全 文 ：浙江科技学院学报，第２５卷第１期，２０１３年２月
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
Ｖｏｌ．２５Ｎｏ．１，Ｆｅｂ．２０１３
ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７１－８７９８．２０１３．０１．００８
收稿日期：２０１２－１２－１１
基金项目：浙江省科技计划项目（２０１２Ｃ２２０２６）
作者简介：陈丽春（１９７５—　），女，副教授，硕士，主要从事天然产物与功能性食品的研究与开发。
液相色谱法测定洋甘菊中芹菜苷质量浓度研究
陈丽春１，２，王菲菲１
（１．浙江科技学院 生物与化学工程学院，杭州３１００２３；２．浙江省农产品化学与生物加工技术重点实验室，杭州３１００２３）
摘　要：探讨了用高效液相色谱仪检测洋甘菊中芹菜苷质量浓度的方法，并测定了样品中芹菜苷的质量浓度。
采用依利特Ｓｉｎｏｃｈｒｏｍ　ＯＤＳ－ＢＰ柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ），流动相为甲醇－１％乙酸（体积比为６０∶４０），流速
１．０ｍＬ／ｍｉｎ，柱温２５℃，检测波长３３３ｎｍ，作为测定样品中芹菜苷质量浓度的条件。结果表明，芹菜苷在
０．９９９　９～９９．９９μｇ／ｍＬ质量浓度线性范围内线性关系良好，Ｒ
２＝０．９９９　９，平均回收率为１．０４％，ＲＳＤ＝
１．８７％，测得芹菜苷在洋甘菊中的质量浓度为８３．２０５ｍｇ／Ｌ。此方法快速、简便、准确，可用于洋甘菊中芹菜
苷的 ＨＰＬＣ测定。
关键词：高效液相色谱法；洋甘菊；芹菜苷；黄酮
中图分类号：Ｒ２８４．１；Ｏ６５７．７２　　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１６７１－８７９８（２０１３）０１－００３８－０４
Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｐｉｇｅｎｉｎ　ｉｎ　ｃｈａｍｏｍｉｌｅ　ｂｙ　ＨＰＬＣ
ＣＨＥＮＧ　Ｌｉｃｈｕｎ１，２，ＷＡＮＧ　Ｆｅｉｆｅｉ　１
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　ａｎｄ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，
Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００２３，Ｃｈｉｎａ；２．Ｚｈｅｊｉａｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｉａｌ　Ｋｅｙ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　ｆｏｒ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　ａｎｄ　Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ
Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ｏｆ　Ｆａｒｍ　Ｐｒｏｄｕｃｅｓ，Ｈａｎｇｚｈｏｕ　３１００２３，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｗｅ　ｍａｉｎｌｙ　ｄｉｓｃｕｓｓ　ｔｈｅ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ　ｕｓｉｎｇ　ｈｉｇｈ　ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　ｌｉｑｕｉｄ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈ　ｄｅｔｅｃｔ
