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大孔树脂纯化雪莲果叶酚酸工艺的研究



全 文 :!!#
陈红惠!,,彭光华#,
(!华中农业大学食品科技学院,湖北武汉 #$%%&%;
’云南文山师范高等专科学校生化系,云南文山 (($%%%;
$西藏自治区质量技术监督局,西藏拉萨 )#%%%%)
摘* 要:以雪莲果叶中的酚酸为纯化对象,通过对 + 种大孔吸附树脂对雪莲果叶酚酸的静态吸附性能研究,筛选出,-)
型树脂为适合雪莲果叶酚酸的吸附树脂,并对雪莲果叶酚酸在树脂上的吸附、解吸特性和吸附动力学行为进行了研
究。结果表明:,-) 树脂对雪莲果叶酚酸的静态吸附率为 &&%’.,解吸率为 /!#!.。本实验的纯化工艺条件为:上
样液 01$%,上样液浓度 !$+#23 4 25,上柱流速 !25 4 267,解吸剂乙醇浓度 )%.,洗脱流速 !25 4 267,解吸率为
/+)’.,采用上述纯化工艺,可将雪莲果叶酚酸纯度提高到 #(+.。
关键词:雪莲果叶,酚酸,纯化,大孔吸附树脂
$%&’( )* +&,-.(-*/ +,)0122 ). +31*)4-0 50-’
-* (50)* 415612 7( 850,)+),)&2 ,12-*
!#$ %&’-()*!,’,+#$, ,)-&’-()-$,
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中图分类号:C@’%!!* * * * 文献标识码:G* * * * 文 章 编 号:!%%’-%$%((’%%/)!’-%’’+-%)
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[(]康吟,陶宁萍,王锡昌 喷雾干燥法制取宝石鱼油微胶囊
技术的研究(!)[U]现代食品科技,’%%&,’$(&):)/-(’
[&]吴克刚,郑东方,柴向华 辛烯基琥珀酸淀粉微胶囊化浓
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* * 雪莲果(!#$$#%&’() )*%+’,-*$,(),俗名 称雪莲薯、亚龙果、亚贡,为菊科多年生草本植物,原
产于南美洲安第斯山脉[!]。雪莲果含有较高的低聚
果糖和多种活性成分,可预防肥胖、便秘及肠道疾
病,降低血脂和胆固醇,具有提高人体免疫功能等功
效[’-$]。研究表明,雪莲果叶酚酸提取物中含有绿原
收稿日期:’%%/-%’-’(* 通讯联系人
作者简介:陈红惠(!/&/-),女,硕士研究生,讲师,主要从事食品的分
析、开发。
酸、咖啡酸、阿魏酸和原儿茶酸等活性物质,具有清
除体内自由基及抗脂质过氧化、降低血糖水平、提高
机体免疫力、抗肿瘤、抗菌、抗病毒和抑制血栓形成、
显著增加皮肤通透性等作用[#-(]。近年来雪莲果叶
酚酸物质在医药、食品、化妆品等领域中在国外已有
初步的研究和应用,雪莲果叶酚酸的研究和开发具
有广阔的市场前景。目前植物酚酸纯化的方法主
要有沉淀法、酸碱法、萃取法、吸附法、层析法、超临
界萃取法等。大孔吸附树脂与凝胶树脂及天然吸
附剂相比,利用大孔树脂吸附法提取酚酸类物质具
DOI:10.13386/j.issn1002-0306.2009.12.007
!!#
有工艺简单、选择性强、吸附量大、吸附速度快、解
吸容易、成本低,可反复使用,容易实现大规模生产
等优点,尤其适合于从水溶液中分离低极性或非极
性的化合物,近年来逐渐成为酚酸类物质纯化的一
种有效方法。目前国内外使用大孔树脂对雪莲果
叶酚酸提取液纯化还未见报道,本文研究了 ! 种大
孔树脂对雪莲果叶酚酸的吸附情况,筛选出一种对
雪莲果叶酚酸具有良好吸附解吸性能的树脂,考察
了此树脂对雪莲果叶酚酸的静态、动态吸附与解吸
性能及主要影响因素,确立了雪莲果叶酚酸纯化的
工艺参数,为雪莲果叶酚酸的开发利用提供技术
基础。
! 材料与方法
!#! 材料与仪器
