全 文 ：!#$
陈红惠!，彭光华
（!文山学院生化系，云南文山 ##$%%%；
&西藏自治区质量技术监督局，西藏拉萨 ’(%%%%）
摘) 要：通过测定雪莲果叶酚酸提取物的还原能力和对化学模拟体系中羟自由基（·*+）、超氧阴离子自由基（* ,& ·）
及二苯代苦味肼基自由基（-..+·）的清除能力，研究了雪莲果叶酚酸提取物的体外抗氧化活性。结果表明：雪莲果
叶酚酸提取物具有较强的抗氧化能力，对自由基有明显清除作用，并且随着雪莲果叶酚酸浓度的增加，其抗氧化能力
有显著增强的趋势。
关键词：雪莲果叶，酚酸提取物，抗氧化作用，清除自由基
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中图分类号：BI&’’!) ) ) ) 文献标识码：K) ) ) ) 文 章 编 号：!%%&,%$%#（&%!!）%!,%!%$,%$

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) ) 雪莲果（!#$$#%&’() )*%+’,-*$,()，英文名 =1:65）
为菊科向日葵属双子叶草本植物［!］，含有较高的低聚
果糖和多种活性成分，可预防肥胖、便秘及肠道疾
病，降低血脂和胆固醇，具有提高人体免疫功能，降
火清毒等功效［&,$］。雪莲果现已成为国际上针对糖
尿病人保健品及药品的珍贵原料，在很多国家的糖
尿病协会内部被推荐使用［(,’］。由于雪莲果特殊的
保健功能及药用价值，雪莲果在日本以及一些欧洲
国家被广泛引种。各国对雪莲果及叶子的成分展开
了广泛的研究，发现雪莲果叶提取物具有较高的抗
氧化活性，还可以清除体内自由基，缓解肝细胞氧化
损伤等，主要是与其中的酚酸成分有关，包括绿原
) ) ) ) )
收稿日期：&%!%,%!,!&
作者简介：陈红惠（!NLN,），女，硕士研究生，主要从事食品的分析、开
发方面的研究。
基金项目：文山学院科研基金项目（%N>IP%’）。
酸、咖啡酸和阿魏酸等［#,L］。目前对于雪莲果叶的研
究已经成为热点，而国内对雪莲果及茎叶的研究还
较少，特别是对于具有生物活性成分酚酸类物质的
活性研究还没有相关的报道。本文通过对雪莲果叶
酚酸提取物清除羟自由基、超氧阴离子自由基、
-..+ 自由基能力的分析，对雪莲果叶酚酸的体外抗
氧化性能进行了研究，对雪莲果资源的深加工和综
合利用具有一定的理论意义和应用价值，为其开发
利用和深入研究提供科学依据。
!: 材料与方法
!;!: 材料与仪器
雪莲果叶) 由云南陆良雪莲果种植基地提供；
绿原酸标准品) 中国药品生物制品检定所；&，&,二
苯代苦味肼基自由基（-..+）) I9Q41 公司；N’R乙
醇、S$T/（AU）#、T/AF$、甲苯、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、
三氯乙酸、VA、水杨酸、双氧水、硫酸亚铁) 均为国产
分析纯。
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2011.01.092
!#$
!!#$ 型电热恒温干燥箱，%&& 型可见分光光度
计，’& 型电子恒温水浴锅，()(*+ ,#! 型旋转
蒸发仪。
!#$ 实验方法
!-&-!. 雪莲果叶酚酸提取物的制备. 称取一定量的
雪莲果干叶粉碎过筛，置于磨口三颈烧瓶中，用一定
体积的 $/乙醇在 %0下水浴提取两次，过滤合并
滤液，在 120下真空减压浓缩，浓缩液加入适量无水
乙醇，除去蛋白质和多糖等杂质后，经 3#2 树脂纯化
后得到雪莲果叶酚酸提取物。
!-&-&. 雪莲果叶酚酸还原力的测定［’］. 将雪莲果叶