ｔｏ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ａｐｉｇｅｎｉｎ　ｉｎ　ｃｈａｍｏｍｉｌｅ．ＨＰＬＣ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｃａｒｒｉｅｄ　ｏｕｔ　ｉｎ　ａ　Ｓｉｎｏｃｈｒｏｍ　ＯＤＳ－ＢＰ
ｃｏｌｕｍｎ（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）ｏｆ　ｅｌｉｔｅ　ｗｉｔｈ　ｍｅｔｈａｎｏｌ－１％ａｃｅｔｉｃ　ａｃｉｄ（ｖｏｌｕｍｅ　ｒａｔｉｏ　６０∶４０）
ａｓ　ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ　ａｔ　ａ　ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ　ｏｆ　１．０ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅ　ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｗａｓ　２５ ℃ ａｎｄ　ｔｈｅ
ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ　ｗａｓ　３３３ｎｍ，ａｓ　ｔｈｅ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｔｏ　ｄｅｔｅｃｔ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｐｉｇｅｎｉｎ　ｉｎ
ｃｈａｍｏｍｉｌｅ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈｅｒｅ　ｉｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｌｉｎｅａｒ　ｒａｎｇｅ　ｉｎ　０．９９９　９－９９．９９μｇ／ｍＬ，Ｒ
２＝
０．９９９　９，ａｎｄ　ｔｈｅ　ａｖｅｒａｇｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｉｓ　１．０４％，ＲＳＤ＝１．８７％．Ｔｈｅ　ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｐｉｇｅｎｉｎ　ｉｎ
ｃｈａｍｏｍｉｌｅ　ｂｙ　ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　８３．２０５ｍｇ／Ｌ．Ｔｈｉｓ　ｍｅｔｈｏｄ　ｉｓ　ｒａｐｉｄ，ａｃｃｕｒａｔｅ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｌｅ　ｆｏｒ
ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｐｉｇｅｎｉｎ　ｉｎ　ｃｈａｍｏｍｉｌｅ　ｂｙ　ＨＰＬＣ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：ＨＰＬＣ；ｃｈａｍｏｍｉｌｅ；ａｐｉｇｅｎｉｎ；ｆｌａｖｏｎｅ
洋甘菊又称母菊，主要分德国洋甘菊和罗马洋甘菊两种。为菊科甘菊属的花序或全草，一年生或两
年生草本植物。主要产于东欧、埃及、北美、比利时、英国等国家，为一种重要的药用植物和香料植物。洋
甘菊在欧洲、美国及日本等地早已被广泛利用，成为众所周知的药用植物和香料植物，不少国家加以大面
积机械化生产。洋甘菊花朵具有水果香，主要含有挥发油、黄酮类、愈创薁内酯、香豆素类等成分。作为
一种引进植物，洋甘菊在中国尚未得到充分的开发及利用［１－３］。大量的实验表明，洋甘菊具有消炎、抑制
真菌、解痉等作用［４－６］，具有显著的社会经济效益。
芹菜苷为洋甘菊中的一种活性黄酮类物质［７］，可作为平滑肌的解痉剂，醛糖还原酶抑制剂和镇静剂。