雪莲果叶 由云南陆良雪莲果种植基地提供;
#$% !、& % !、’()(、’#*)(、+,# % -、’(.))、/%0、
12’()) 型大孔吸附树脂 三星树脂公司;没食子酸
标准品 &3456 公司;7893:% ;38<69=>? 自制;甲醇、
乙醇、丙酮 均为国产分析纯。
@** 型可见分光光度计,!))* 型电子恒温水浴
锅,ABAC# +%())) 型旋转蒸发仪,&1$%1D#型循环
水式多用真空泵,电子天平,玻璃层析柱(!*<5 E
F)<5),恒温水浴振荡器。
!#$ 实验方法
(G*G( 大孔树脂的预处理与再生[@] 大孔树脂的预
处理:树脂使用前先用 -0H乙醇充分浸泡大孔树脂
*.I,使湿树脂再度水合,从树脂孔中赶走气泡,然后
装柱,用 -0H乙醇淋洗至流出液加水不呈白色混浊,
再用蒸馏水洗至无醇,接着用 FJ0$K 的 0H 1;9 淋
洗并浸泡 !I,水洗至中性后用 FJ0$K 的 0H +6L1
溶液淋洗并浸泡 !I,水洗至中性,然后将大孔树脂倒
入广口瓶中,用蒸馏水浸泡,备用。
大孔树脂的再生:树脂使用后可用含量为 -0H
的乙醇洗脱树脂柱至流出液为无色,用大量水洗去
乙醇,然后在柱上端加入 0H +6L1溶液浸泡 (*I,最
后用水洗至下口流出液为中性即可再用。
(G*G* 上样液的制备 称取一定量雪莲果叶干粉,
用 F)H乙醇溶液,在 -0M预处理 (053:,料液比为
(N.),@)M下提取 * 次,每次 (I,真空浓缩后微孔滤
膜过滤,除去浓缩液中的悬浮物及大分子化合物,得
到雪莲果叶粗提液即吸附样品液。
(G*GF 酚酸的测定[!]
(G*GFG( 标准曲线的绘制 以没食子酸为标样,准确
吸取浓度为 ())4 O 5C 的没食子酸溶液 )G*0、)G.)、
)G00、)G@)、)G!05C于 ()5C 容量瓶中,分别加蒸馏水
补至 !G))5C,再各加入稀释 () 倍的 7893:%;38<69=>?
试剂 (5C,充分振荡后静置 FJ.53:,分别加入 (5C
()H的 +6*;LF 溶液,摇匀置于 F0M恒温水浴中反应
(053:,同时做空白实验,于 @P):5 下测定吸光度。
以浓度对吸光度进行线性回归,得回归方程:B Q
)G)!.0/ R)G))..,相关系数 S* Q )G---@。
(G*GFG* 样品测定方法 将雪莲果叶提取液过滤并
定容,从中准确吸取 (5C,然后按标准曲线制备进行
显色反应,测定其吸光值,根据回归方程计算提取液
浓度,进一步计算出酚酸提取量。
提取量(以没食子酸计,54 O 4)Q(6(K()O(K*T)
式中:6(:样液中酚酸的含量 54;K(:样液的体积
5C;K*:测定取样液的体积 5C;T:称样量 4。
(G*G. 大孔树脂的选择[-%(F] 分别称取经预处理的
#$%!、&%!、’()(、’#*)(、+,#%-、’(.))、12’())、
/%0型 ! 种大孔吸附树脂各 F4,置于 *0)5C 具塞磨
口三角瓶中,加入 0)5C 一定浓度的雪莲果叶粗提
液,置恒温水浴振荡器上吸附 *.I,温度为 *0M,振
荡频率为 (*)U O 53:。滤去上清液,用少量清水洗涤
树脂,然后加入 0)5C P)H乙醇振荡 *.I,充分解吸,
测定溶液中酚酸的含量,计算各树脂的饱和吸附量、
吸附率及解吸率。
吸附量(54 O 4)Q(;)%;()K O V((%6)
吸附率 Q[(;)%;()O ;)]E ())H
解吸率 Q[;* O(;)%;()]E ())H
式中:;)、;(:分别为吸附前后供试液的酚酸浓
度(54 O 5C);;*:解吸液中酚酸浓度(54 O 5C);K:供
试液体积( 5C);V:树脂湿重( 4);6:树脂含水
量(H)。
(G*G0 静态吸附动力学特性测定 选择 ’(.))、
/%0、12’()) 这三种较适宜吸附酚酸的树脂进行考
察其吸附速率。准确称取预处理好的以上三种滤干
树脂各 F4,每种树脂 ! 份,装入具塞磨口三角瓶中,
精密加入一定浓度的雪莲果叶粗提液 *)5C,置恒温
