子宫癌U-14、肉瘤 180 及淋巴I号腹水型的动物抗肿瘤试验显示抑制作用[3]。
迄今,有关石花菜的研究主要是对其提取物的亲水性成分、多糖抗病毒活性、粗蛋白抗菌抗病毒
活性以及养殖加工和药用成分等。海蒿子的抗菌抗病毒活性研究集中在海藻多糖成分或小分子化学成
分,而对其乙醇提取物和脂溶性物质的抗菌活性研究较少。本文以石花菜和海蒿子为材料,用不同方
法得到两种藻类的粗提取物,并测其抗菌活性,为进一步开发利用石花菜和海蒿子的资源提供资料。
1 材料与方法
1.1 样品和菌种来源
石花菜(Gelidium amansii)和海蒿子(Sargassum pallidum)于 2009 年 7 月采自福建省石狮市永
收稿日期:2010-09-02
基金项目:福建省教育厅 B 类科技研究项目(JB10187)、福建省宁德市科技计划项目(20100033)、宁德师专校资助项目(2009203)
作者简介:林雄平(1979-),男,福建寿宁人,讲师,硕士,从事藻类学研究。
第 1 期 林雄平,等:石花菜和海蒿子提取物抗菌活性初步研究 ﹒29﹒
宁镇黄金海岸的潮间带。海藻取回后,挑去杂藻,用自来水洗去样品表面的附生物、盐分等杂质,于
通风处阴干,粉碎至 40 目,保存于干燥袋内备用。受试菌有 3 种细菌(枯草杆菌 Bacillus subtilis、
大肠杆菌 Escherichia coli、金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aurens)和 2 种真菌(黑曲霉 Aspergillus
niger、青霉 Penicillium glaucum)。菌种均来自宁德师范学院生物工程系微生物实验室。
1.2 粗脂提取
分别称取 2 种藻粉各 30 g,用索氏抽提器在黑暗中乙醚回流抽提(45℃水浴)72 h,蒸干溶剂后,
得到粗脂提取物,称重,再分别加入乙醚,配制成 0.1 g/ml 备用。
1.3 乙醇粗提取物制备及萃取
分别称取 2 种海藻粉末各 60 g,用 300 ml 95%乙醇在 45 ℃恒温水浴浸泡 3 d,过滤,滤渣再重复
提取 2 次,每次浸泡 3 d,合并 3 次的提取液,蒸干后得到黑褐色固体浸膏,即海藻乙醇粗提取物,分
为两部分:一部分配制成 0.1 g/ml 粗脂乙醇溶液用于抗菌实验,另一部分用于萃取。
将海藻乙醇粗提取物加入 10 倍体积的蒸馏水,充分溶解后,用乙酸乙酯萃取,得到低极性的乙酸
乙酯相和高极性的水相。分别蒸干称重,再配制成 0.1 g/ml 乙酸乙酯相和水相溶液,用于抗菌实验。
1.4 抗菌实验
采用圆形纸片法,按文献[4]的方法进行,以对应的溶剂作空白对照,以氯霉素作阳性对照。每样
品 2 次重复。细菌 36~37 ℃培养 18~24 h、真菌 28~30 ℃培养 48~72 h 后观察,测量抑菌圈大小。
2 结果与分析
2.1 石花菜不同极性组分提取物的含量及抗菌活性分析
2.1.1 提取物含量 石花菜 60 g 经乙醇浸提后得 5.3301 g, 得率 8.88%, 其中 2.0085 g 用于制成粗脂乙
醇溶液,3.3216 g 用于萃取, 萃取后得水相 2.1695 g, 乙酸乙酯相 0.6653 g,分别占全部萃取组分的
65.31%和 20.03%。以水相为主。石花菜 30 g 乙醚索氏抽提后得 0.5104 g 粗脂,得率 1.7%。
2.1.2 抗菌活性分析 在对细菌的抑制活性中,石花菜的乙醇和乙醚粗提取物对大肠杆菌的抑制活性较
强,萃取后的水相只对大肠杆菌起抑制作用,而乙酸乙酯相对 3 种细菌均起抑制作用,且抗菌活性比
水相强。石花菜乙醇提取物对金黄色葡萄球菌的抗菌活性达到 3 mm(表 1)。
石花菜的乙酸乙酯相对真菌青霉
和黑曲霉均有较强的抑制作用,其对青
霉的抑菌圈达 3.5 mm,对黑曲霉也达
2.5 mm,较其对细菌的抑制能力强。石
花菜乙醇提取物对黑曲霉有较强的抑
制活性,抑制能力比细菌强,达 4.0 mm,
其余提取物则对真菌不起抑制作用。用
于阳性对照的氯霉素对枯草杆菌和大
肠杆菌的抑菌能力很强,比石花菜的各
种粗提取物强得多,达到 7 倍左右,但对真菌不起抑制作用。
表 1 石花菜提取物的抗菌活性
