全 文 ：收稿日期:2015-05-28; 修订日期:2015-10-09
基金项目:国家自然科学基金(No． 81260682);
精细化工国家重点实验室开放课题(No． KF1308)
作者简介:许 良(1966-)，男(蒙古族)，内蒙古赤峰人，内蒙古民族大学
化学化工学院教授，博士学位，主要从事天然产物及药物分析研究工作．
蒙药塔日奴中岩大戟内酯 B
和狼毒乙素的 ＲP － HPLC法分析
许 良，包勿兰，李桂花，王曦烨，刘景林
(内蒙古民族大学化学化工学院，内蒙古 通辽 028000)
摘要:目的 建立反相高效液相法同时测定蒙药塔日奴中岩大戟内酯 B 和狼毒乙素含量。方法 采用 90 %的乙醇溶液
回流提取制备供试品。分析色谱柱为 CenturySIL C18 BDS(250 mm ×4． 6 mm，5 μm)，流动相为乙腈(A)－水(B)梯度洗
脱(0 ～ 60 min;98 % ～0 % B;2 % ～100 % A)，流速 0． 8 ml·min －1，检测波长 227 nm。结果 蒙药塔日奴中岩大戟内酯
B及狼毒乙素标准曲线的回归方程依次为 Y = 458411X + 1704565 (r = 0． 9999)，Y = 127938X － 168409(r = 0． 9998) ，在
1． 871 ～ 9． 355 μg ，0． 1856 ～ 0． 928 μg范围内线性关系良好，平均回收率分别为 99． 5%和 95． 5%，ＲSD分别为 3． 2 %和
1． 0 %。结论 所建立的 HPLC含量测定法快捷、准确、重现性好，可用于蒙药塔日奴中岩大戟内酯 B 和狼毒乙素的含量
测定。
关键词:岩大戟内酯 B; 狼毒乙素; 反相高效液相色谱法; 蒙药塔日奴
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 01． 007
中图分类号:Ｒ291． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)01-0019-02
Simultaneous determination of jolkinolide B and 2，4 － dihydroxy － 6 － methoxy － 3 －
methy －1 － acetophenone in Mongolian medicine Tarinu by ＲP －HPLC
XU Liang，BAO Wu-lan，LI Gui-hua，WANG Xi-ye，LIU Jing-lin
(Inner Mongolia University for Nationalities，College of Chemistry and Chemical Engineering ，Tongliao，
028000，China)
Abstract:Objective To develop a ＲP － HPLC method for the simultaneous determination of jolkinolide B and 2，4 － dihydroxy
－ 6 － methoxy － 3 － methy － 1 － acetophenone in Mongolian herbal medicine Tarinu． Methods The 90 % ethanol reflux extrac-
tion method was used to extract two components． The separation was performed on A Century SIL C18 BDS(250 mm ×4． 6 mm，
μm)column． The mobile phase consisted of acetonitrile and water with gradient elution (0 ～ 60 min;98 % ～0 % B;2 % ～ 100
% A)，at the flow rate of 0． 8 ml·min －1 and the detection wavelength was 227 nm． Ｒesults The regression equations of the two
components in Mongolian medicine Tarinu were Y = 458411X + 1704565 (r = 0． 9999)for jolkinolide B，Y = 127938X － 168409
(r = 0． 9998)，for 2，4 － dihydroxy － 6 － methoxy － 3 － methy － 1 － acetophenone，respectively． The calibration curves of two
components，jolkinolide B and 2，4 － dihydroxy － 6 － methoxy － 3 － methy － 1 － acetophenone were linear in the ranges of 1． 871
～ 9． 355 μg and 0． 1856 ～ 0． 928 μg，the average recoveries were 99． 5 % with ＲSD of 3． 2 % for jolkinolide B and 95． 5 %