由于对洋甘菊中芹菜苷质量浓度的研究较少，本研究采用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）［８－１１］建立了 ＨＰＬＣ测
定芹菜苷质量浓度的方法，为更好地研究洋甘菊的药用价值和具体成分提供理论依据。
１　材料与方法
１．１　材料与试剂
芹菜苷标准品（批号２０１１０９０８，上海永恒生物科技有限公司），色谱甲醇（Ｔｅｄｉａ，Ｕｎｉｔｅｄ　Ｓｔａｔｅｓ　ｏｆ
Ａｍｅｒｉｃａ），优级纯乙酸（上海国药集团化学试剂有限公司），其他试剂均为分析纯，洋甘菊（新疆种植，购于
杭州滨江艺福堂）。
１．２　仪器与设备
仪器设备：日本岛津高效液相色谱仪（型号规格：ＬＣ－２０ＡＤ，配有ＳＰＤ－２０Ａ可变波长紫外检测器，
ＣＴＯ－２０Ａ柱温箱，手动进样阀），超纯水器（Ｄｉｒｅｃｔ－Ｑ?３，ＭＩＬＬＩＰＯＲＥ，ｍａｄｅ　ｉｎ　Ｆｒａｎｃｅ），ＫＱ－５０Ｅ型超声
波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），玻璃砂芯过滤装置（上海兴亚净化材料厂），ＧＺＸ－９０７６ＭＢＥ电热
鼓风干燥箱（上海博讯实业有限公司）。
１．３　标准品储备液和供试品的制备
标准品储备液的配置：精密称取５．０５ｍｇ芹菜苷标准品（质量分数大于９９％），用色谱级甲醇溶解配
置质量浓度为０．４９９　９５ｍｇ／ｍＬ芹菜苷标准品储备液，摇匀，用０．２２μｍ膜过滤。根据实验需要，稀释配
成所需质量浓度。
供试品的制备：精密称取干燥洋甘菊（过４０目筛）１２６．４ｇ，以７０％乙醇，料液比为１∶１８，在７０℃下回流
浸提２．５ｈ，抽滤，再称定质量，７０％乙醇补足失重，摇匀，用微孔滤膜（０．２２μｍ）过滤，取续滤液，即得。
１．４　色谱条件
色谱柱：依利特Ｓｉｎｏｃｈｒｏｍ　ＯＤＳ－ＢＰ柱（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相为甲醇（Ａ）－１％乙酸水溶
液（Ｂ），洗脱条件为：Ｖ（Ａ）∶Ｖ（Ｂ）＝４０∶６０；流速：１．０ｍＬ／ｍｉｎ；柱温：２５℃；检测（紫外）波长：３３３ｎｍ；进
样量：１０μＬ。
２　结果与分析
２．１　方法学试验
２．１．１　线性关系考察
图１　芹菜苷标准曲线图
Ｆｉｇ．１　Ｓｔａｎｄａｒｄ　ｃｕｒｖｅ　ｏｆ　ａｐｉｇｅｎｉｎ
用移液枪精密量取上述标准品储备液配置成质量浓
度分别为０．９９９　９、１．９９９　８、３．９９９　６、４．９９９　５、２４．９９７　５、
３９．９９６　０、４９．９９５　０、９９．９９０　０μｇ／ｍＬ的标准品溶液。在
上述色谱条件下检测峰面积，平行测定５次，以质量浓度
为横坐标，峰面积为纵坐标作图，绘制标准曲线。芹菜苷
的线性回归方程为：ｙ＝４１　６１６ｘ－３　０１３．３，Ｒ２＝０．９９９　９。
结果表明，芹菜苷在０．９９９　９～９９．９９μｇ／ｍＬ间线性关系
良好（图１）。
９３第１期 陈丽春，等：液相色谱法测定洋甘菊中芹菜苷质量浓度研究
２．１．２　精密度考察
日内精密度：在上述色谱条件下，将２．９９９　７μｇ／ｍＬ的标准品溶液在０、２、４、６、８ｈ，进行测定，记录
色谱峰面积，连续进样５次，测定峰面积，计算峰面积的ＲＳＤ％＝１．６８％。
日间精密度：在上述色谱条件下，将对照品溶液连续３ｄ，每天进样２次，测定峰面积，计算峰面积的
ＲＳＤ％＝１．９４％。结果表明，此方法的精密度良好。
２．１．３　重现性考察
取洋苷菊提取液１ｍＬ置于１０ｍＬ容量瓶中，用色谱甲醇定容至刻度，平行制备５份溶液，分别取适
量溶液于１．５ｍＬ进样瓶中，用０．４５μｍ微孔滤膜过滤，在上述色谱条件下进行ＨＰＬＣ分析，分别测定峰
面积，计算峰面积的ＲＳＤ％＝２．１１％。结果表明，此方法的重复性良好。
２．１．４　稳定性考察
取一份样品溶液，用０．２２μｍ微孔滤膜过滤，取适量溶液于１．５ｍＬ进样瓶中，分别在０、２、４、８、１２、