抑菌圈直径(mm) 提 取 物 枯草杆菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 青霉 黑曲霉
乙醇 2.0 2.0 3.0 — 4.0
乙醚 2.5 2.5 1.5 — —
水相 — 1.0 — — —
乙酸乙酯相 1.5 2.0 2.0 3.5 2.5
空白对照 — — — — —
阳性对照 14.0 13.0 — — —
注: “—”表示无抗菌活性,下表同。
2.2 海蒿子不同极性组分提取物的含量及抗菌活性分析
2.2.1 提取物含量 海蒿子 60 g 乙醇浸提后得到 4.9556 g,得率 8.26%,其中 1.6276 g 配成粗脂乙醇溶
液用于抗菌实验,3.3280 g 用于萃取分离,得到水相 2.7581 g, 乙酸乙酯相 0.3889 g, 分别占原组分的
82.88%和 11.69%。海蒿子 30 g 乙醚索
氏抽提后得到 0.5893 g,得率 1.96%。
表 2 海蒿子提取物抗菌活性
抑菌圈直径(mm) 提取物 枯草杆菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 青霉 黑曲霉
乙醇 3.0 3.0 2.0 — —
乙醚 2.5 2.0 3.0 — —
水相 — — — — —
乙酸乙酯相 1.5 — 1.0 2.5 —
空白对照 — — — — —
阳性对照 20.0 22.3 — — —
2.2.2 抗菌活性分析 海蒿子藻粉粗
提取物的抗菌实验表明,乙醇与乙醚
提取物对细菌具有较强的抗菌能力,
抗菌活性均达 2~3 mm,但对真菌均
不起作用(表 2)。海蒿子的水相对 5
第 40 卷 ﹒30﹒
种菌均没有抗菌活性,而乙酸乙酯相对细菌的抗菌活性比乙醇提取物的抗菌活性弱,但乙酸乙酯相对
青霉的抑制作用比对细菌强,达 2.5 mm,而且只有乙酸乙酯相对真菌起作用,其余提取物均不起作用。
综上所述,几种不同的有机溶剂提取液在同一浓度下都显示出较好的抗菌作用,能同时抑制细菌
和真菌的同一种藻类提取物,抑制真菌所产生的抑菌圈比抑制细菌的大。由此可知,不同溶剂提取液
抗菌效果不同,成分有一定的差别,石花菜的水相只对大肠杆菌有抑制作用但较弱;石花菜的乙醇浸
提物和乙醚的提取物的抗菌能力相差不大。海蒿子的乙醇和乙醚提取物的抗菌能力差不多,而且海蒿
子的水相对 5 种菌均无抑制作用,乙酸乙酯相对青霉的抑制能力达 2.5 mm,比对细菌的抑制能力强。
实验还发现,氯霉素对金黄色葡萄球菌并没有抑制作用,而乙醇提取物、乙醚提取物和乙酸乙酯相均
对金黄色葡萄球菌起着一定的抑制作用。
3 讨 论
3.1 不同溶剂对海藻提取物含量和抗菌活性的影响
本实验结果表明同一种海藻不同溶剂提取所得到的粗提物含量有很大的差异,且乙醇提取率高于
乙醚提取率。徐年军等[5]在山东沿海海藻抗肿瘤活性的研究中,分析了 10 种分布较广的海藻用不同溶
剂的提取效率,认为乙醇、氯仿的提取效率较高。不同海藻的活性组分不同,选择适宜的溶剂能更有
效地得到希望的提取物。用于海藻粗提取物的提取溶剂有多种,如水、甲醇、乙醇、乙醚、氯仿、丙
酮等。用不同溶剂提取其抗菌活性的效果也不同,陈灼华等[6]利用甲醇得到的海藻提取物大部分对细
菌具有抑制效果。在研究海藻乙醇提取物抗菌活性时,徐年军等[7]也发现褐藻具有较强的抗菌活性。
陈灼华等[8]对乙醇、丙酮、甲醇∶甲苯(3∶1)进行提取物筛选,也发现乙醇的提取物活性最好。本
文在前人实验的基础上进一步发现了有机溶剂提取的海藻活性物质具有较强的抗菌活性,且用乙醇和
乙醚提取的粗提取物抗菌活性的效果相差不大。
3.2 不同病原菌对海藻提取物的敏感性
抗菌实验结果表明,褐藻中海蒿子的提取物对细菌的抑菌活性比对真菌的抑菌活性效果好,这与
陈灼华等[6]和林雄平等[9]报道的一致。另外,孙杰等[10]通过石花菜醇提物的抗植物病原真菌活性实验发
现,石花菜中存在广泛的抗病原真菌资源。本实验也表明红藻中的石花菜能够同时抑制细菌和真菌同
一提取物中,抑制真菌所产生的抑菌圈比抑制细菌的大。因此可以说红藻中的石花菜所含的某种抗菌
物质能够更有效的抑制真菌的生长,具体的活性物质还有待于进一步的研究。
参考文献:
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