with ＲSD of 1． 0 % for 2，4 － dihydroxy － 6 － methoxy － 3 － methy － 1 － acetophenone． Conclusion The determination method of
two components in Mongolian medicine Tarinu was fast，accuracy，good reproducibility and could be used for the quality control of
Mongolian herbal medicine Tarinu。
Key words:Jolkinolide B; 2，4 － dihydroxy － 6 － methoxy － 3 － methy － 1 － acetophenone; ＲP － HPLC; Mongolian herbal
medicine Tarinu
蒙药塔日奴为大戟科植物月腺大戟 Enphorbaeebracteolata
Hagatu的干燥根，又名断肠草，其味苦辛、性平，具有消肿、逐水、
杀虫及散结的功效［1］。蒙医用来治疗结喉，脓疱疮，风湿病，水
肿，肌体关节疼痛症等［2］。塔日奴生于山坡或林下草丛中，主产
于河南、浙江、湖南、湖北、山东、江苏、安徽等省，该药材植物资源
丰富［3］，且含有丰富的活性化学物质。近年来的研究表明，蒙药
塔日奴化学成分具有独特结构的二萜类化合物和苯乙酮类化合
物，二萜类化合物岩大戟内酯 B具有抑制肿瘤的药效［4］，苯乙酮
类化合物狼毒乙素对结核菌的抑菌作用显著，在临床上用于肺结
核杆菌的医治［5］。本实验采用 ＲP － HPLC 法同时测定了蒙药塔
日奴中岩大戟内酯 B和狼毒乙素的含量［6 ～ 9］，为建立蒙药塔日奴
质量控制方法提供实验依据。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 Waters高效液相色谱仪(美国 Waters 公司，配有 Wa-
ters － 2695 四元泵，自动进样器，在线脱气机，柱温箱，waters －
2489 紫外可见光检测器);KQ － 100DA数控超声波清洗器(昆山
市超声仪器有限公司);FA2104 型电子天平(上海恒平科学仪器
有限公司)。
1． 2 试剂和药品 乙腈(Honeywell 公司);甲醇(Honeywell 公
司);无水乙醇(国药集团化学试剂有限公司);纯净水(娃哈哈集
团有限公司);岩大戟内酯 B 对照品(由北京恒元启天化工技术
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 1 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 1 期
研究院和北京世纪澳科生物技术有限公司联合研制提供);狼毒
乙素对照品(由中国药品生物制品检定研究院提供);塔日奴(内
蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室提供，批号:20100123)。
2 方法与结果
2． 1 溶液的制备
2． 1． 1 对照品溶液的制备 分别精密称取岩大戟内酯 B 标准品
1． 871 mg和狼毒乙素标准品 1． 856 mg，各置于 5 ml容量瓶中，用
甲醇定容至刻度。分别取岩大戟内酯 B 和狼毒乙素对照品溶液
各 0． 5 ml，置于样品瓶，得对照品混合液。取配制好的狼毒乙素
对照品溶液，稀释 10 倍，供 HPLC测试。
2． 2． 2 供试品溶液的制备 将塔日奴干燥切片置于 60℃干燥箱
中，加热 3 h 至恒重，粉碎。准确称取塔日奴粉末 10 g，置于 150
ml锥形瓶中，加入 100 ml 90 % 乙醇溶液浸泡过夜(24 h)，称定
重量，加热回流提取 3h，取出，放冷，再称定重量，补足减失的重
量，摇匀，抽滤得滤液，滤液用 0． 25 μm滤膜过滤，即得。
2． 3 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱为 CenturySIL C18 BDS
柱(250 mm ×4． 6 mm，5 μm);流动相为乙腈 －水梯度洗脱(0 ～
60 min;98 % ～0 % B;2 % ～100 % A);流速为 0． 8 ml·min －1;
检测波长为 227 nm;进样量 10 μl;柱温为室温。
上述色谱条件下，理论塔板数按岩大戟内酯 B 计算应不低
于 10000，按狼毒乙素计算应不低于 5000，岩大戟内酯 B 与其他
组分实现完全分离，狼毒乙素的分离度大于 1． 6，精密吸取混合
对照品溶液和供试品溶液各 10 μl，注入 Waters 液相色谱仪，记
录 60 min的色谱图。见图 1。
A． 混合对照品溶液 B． 供试品溶液 1． 狼毒乙素 2． 岩大戟内酯 B
图 1 岩大戟内酯 B和狼毒乙素 ＲP － HPLC色谱图
2． 4 线性关系考察 在上述色谱条件下，精密吸取岩大戟内酯 B
对照品溶液 5． 0，10． 0，15． 0，20． 0，25． 0 μl进样，记录色谱图。以
进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归。得回归方程
Y = 458411X + 1704565 ，r = 0． 9999，表明岩大戟内酯 B在1． 871
～ 9． 355 μg范围内，峰面积值与进样量呈良好的线性关系。精
密吸取狼毒乙素对照品溶液 5． 0，10． 0，15． 0，20． 0，25． 0 μl进样，
