全 文 ：华西药学杂志
W C J·P S 2015，30(1)∶124 ～ 125
基金项目:国家自然科学基金资助项目(批准号:81001697) ;北京市科技新星(No． 2011070) ;北京中医药大学自主课题(No． 2011JYB22XS －
061) ;国家大学生创新性试验计划项目(No． 201210026051) ;北京市共建项目(No． BJGJ1114，No． BJGJ1115)
作者简介:雷银瓶(1992—) ，女，正攻读药物分析专业的硕士学位。Email:15201391875@ 163． com
* 通信作者，Email:shegaimei@ 126． com
紫外分光光度法测定滇白珠中的总酚酸
雷银瓶，徐冠玲，谢 梦，颜 承，杨 悦，张 霞，姜 蕊，折改梅*
(北京中医药大学中药学院，北京 100102)
摘要:目的 建立滇白珠总酚酸的提取和含量测定的方法。方法 采用先超声后水解的方法提取样品，用改进的 Folin － Cio-
calteu比色法测定含量，检测波长为 764 nm。结果 总酚酸的标准曲线方程为:Y = 0． 0109X － 3 × 10 －4(r = 0． 9996) ，1． 88 ～
8. 42 μg·mL －1没食子酸与吸光度的线性关系良好(N = 5);平均加样回收率为 99． 68%，ＲSD = 2． 85%。结论 所用提取方法
反应时间短、提取效率高;紫外分光光度法测定总酚酸的方法简单方便，准确度和精密度均能满足分析要求。
关键词:滇白珠;紫外分光光度法;总酚酸;含量测定;酸水解;比色法;没食子酸
中图分类号:Ｒ917 文献标志码:B 文章编号:1006 － 0103(2015)01 － 0124 － 02
DOI:10． 13375 / j． cnki． wcjps． 2015． 01． 043
滇白珠为杜鹃花科白珠树属植物滇白珠 Gaul-
theria leucocarpa var． yunanensis or var． crenulata 的
干燥根或全草，首载于《滇南本草》中，具有清热解
毒、活血化淤、祛风除湿、顺气平喘的功效［1］。毛枝
白珠 G． trichoclada C． Y． Wu ex T． Z． Hsu、滇白珠
G． leucocarpa var． yunnanensis、白珠树 G． leucocarpa
var． cumiugiana、尾叶白珠 G． griffitbiana 等均为云
南滇白珠的基源植物，毛枝白珠为楚雄市场销售的
主流品种。滇白珠富含挥发油、有机酸、三萜类、黄
酮苷类、香豆素类、木质素类等化合物［2］，多酚类成
分与其消炎止痛的药效有一定的关系，现采用紫外
分光光度法测定滇白珠中多酚的含量。
1 实验部分
1． 1 仪器与试药
UV －2000 紫外分光光度计(Unico 公司)。滇
白珠(云南楚雄，经魏胜利老师鉴定为毛枝白珠的
地上部分);没食子酸对照品(天津市光复精细化工
研究所) ;其余试剂为分析纯。
1． 2 方法与结果
1． 2． 1 福林试剂和溶液的制备 称取 20 g 钨酸
钠、5 g钼酸钠，加入 140 mL水、10 mL 85%磷酸、20
mL盐酸，置磨口圆底烧瓶中，加热回流 10 h，放冷。
再加入 10 g硫酸锂、10 mL水和适量溴水，加热煮沸
15 min，冷却，过滤，滤液加水稀释至 250 mL，置棕色
瓶中，摇匀。精密称取 2． 5 mg 没食子酸对照品，置
50 mL棕色量瓶中，用水溶解并定容，即得 50 μg·
mL －1没食子酸对照品溶液。精密称取 1. 9813 g 滇
白珠粉末，置 100 mL棕色量瓶中，加 60 mL 95%乙
醇，超声提取(30 min × 3)，放冷，合并提取液，摇匀，
静置，过滤。滤液中加入 30 mL 5 mol·L －1盐酸，在
90 ℃水浴中水解 1 h。取出放凉后，精密量取 20 mL
置 100 mL棕色量瓶中，用乙醇定容，摇匀得供试品
溶液。