水浴振荡器上 *0M、(*)U O 53: 振荡,每隔 )G0I 取一
个样测定溶液中酚酸含量,以吸附量对时间作图,绘
制静态吸附动力学曲线。
(G*GP 静态吸附热力学特性测定 分别称取 F4 /%0
树脂 P 份,精密加入不同浓度的雪莲果叶粗提液
*)5C,置 *0M恒温水浴振荡器上 (*)U O 53:振荡 *.I,
过滤,测定其上清液的酚酸含量,以吸附量对吸附原
液浓度作图,绘制吸附等温线。
(G*G@ 动态吸附与解吸实验 取一定量 /%0 树脂,
湿法装柱,将一定质量浓度的雪莲果叶粗提液以一
定流速进样吸附。饱和吸附后用蒸馏水洗树脂至流
出液无色,再用一定体积分数的乙醇溶液洗脱,分步
收集解吸液,测定流出液中酚酸浓度。以流出液体
积为横坐标,总酚酸浓度为纵坐标,绘制 /%0 大孔树
脂对雪莲果叶酚酸的动态吸附曲线图。
$ 结果与分析
$#! 树脂的筛选
考察了 ! 种不同型号的树脂对雪莲果叶酚酸的
吸附选择性,经静态吸附和解吸后,得到不同树脂的
静态吸附量、吸附率和解吸率,结果如表 ( 所示。
由表 ( 可看出,&%! 虽然有较高的吸附能力,吸
附率可达 -)G)0H,但是其解吸率很低,为 (.G0FH,很
难将酚酸解吸出来,故 &%! 不适合作为雪莲果叶酚
酸的纯化,在其他相对吸附能力较高的树脂中,虽然
/%0 吸附率比 12’()) 要略低一点,但综合考虑其解
吸能力要高于 12’()) 树脂,故本实验选择 /%0 作
为纯化树脂。
!#$
表 ! 不同树脂静态吸附与解吸性能情况
树脂型号
吸附量
(#$ % $)
吸附率
(&)
解吸率
(&)
’()* +,-. +/,*. -0,+0
1)* -,!* -2,23 !4,3/
5!2! +,*0 +0,/2 *-,2*
5’02! +,/! +!,0+ *-,.4
67’)- 3,23 44,32 .*,*0
5!422 4,.0 ++,4- *+,+!
8)3 +,!4 ..,20 -!,4!
9:5!22 +,3. .-,!! *4,*3
!!# 树脂静态吸附动力学特性测定
在吸附时间充分时,不同树脂有不同的饱和吸
附量,其吸附动力学过程也是有差异的。本实验考
察了三种树脂的吸附动力学过程。以吸附量对时间
作图,绘制吸附动力学曲线,如图 ! 所示。
图 ! 动力学曲线
由图 ! 可看出,2;4< 内树脂的吸附速率随时间
的增加而迅速下降,然后逐渐趋向饱和,在 4< 左右
能达到饱和吸附,可见树脂对雪莲果叶酚酸的吸附
属快速吸附平衡型。在吸附曲线中,各树脂的静态
吸附量有一定的差别,其中以 9:5!22 的吸附量最
大,达到 -,2.#$ % $,8)3 次之,为 .,30#$ % $,说明了大
孔树脂对雪莲果叶酚酸的吸附有一定的选择性,其
吸附能力因不同的树脂而有较大的变化。
!$# 树脂静态吸附热力学特性测定
研究 03=时 8)3 树脂在不同雪莲果叶酚酸提
取液浓度下的吸附情况,以浓度为横坐标,吸附量为
纵坐标,绘制吸附等温线如图 0 所示。由图 0 可看
出,树脂吸附量随着样液浓度的增加而提高,当达到
一定浓度时吸附量能达到吸附平衡。
图 0 吸附等温线
采用 >?@$#ABC和 DCEA@FGBH< 吸附等温式对吸附
等温线进行线性回归,如图 /、图 4 所示,树脂对雪莲
果叶酚酸的吸附方程和 >?@$#ABC、DCEA@FGBH< 参数如
表 0 所示。DCEA@FGBH<方程表明 8)3 树脂对雪莲果
叶酚酸表现出良好的吸附行为,其相关系数 2,--4+
高于 >?@$#ABC方程的相关系数 2,-.-0。
图 / >?@$#ABC线性回归
图 4 DCEA@FGBH<线性回归
表 0 8)3 树脂对雪莲果叶酚酸 03=吸附方程
吸附等温方程 方程关系式 参数
>?@$#ABC I J 4!,!/*3H %(! K 2,/03H) I
# J !0+,3*2
L J 2,/03
DCEA@FGBH< I J /2,00/H2, .*!!