记录色谱图，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回
归。得回归方程为 Y = 127938X － 168409，r = 0． 9998，表明狼毒乙
素在 0． 1856 ～ 0． 928 μg 范围内，峰面积值与进样量呈良好的线
性关系。
2． 5 稳定性试验 取塔日奴粉末，按“2． 2． 1”项下的方法制备供
试溶液，分别于 0． 5，2，4，6，8，24 h，按上述色谱条件进行测定。
计算岩大戟内酯 B 和狼毒乙素峰面积的 ＲSD 值分别为 2． 7%，
3． 5%，结果表明供试品溶液在 24 h内测定结果稳定性良好。
2． 6 重复性试验 取塔日奴粉末，精密称取 6 份，按“2． 2． 1”项下
的方法制备供试溶液并进行测定，记录色谱图，计算岩大戟内酯
B和狼毒乙素的峰面积的 ＲSD，峰面积的 ＲSD 分别为 2． 9%、
3． 3%，表明具有较好的重复性。
2． 7 精密度试验 取岩大戟内酯 B和狼毒乙素混合对照品溶液，
进样量 10 μl，连续测定 6 次，记录色谱图，计算峰面积的 ＲSD值。
结果岩大戟内酯 B及狼毒乙素的峰面积的 ＲSD均小于 1． 0%，表
明该方法精密度良好。
2． 8 加样回收率试验 精密量取已知含量的蒙药塔日奴药材样
品(批号:20100123)1． 0000 g，分别加入 1． 0 ml岩大戟内酯 B和
狼毒乙素对照品溶液，照前述“2． 2． 1”项供试品溶液的制备方法
制备样品，根据标准曲线线性范围，按一定比例稀释，在上述色谱
条件下测定，计算回收率，结果见表 1 和表 2。
表 1 岩大戟内酯 B加样回收率试验结果
序号
样品中原有含量
/mg
加入的量
/mg
测得的量
/%
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
1 2． 930 0． 3742 3． 284 99． 41
2 2． 728 0． 3742 3． 072 99． 02
3 2． 939 0． 3742 3． 399 102． 6 99． 5 3． 2
4 2． 779 0． 3742 3． 207 101． 7
5 2． 721 0． 3742 3． 083 99． 60
n =5
表 2 狼毒乙素加样回收率试验
序号
样品中原有含量
/mg
加入的量
/mg
测得的量
/%
回收率
/%
平均值
/%
ＲSD
/%
1 0． 5925 0． 3712 0． 9276 96． 25
2 0． 6141 0． 3712 0． 9279 94． 17
3 0． 6008 0． 3712 0． 9268 95． 35 95． 5 1． 0
4 0． 5921 0． 3712 0． 9277 96． 30
5 0． 6010 0． 3712 0． 9273 95． 40
n =5
2． 9 样品含量测定 取塔日奴药材粉末，按照“2． 2． 1”项下的方
法制备供试溶液，按上述色谱条件进行测定，进样量 10 μl，记录
色图谱，计算塔日奴中岩大戟内酯 B 和狼毒乙素的含量。结果
见表 3。
表 3 含量测定结果(珋x ± s)
样品批号
岩大戟内酯 B
含量 /mg·g － 1 ＲSD /%
狼毒乙素
含量 /mg·g － 1 ＲSD /%
20100123 2． 804 ± 0． 0825 2． 9 0． 5973 ± 0． 0046 0． 8
n =5
3 讨论
本实验考察了乙醇浓度对样品中分析组分提取率的影响。
结果表明 90 %乙醇的提取率明显高于 50 %乙醇、70 %乙醇提
取率。在指定的色谱条件下，不同溶剂提取液的色谱图基本一
致，色谱峰峰形均较好，分离度达到分析标准。在回流提取和超
声提取法的比较试验中发现，回流提取法的提取率明显高于超声
提取法，故选择回流提取作为样品提取方法。
流动相的选择中，考察了甲醇 － 水、甲醇 － 水 － 0． 02% 磷
酸、乙腈 －水体系。结果发现，乙腈 －水体系明显优于其它流动
相，尤其该流动相在梯度洗脱条件下样品各组分得到良好的分
离。
利用二极管阵列检测器的全波长扫描功能，比较不同检测波
长条件下两种被测组分的紫外吸收度。结果表明，检测波长为
227 nm时岩大戟内酯 B和狼毒乙素 2 个成分均有较强的吸收，
故选择 227 nm作为检测波长。
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时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 1 期 LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 1
本实验所建立的蒙药塔日奴中岩大戟内酯 B 和狼毒乙素的
含量测定方法分离度好、准确度和专属性高，可作为蒙药材塔日
奴的质量控制方法。
参考文献:
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叶、花中 7，8 － 二羟基香豆素的含量［J］． 分析化学研究简报，
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测定［J］． 中成药，2011，33(3):530．
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收稿日期:2015-06-03; 修订日期:2015-11-28