1． 2． 2 测定波长的选择 分别精密量取 1． 0 mL滇
白珠样品溶液和没食子酸对照品溶液，置两个 25
mL棕色量瓶中，精密加入 1． 0 mL 福林试剂、10 mL
蒸馏水，用 6%碳酸钠溶液定容，摇匀，静置 30 min，
以空白作为参比，在 400 ～ 800 nm扫描，确定最大吸
收波长为 764 nm。
1． 2． 3 标准曲线的制备 精密吸取 1． 0、1． 2、1． 6、
2． 2、2． 4 mL没食子酸对照品溶液，分别置 25 mL棕
色量瓶中，加 1． 0 mL 福林试剂、10 mL 蒸馏水，用
6%碳酸钠溶液定容，摇匀，静置 30 min，以相应试剂
为空白对照，在 764 nm测定吸光度。以吸光度为横
坐标、没食子酸浓度为纵坐标回归，得回归方程为:
Y =0． 0109X －3 × 10 －4(r = 0． 9996) ，1． 88 ～ 8． 42 μg·
mL －1没食子酸与吸光度呈良好的线性关系。
1． 2． 4 样品溶液制备条件的考察 选用 L9(3
4)正
交实验表，取 2． 0 g滇白珠粉末试验，以没食子酸量
为评价指标，方案见表 1。结果见表 2、3。由表 2、3
结果可知:超声提取多酚酸的方法，以没食子酸的得
率为参考指标，提取的次数和所用溶剂对多酚酸的
提取有显著影响，各因素对多酚酸超声提取工艺影
响的大小为:提取次数(D)＞溶剂(A)＞超声时间
(C)＞溶剂用量(B)，超声提取多酚酸的最佳的工
艺参数为 A2B1C1D3，即 2． 0 g 滇白珠用 60 ml 乙醇
超声 3 次、每次 0． 5 h。在单因素实验的基础上，选
用 L9(3
4)正交实验表，以没食子酸的量为指标，方
案见表 4。结果和方差分析见表 5、6。可知酸水解
提取多酚酸的方法，以没食子酸的提取率为参考指
标，盐酸浓度对多酚酸的提取效果有显著影响，各因
素对多酚酸提取工艺影响的大小为:浓度(B)＞温
度(D)＞料液比(A)＞水解时间(C) ，由此，酸水解
的最佳的工艺参数为 A3B2C1D2，即在 90 ℃下，用 5
mol·L －1盐酸溶液水解 1 h，料液比为 1∶15。
表 1 超声提取的因素水平表
水平 A B /mL C /h D
1 水 60 0． 5 1
2 乙醇 70 1． 0 2
3 丙酮 80 1． 5 3
表 2 超声提取的 L9(34)正交试验结果
No． A B C D A 没食子酸 /%
1 1 1 1 1 0． 725 2． 851
2 1 2 2 2 0． 338 2． 961
3 1 3 3 3 0． 268 3． 932
4 2 1 2 3 0． 395 4． 506
5 2 2 3 1 0． 495 2． 229
6 2 3 1 2 0． 434 4． 431
7 3 1 3 2 0． 299 2． 219
8 3 2 1 3 0． 228 2． 868
9 3 3 2 1 0． 176 0． 810
K1 3． 248 3． 192 3． 383 1． 963
K2 3． 722 2． 686 2． 759 3． 204
K3 1． 966 3． 058 2． 793 3． 769
Ｒ 1． 756 0． 506 0． 624 1． 806
表 3 超声提取的方差分析表
差异来源 离差平方和(SS) 自由度(df)方差(S2) F P
A 0． 550 2 0． 275 11． 957 ＜ 0． 05
B(误差) 0． 046 2 0． 275 — —
C 0． 082 2 0． 041 1． 783 —
D 0． 569 2 0． 285 12． 391 ＜ 0． 05
表 4 酸水解的因素水平表
水平 A /g·mL －1 B /mol·L －1 C /h D /℃
1 1∶5 3 1 80
2 1∶10 5 2 90
3 1∶15 7 3 100
表 5 酸水解的 L9(34)正交试验结果
编号 滇白珠 / g A B C D A 没食子酸 /%