@ J !,0*2
M J /2,00/
注:式中:H—平衡浓度(#$ % #>);I— 吸附量(#$ % $);I#— 饱
和吸附量(#$ % $);L— 吸附平衡常数;M—平衡吸附系数;@—常
数。
!%# &’( 树脂对酚酸吸附条件的选择
0,4,! 上样浓度对吸附量的影响 将雪莲果叶酚酸
浓缩液加水稀释成不同浓度的上样液,进行动态吸
附实验。结果如图 3 所示,随着酚酸浓度的提高,酚
酸的吸附量也随着增加,当样液浓度为 !,/*4#$ % #>
时,其吸附量增加至 04,+/#$ % $,但当样液浓度继续
增加时,吸附量却随着样液浓度的增加而减少,这是
由于随着样液浓度的增加,与总酚酸竞争吸附的杂
质量也随之增加,酚酸等物质在树脂内部扩散能力
降低,导致树脂吸附量有所下降。因此,提高上样质
量浓度有利于提高树脂的使用效率。但上样质量浓
度不宜过高,否则上样液会出现浑浊,对树脂造成污
染和堵塞,降低其吸附能力,由实验结果可知原料液
的初始浓度以 !,/*4#$ % #>左右为宜。
图 3 上样浓度对树脂吸附的影响
0,4,0 上柱流速对吸附量的影响 取 8)3 树脂 3$
上柱,将浓度为 2,!.3#$ % #> 的雪莲果叶酚酸提取
液,分别以 2,3、!,2、!,3、0,2、0,3#> % #B@的流速进入树
脂柱中进行吸附实验,考察不同进样流速对树脂吸
附量的影响。当流出液吸光值达上样液的 ! % !2 时,
!#$
认为酚酸已经透过,停止上样,测定流出液酚酸含
量,结果如图 ! 所示。
图 ! 上样流速对吸附量的影响
由图 ! 可看出,流速不同,树脂到达泄漏点时的
吸附量也不同,流速太快,酚酸溶液跟树脂的接触时
间短,溶质分子来不及扩散到树脂的表面,就会提早
泄漏,树脂吸附率降低,从而影响树脂吸附效果。流
速小能使雪莲果叶酚酸物质有足够的时间与树脂的
内表面接触,有利于树脂的吸附,减少酚酸的漏出
量,从而提高其吸附率。但流速过小,会影响生产效
率。从本实验来看,上柱流速为 #$%&’ ( &)* 时,树脂
吸附量最大,随着流速加快,达到 +$%&’ ( &)* 时,样
液泄漏体积明显提前,吸附量也大大降低,因此,在
实际生产中,综合考虑各方面因素,选择上样流速为
,$#&’ ( &)*左右较适当。
+$-$. 料液 /0 对吸附量的影响 由于雪莲果叶酚
酸呈酚酸结构,其提取液呈弱酸性,要提高吸附效果
必须在弱酸性条件下。用酸调节浓度为 #$.!+&1 ( &’
的提取原液采用不同 /0 的溶液,进行动态吸附实
验,结果如图 2 所示。
图 2 /0对吸附量的影响
由图 2 可看出,随着 /0 的降低,树脂对雪莲果
叶酚酸的吸附量先升高后略有降低,当 /0 为 . 时,
34%树脂对雪莲果叶酚酸的吸附量最大达到
,,$#%&1 ( 1,当 /0 5. 时,随着 /0 的增加,34% 树脂
对雪莲果叶酚酸的吸附量下降,原因可能是 /0 影响
酚酸物质在溶液中的存在状态,雪莲果叶酚酸是弱
酸性物质,其酚羟基上的 0 6解离出来以离子形式存
在于溶液中,而吸附物质以离子形态存在时不易被
树脂吸附,只有以分子态存在时才易被所用的树脂
吸附。结合实验结果来看,/0 为 . 的条件较适于
34%树脂吸附雪莲果叶酚酸。
+$-$- 温度对吸附量的影响 称取 %1经预处理好的
34% 树脂 - 份,置于 +%#&’的具塞三角烧瓶中,精确
加入浓度为 #$,!2&1 ( &’的样品液 %#&’,分别在 +#、
+%、.%、-%7下静态吸附 !8 后,过滤测定溶液中酚酸
含量,比较温度对吸附量的影响,结果如图 9 所示。
由图 9 可看出,随着温度的升高,酚酸的吸附量