酚酸提取物配成不同浓度，吸取 &-24*，加入 &-24*
磷酸缓冲溶液（ 56 7-7，-&489 : *）及 &-24* !/
;$<=（>,）7，置 20恒温水浴中反应 &4?@ 后迅速
冷却，再加入 &-24*!/的三氯醋酸，混合后离心，取
上清液 24*，加入 24* 去离子水，!-4* -!/ <=>9$
溶液。混合均匀，!4?@后于 %@4处测其吸光值，以
去离子水作为空白。
!-&-$. 雪莲果叶酚酸清除羟自由基的测定［A#!$］. 取
’-’4489 : * 6&B& !4*，A4489 : * <=CB1 !4*，A4489 : *
水杨酸#乙醇 !4*，待测溶液 !4*，定容至 !4*，混
匀后在 $%0下水浴 -2D，其中以蒸馏水为参比，在
2!@4下测吸光值。考虑待测溶液本身的吸光值不
同，以 A4489 : * <=CB1 !4*，A4489 : * 水杨酸#乙醇
!4*，不同浓度雪莲果叶酚酸提取物 !4* 和蒸馏水
!4* 作为待测液本底吸收值，测定雪莲果叶酚酸清
除羟基自由基的能力。吸光值越小，待测物清除自
由基能力越高。清除率计算公式为：
清除率（/）E ! #（+F # +F）: + G !/
式中：+#不加粗提物的空白对照吸光度；+F#加
入待测液后吸光度；+F #无显色剂时粗提物本底吸
光度。
!-&-1. 雪莲果叶酚酸清除超氧阴离子自由基的测定
. 取 -2489 : * HI?J#6>9 缓冲溶液（56 E ’-&）24*，
在 $%0水浴预热 !4?@，加入不同浓度的酚酸样品
!-4*和 &24489 : * 的邻苯三酚 -24*，混匀后于
$%0水浴反应 14?@，用 !-4* 浓盐酸终止反应，于
$&@4下测定吸光值。以相同体积蒸馏水代替样品
作为空白对照组，每个试样作三次平行实验，取平均
值。清除率计算公式为：
清除率（/）E（ +对照 # +样品）:（ +对照 # +空白）
G !/
式中：+空白#空白组吸光度值；+对照#对照组吸光度
值；+样品#待测多糖液吸光度值。
!-&-2. 雪莲果叶酚酸清除 KLL6 自由基的测定. 将
KLL6溶于少量甲苯后，用 7/乙醇配成 -!M : * 的
溶液。取 &-4*不同浓度的雪莲果叶酚酸溶液加入
&-4* KLL6 溶液中，迅速混匀，室温下避光静置
&4?@，于 2!%@4下测吸光度，以 7/乙醇作为参比。
清除率（/）E !#（+J # +I）: +8 G !/
式中：+J#&4*待测液与 &4* KLL6反应后的吸
光度；+I#样品的对照（&-4*待测液 N &-4* 7/的
乙醇）的吸光度；+8#未加样的 KLL6（&-4* KLL6 N
&-4* 2/乙醇）的吸光度。
#$ 结果与分析
#!$ 雪莲果叶酚酸还原力测定
一般情况下，样品的还原能力与抗氧化活性之
间有显著的相关性，本文取不同浓度的雪莲果叶粗
提物，按照 !-&-& 的方法进行测定，结果如图 ! 所示。
图 !. 雪莲果叶酚酸的还原力
还原力的测定可检验样品是否为良好的电子供
应者，还原力强的样品应为良好的电子供应者，其供
应的电子除了可使 <=$ N还原为 <=& N外，也可参与自
由基反应，使自由基成为稳定的物质。由图 ! 可看
出，雪莲果叶酚酸具有一定的还原能力。还原能力
随着酚酸浓度增大而增加，即提取物的还原能力与
其浓度呈线性关系。浓度低于 -!4M : 4* 时，雪莲果
叶酚酸还原能力维持在较低水平，吸光值低于 -&；
当浓度达 -24M : 4* 时，还原能力明显增加，吸光值
达到 -1’&；浓度继续增加，还原能力不断增大，可见
雪莲果叶酚酸具有较强的还原能力。
##$ 雪莲果叶酚酸对羟自由基的清除作用
取不同浓度的雪莲果叶提取液，按 !-&-$ 的方法