基金项目:国家自然科学基金(No． 81102418);广东省基础与应用基础研究专项资金(省自然科学基金) (No． 2014A030313583) ;
广东省科技计划项目(No． 2012A030100014);广东省质量技术监督局标准制修订计划项目(No．粤质监标函［2012］676 号);
广东省科学院分析测试基金项目(No． Sf212906)
作者简介:钟兆健(1969-)，女(汉族)，广东罗定人，广东药学院高级实验师，学士学位，主要从事药物分析工作．
* 通讯作者简介:高晓霞(1972-)，女(汉族)，吉林长春人，广东药学院副教授，硕士研究生导师，博士学位，主要从事中药制剂质量控制工作．
天然沉香中白木香酸含量的高效液相色谱法测定
钟兆健1，樊云飞1，雷智东1，2，潘清灵3，周 欣1，刘岱琳2，章卫民3，高晓霞1*
(1．广东药学院 药科学院，广东 广州 510006; 2．武警后勤学院，天津 300309;
3．广东省微生物研究所，省部共建华南应用微生物国家重点实验室，
广东省菌种保藏与应用重点实验室，广东省微生物应用新技术公共实验室，广东 广州 510070)
摘要:目的 建立天然沉香中白木香酸含量的分析方法，研究白木香酸与浸出物含量(%)之间的相关性。方法 按《中国
药典》(2010 年版)一部进行醇溶性浸出物的含量测定和理化鉴别。高效液相色谱法采用 CNW Athena C18 － WP 柱
(250mm ×4． 6mm，5μm)，以乙腈 － 0． 1%(体积分数)磷酸水溶液(40 ∶ 60)为流动相，流速 1． 0ml·min －1，检测波长
217nm，柱温 35℃。结果 白木香酸在 2． 000 ～ 80． 00 μg·ml －1(r = 0． 9999)范围内线性关系良好，平均回收率为 96． 1%，
ＲSD为 3． 0%(n = 6)。在理化鉴别和浸出物含量合格的情况下，天然沉香中白木香酸与浸出物含量之间呈正比关系。结
论 高效液相色谱法可准确测定天然沉香中白木香酸的含量，结合白木香酸与浸出物含量之间的相关性，为天然沉香的
质量评价提供依据。
关键词:天然沉香; 白木香酸; 浸出物
DOI标识:doi:10． 3969 / j． issn． 1008-0805． 2016． 01． 008
中图分类号:Ｒ284． 2 文献标识码:A 文章编号:1008-0805(2016)01-0021-04
Determination of Agaropiric Acid in Natural Agarwood by HPLC
ZHONG Zhao-jian1，FAN Yun-fei1，LEI Zhi-dong1，2，PAN Qing-ling3，ZHOU Xin1，LIU Dai-lin2，ZHANG Wei-min3，
GAO Xiao-xia1*
(1． Department of Pharmacy，Guangdong Pharmaceutical College，Guangzhou 510006，China;2． Logistics
College of Chinese People＇s Armed Police Forces，Tianjin 300309，China;3． State Key Laboratory of Applied
Microbiology Southern China，Guangdong Provincial Key Laboratory of Microbial Culture Collection and Appli-
cation，Guangdong Open Laboratory of Applied Microbiology，Guangdong Institute of Microbiology，Guangzhou
510070，China )
Abstract:Objective To establish a HPLC method for determination of agaropiric acid in natural agarwood and research the rela-
tivity of contents between the ethanol － soluble extraction and agaropiric acid． Methods According to those correlative standards
of Aquilariae Lignum Ｒesinatum in Ch． P． (2010 Edith)，the content of ethanol － soluble extraction were determined and the
physicochemical properties of samples were identified． The determination was performed on a CNW Athena C18 － WP column
(250 mm ×4． 6 mm，5μm)and the mobile phase consisted of acetonitrile － 0． 1% phosphoric acid (40:60)． The flow rate was
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LISHIZHEN MEDICINE AND MATEＲIA MEDICA ＲESEAＲCH 2016 VOL． 27 NO． 1 时珍国医国药 2016 年第 27 卷第 1 期