图 9 温度对吸附量的影响
略有降低,在 +#7和 +%7时吸附量略高于 .%7和
-%7,但变化不大。结果表明,温度对酚酸的吸附性
能影响较小,故在室温下进行吸附即可。
!#$ %&# 树脂洗脱条件对洗脱效果的影响
+$%$, 解吸剂种类的选择 洗脱剂应根据树脂对吸
附成分的吸附能力强弱来决定,一般来说,对非极性
和弱极性大孔树脂,洗脱剂极性越小,洗脱能力越
强;对中等极性大孔树脂和极性较大的化合物来说,
则用极性较大的溶剂较为合适。34% 树脂吸附雪莲
果叶中酚酸后,采用酚酸溶解度较高的溶剂如甲醇、
乙醇、丙酮等作洗脱剂,比较不同溶剂对其洗脱效果
的影响。称取 ,1已吸附饱和的 34% 树脂 - 份,分别
加入相同浓度(9#:)的甲醇、乙醇、丙酮和水溶液作
为解吸剂,室温振荡解吸 -8,测定解吸液的酚酸含
量,计算解吸率,结果如图 ; 所示。
图 ; 不同解吸剂对解吸率的影响
由图 ; 可看出,甲醇、乙醇、丙酮的洗脱效果远
好于水溶液,其中,甲醇的洗脱效果最好,静态洗脱
率可达 ;#$%,:,乙醇和丙酮的洗脱效果则稍差一些,
洗脱率分别为 2#$%9:和 -2$--:,而水的洗脱效果最
差,洗脱率只有 9$#;:。考虑到甲醇和丙酮的毒性
较大,用作洗脱剂不安全,对人体有很大危害,而水
的解吸率又太低,故从安全和操作简便性考虑,选用
乙醇作为雪莲果叶酚酸的解吸剂。
+$%$+ 不同浓度乙醇对洗脱效果的影响 研究不同
浓度乙醇对雪莲果叶酚酸的洗脱效果,称取 %1 已饱
和吸附的 34% 树脂 ; 份,分别用不同浓度的乙醇溶
液进行静态解吸 %8,测定解吸液中酚酸含量,结果如
图 ,# 所示。
由图 ,# 可以看出,随着乙醇浓度增加,洗脱液
中酚酸浓度和洗脱率不断增大,浓度从 ,#:到 %#:
时,酚酸解吸率在逐渐增加,当浓度为 %#:时解吸率
最高,达到 ;%$9;:,再增加乙醇的浓度,洗脱液中醇
溶性杂质增加,洗脱液中酚酸浓度和洗脱率反而下
降,当乙醇浓度为 ;#:时,解吸率降低为 2,$%.:。
因此,选择 %#:乙醇作为洗脱剂能得到较高的解吸
率和纯度。
!!#
图 !# 解吸剂浓度对解吸率的影响
$%&%’# 洗脱流速的确定# 取 &( 饱和吸附的 )*& 树
脂 + 份,用蒸馏水冲洗至无色后,分别在不同的流速
下用 &,- &.乙醇溶液洗脱,收集洗脱液,测定洗
脱液的酚酸含量,由此获得流速对大孔树脂解吸效
果的影响,结果如图 !! 所示。
图 !!# 洗脱剂流速对洗脱效果的影响
由图 !!可看出,流速对洗脱效果有明显影响,解
吸剂流速越快,酚酸解吸率越低,流速为 %&,- / ,01时
解吸率最高,为 2$%$3.,当流速增加到 $,- / ,01 时,
解吸率降低到 3&%$&.。可见,随着洗脱流速的加快,
洗脱剂未能与被解吸的树脂充分作用,使得洗脱出来
的酚酸物质含量减少,而且流速过快,洗脱性能差,洗
脱带宽,拖尾严重,但流速过慢又会影响生产效率,延
长作业周期,因此解吸流速控制在 !,- / ,01为宜。
$%&%+# 洗脱剂最大洗脱体积的确定# 取 &( 饱和吸附
的 )*&树脂上柱,用 &.的乙醇洗脱,流速 !,- / ,01,
每隔 &,01分步收集,紫外观察酚酸的洗脱情况,直
到无酚酸洗脱出来为至,由此获得解吸液的最大体
积,结果发现,当解吸液为 !,- 时,雪莲果叶酚酸
几乎被完全洗脱下来,因此,&( )*& 树脂用 &.乙
醇洗脱宜以 !,-的用量进行洗脱。
$%&%&# 动态洗脱曲线# 将已知浓度的雪莲果叶酚酸
提取液以 !,- / ,01的速度进样,吸附饱和后,先用少
量水洗去树脂表面的糖类及杂质,再用 !,- &.