进行测定，结果如图 & 所示。
图 &. 酚酸提取物清除羟自由基的能力
由图 & 可以看出，雪莲果叶酚酸提取物对羟基
自由基有良好的清除作用，并且随着提取物浓度的
增加，清除作用明显增强。当酚酸浓度达到 &4M : 4*
时，清除率接近 2/；浓度继续增加，酚酸提取物的
羟自由基清除率迅速提高，当酚酸溶液浓度达到
’4M : 4*时，清除率可达 %’-&$/，说明雪莲果叶酚酸
具有很好的清除羟基自由基活性。
#%$ 雪莲果叶酚酸对超氧阴离子自由基的清除作用
采用邻苯三酚（即焦性没食子酸）自氧化法，根据
邻苯三酚在碱性条件下自氧化形成中间产物 B#& ·，此
自由基能促进邻苯三酚的自动氧化，因此通过测定
某物质对邻苯三酚自氧化的抑制作用，即可表征其
对 B #& ·的清除作用。测定不同浓度雪莲果叶酚酸
对 B #& ·的清除作用，结果见图 $。
图 $ 显示了雪莲果叶酚酸对超氧阴离子自由基
!#$
图 ! 酚酸提取物清除超氧阴离子自由基的能力
的清除能力，随着酚酸浓度的提高，对 # $% ·的清除
率呈正相关。由图可知，酚酸浓度在 &’( ) ’* 时，清
除率达到 %%+,!-；当酚酸浓度达到 ,’( ) ’*时，其对
# $% ·的清除率可达 ./-以上，说明雪莲果叶酚酸对
超氧阴离子自由基有良好的清除能力。
!#$ 雪莲果叶酚酸对 %&&’自由基的清除作用
分别取雪莲果叶粗提物、01、绿原酸标准品，配
成不同浓度的溶液，按照 &+%+. 的方法进行测定，所
得结果见图 23图 ,。
图 2 酚酸提取物对 4556自由基的清除效果
图 . 绿原酸对 4556自由基的清除效果
图 , 01 对 4556自由基的清除效果
在各种体外抗氧化分析方法中，4556法具有快
速、简便、灵敏和直接可行的优点，已被广泛用于自
由基清除剂的筛选工作中。4556 在有机溶剂中是
一种稳定的、以氮为中心的自由基，呈紫色，在 .&78’
有强吸收。若受试物能清除它，则提示受试物具有
降低羟自由基、烷自由基或过氧自由基的有效浓度
和打断脂质过氧化链反应的作用。
由以上结果来看，雪莲果叶酚酸提取物对 4556
自由基具有显著的清除作用。其中雪莲果叶酚酸提
取物、绿原酸和 01 三者对 4556 的清除率可得回归
方程：9 :$;7&+!<=% > .,&+&,= > &+/7!%（?% : /+<<77），
9 :$%2/&.=% > !%%/+!= > ;+$;%7!2=% > <%2;+.=$%+,/,&（?% : /+<<%2）。由此得
到，雪莲果粗提物、绿原酸和 01 的 @1./（清除率为
./- 时 试 样 浓 度 ）分 别 为 /+&/2、/+/&2%2、
/+//,/&&’( ) ’*。比较 @1./可知，绿原酸的 4556 清
除率略低于 01。在实验浓度范围内，酚酸提取物的
清除率随其浓度的增大而升高，且清除率与浓度间
存在一定的量效关系。
($ 结论
本研究通过邻苯三酚自氧化法、水杨酸法考察
了雪莲果叶酚酸清除氧自由基、羟基自由基的能力，
采用分光光度法测定酚酸提取物对 4556 自由基的
清除效果。雪莲果叶酚酸抗氧化活性实验表明，酚
酸提取物表现为良好的电子供体，还原能力强，对羟
基自由基、超氧阴离子和 4556自由基有一定的清除
作用，酚酸浓度对清除自由基的效果有一定的影响，
在一定浓度范围内，酚酸提取物清除自由基的效果
随样品浓度的增加，呈上升趋势，存在一定的量效关
系，为酚酸的药用机理提供了新的思路，同时也为雪
莲果叶在保健食品或药物中的开发利用提供了理论
依据。
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