1 2． 0997 1 1 1 1 0． 294 3． 113
2 2． 2084 1 2 2 2 0． 433 4． 903
3 1． 9656 1 3 3 3 0． 315 3． 633
4 2． 0295 2 1 2 3 0． 267 3． 027
5 2． 0295 2 2 3 1 0． 353 3． 933
6 2． 1845 2 3 1 2 0． 408 4． 272
7 1． 9404 3 1 3 2 0． 339 3． 937
8 2． 0477 3 2 1 3 0． 436 4． 892
9 2． 0426 3 3 2 1 0． 380 4． 232
K1 3． 883 3． 359 4． 092 3． 760
K2 3． 744 4． 576 4． 054 4． 71
K3 4． 354 4． 046 3． 834 3． 851
Ｒ 0． 610 1． 217 0． 258 0． 611
表 6 酸水解正交试验的方差分析表
差异来源 离差平方和 自由度 方差 F P
A 0． 068 2 0． 034 4． 857
B 0． 248 2 0． 124 17． 714 ＜ 0． 05
C(误差) 0． 013 2 0． 007
D 0． 569 2 0． 037 5． 286
1． 2． 5 精密度试验 精密称取 1． 9977 g 滇白珠，
按照“1． 2． 1”“1． 2． 3”项方法制备供试品溶液并重
复测定吸光度 5 次。吸光度分别为 0． 326、0． 325、
0. 326、0． 326、0． 326，ＲSD = 0． 0767%。表明该方法
精密度良好。
1． 2． 6 稳定性与重复性试验 精密称取 1． 9591 g
滇白珠，制备成供试品溶液，按“1． 2． 3”项方法，分
别在 15、30、45、60 min时测定其吸光度。吸光度分
别为 0． 322、0． 326、0． 326、0． 327，ＲSD = 0． 688%，
表明多酚酸在 30 min 时已趋于稳定。精密称取 5
份滇白珠，按照“1． 2． 1”“1． 2． 3”项方法制备供试品
溶液并测定吸光度，计算得平均值为 5． 708%，
ＲSD = 1． 20%(n = 5) ，表明该方法重复性良好。
1． 2． 7 滇白珠含量的测定 分别精密称取
1. 95913、1． 8254、1． 7823 g 滇白珠粉末，按“1． 2． 1”
项方法制备成供试品溶液。分别精密量取 1． 0 mL
供试品溶液置 3 个 25 mL 棕色量瓶中，按“1． 2． 3”
项方法测定吸光度，计算得总多酚的含量分别为
5. 737%、5． 642%、5． 659%(以没食子酸计)。
1． 2． 8 加样回收率试验 精密称取 6 份滇白珠，按
“1． 2． 1”项方法制备供试品溶液。各取 1． 0 mL 供
试品溶液和 0． 5 mL没食子酸溶液置 6 个 25 mL 棕
色量瓶中，按“1． 2． 3”项方法测定吸光度，并计算含
量。计算得加样回收率为 96． 3% ～ 104． 6%，平均
回收率为 99． 7%，ＲSD = 2． 85%(n = 6)。
2 讨论
文中以没食子酸的得率为检测指标，采用正交
设计法优化，先超声后水解提取滇白珠中多酚酸的
工艺。并完整地建立了紫外分光光度法测定滇白珠
中多酚酸的测定条件，1． 88 ～ 8． 42 μg·mL －1没食子
酸与吸光度呈良好的线性关系;所用方法简便易行，
且稳定性、重复性、精密度都较良好。
参考文献:
［1］ 贾敏如，李星炜． 中国民族药志要［M］． 北京:中国医药出版
社，2005:287 － 288．
［2］ 马小军，陈新磁．滇白珠及其同属植物研究进展［J］．中草药，
2001，32(10) :945 － 949．
［3］ 梁娜，孙少平，罗跃娥，等．阿魏酸的研究进展［J］． 黑龙江中
医药，2009:39 － 40．
收稿日期:2013 － 12 － 09
521第 1 期 雷银瓶，等。紫外分光光度法测定滇白珠中的总酚酸