乙醇洗脱,洗脱速度为 !,- / ,01,分步收集洗脱液,
测定洗脱液中的酚酸含量,绘制洗脱曲线如图 !$
所示。
图 !$# )*& 树脂动态洗脱曲线
# # 由图 !$ 可以看出,)*& 树脂在动态条件下极易
洗脱,只需少量的洗脱剂就能将树脂中的酚酸洗脱
下来,酚酸物质的洗脱峰窄且集中,无拖尾,被解吸
的酚酸主要集中在 !4’,- 体积范围,洗脱液中的
雪莲果叶酚酸含量较高,!,- 的解吸剂能将吸附
的酚酸基本洗脱下来,解吸率达 23%&$.。
! 结论
# # 本实验以大孔吸附树脂对醇提得到的雪莲果叶
酚酸进行分离纯化,从 3 种树脂中筛选出 )*& 型大
孔吸附树脂适合用于分离雪莲果叶酚酸,并对影响
树脂吸附分离的各种因素进行分析,得到最佳分离
条件:在上样液酚酸浓度为 !%’3+,( / ,-,上样液 56
为 ’,流速为 !,- / ,01条件下进行吸附,用 &.乙醇
以 !,- / ,01的流速进行洗脱可基本将雪莲果叶酚酸
完全从树脂上洗脱下来,洗脱峰集中无明显拖尾现
象,洗脱解吸率为 23%&$.,通过此纯化工艺雪莲果叶
酚酸纯度可达 +7%3.。通过本实验,雪莲果叶经过
醇提工艺后,采用大孔吸附树脂选择性吸附雪莲果
叶酚酸,效率高,得率大,可为雪莲果叶的资源开发
提供技术参考。
参考文献
[!]89:;< =0,>1>?@A<,B9:1< C>?A,=<,> D1;9:1@E:A,:F B1?:@F0(1 >H 5I:1>G0J 1(!#$$#%&’() )*%+’,-*$,())
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性[N]%食品研究与开发,$7,$P(7):!P2*!3%
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研究概况[N]%中草药,$7,’P(+):7’’*7’7%
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酸、总黄酮的分离研究[ N]%林产化学与工业,$+,$+(’):
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[3]郭娟,艾志录,崔建涛,等 %苹果渣中多酚物质的福林法测
定[N]%食品工业科技,$7,$P($):!P3*!3%
[2]金莹,孙爱东 %大孔树脂纯化苹果多酚的研究 %食品科学
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研究[N]%农业工程学报,$P,$’(2):$’2*$+&%
[!!]王化田,龚钢明 %大孔树脂纯化红景天甙工艺的研究
[N]%食品科学,$P,$3($):!!P*!$%
[!$]于荣,廖晓峰 %YTD 大孔树脂分离纯化栀子中的熊果酸
[N]%食品研究与开发,$P,$3(2):7P*P!%
[!’]艾心灵,王洪新,朱松 %大孔树脂吸附分离烟草绿原酸的
研究[N]%天然产物研究与开发,$3,$:!7!*!7+%