２４ｈ进样，在上述色谱条件下进行 ＨＰＬＣ分析，分别进行峰面积的测定，计算峰面积的ＲＳＤ％＝２．２８％。
结果表明，此方法在室温下２４ｈ内的稳定性良好。
２．１．５　加样回收试验
取１ｍＬ洋甘菊提取物，稀释１０倍定容，加入芹菜苷标准品３７．３μｇ，用５ｍＬ的容量瓶定容，即为加
标试样。平行制备５组溶液，用０．２２μｍ微孔滤膜过滤，在上述色谱条件下进行 ＨＰＬＣ分析，分别测定
峰面积，从而计算平均回收率为１．０４％，ＲＳＤ％＝１．８７％（表１）。
平均加标回收率＝
加标试样测定值－试样测定值
加标量 ×１００％
表１　芹菜苷加样回收试验结果
Ｔａｂｌｅ　１　Ｓａｍｐｌｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ　ｔｅｓｔ　ｏｆ　ａｐｉｇｅｎｉｎ
样品
试样中芹菜苷质量浓度
的峰面积／（μＶ·ｓ）
样品稀释５倍
的芹菜苷量／μｇ
加标试样中芹菜苷质量
浓度的峰面积／（μＶ·ｓ）
芹菜苷总测
得量／μｇ
回收率／％
平均回
收率／％
ＲＳＤ／％
１　 ３３８　１９４，４　 １６．３９８　 ２３３　３３４　５．７　 ５６．１４０　９　 １．０７
２　 ３４２　４３７．６　 １６．６０２　 ２３１　８８１　４．７　 ５５．７９１　７　 １．０５
３　 ３４３　８２０．９　 １６．６６８　 ２３１　３３１　３．２　 ５５．６５９　５　 １．０５
４　 ３４５　７２４，３　 １６，７６０　 ２２８　０２２　０．８　 ５４．８６４　３　 １．０２
５　 ３４６　０９５．１　 １６．７７８　 ２２８　６５２　３．５　 ５５．０１５　８　 １．０３
１．０４　 １．８７
３　分析与讨论
３．１　样品的测定与分析
在上述色谱条件下进行 ＨＰＬＣ分析，测定峰面积，保留时间在２３．７４８ｍｉｎ处为芹菜苷，代入标准曲
线计算芹菜苷的质量浓度。测得芹菜苷在洋甘菊中的质量浓度为８３．２０５ｍｇ／Ｌ（图２，图３）。
图２　洋甘菊提取物的 ＨＰＬＣ图谱
Ｆｉｇ．２　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｃｈａｍｏｍｉｌｅ　ｅｘｔｒａｃｔ
０４ 浙江科技学院学报 第２５卷
图３　洋甘菊提取物加芹菜苷标准品的 ＨＰＬＣ图谱
Ｆｉｇ．３　ＨＰＬＣ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｍ　ｏｆ　ｃｈａｍｏｍｉｌｅ　ｅｘｔｒａｃｔ　ａｄｄｉｎｇ　ａｐｉｇｅｎｉｎ　ｓｔａｎｄａｒｄ　ｓｕｂｓｔａｎｃｅ
３．２　讨　论
３．２．１　提取溶剂的选择
本研究考察了乙醇－水混合溶剂作为提取溶剂对提取效果的影响。结果发现，当乙醇与水体积比为
７０∶３０时，提取效果较好，芹菜苷质量浓度较高。因此，选用了乙醇与水体积比为７０∶３０。
３．２．２　检测波长的选择
用ＵＶ－５５００ＰＣ型紫外／可见分光光度计进行全波长扫描发现，芹菜苷在２６７ｎｍ和３３３ｎｍ处有特
征吸收峰，其在３３３ｎｍ处吸收峰达最大。所以，本次实验选取的检测波长为３３３ｎｍ。
３．２．３　流动相比例的选择
查阅相关文献，经过比较选择了甲醇－乙酸为流动相，考察了不同比例甲醇－乙酸对芹菜苷和其他组
分的分离情况。发现甲醇与１％乙酸的体积比为４０∶６０时，芹菜苷能与其他组分完全分离。
４　结　语
试验结果表明，该 ＨＰＬＣ方法稳定，测得结果准确，重复性好，能用于测定洋甘菊中芹菜苷的质量浓
度。对所测得数据进行分析可得，洋甘菊中芹菜苷的质量浓度较低，资料显示芹菜中有着较高的芹菜苷
的质量浓度。另外在样品的提取时，通过对原料和产品的检测发现，大孔树脂能起到初步富集洋甘菊中
芹菜苷的作用，且ＡＢ－８型大孔树脂效果最好。
参考文献：
［１］　杨彦松，潘浪胜．洋甘菊中黄酮类成分的分离与结构确定［Ｊ］．应用化工，２００８，３７（６）：６９７－６９８．
［２］　郑汉臣，全山丛，张虹，等．值得重视的归化药用和香料植物：母菊（洋甘菊）［Ｊ］．中草药，１９９６，２７（９）：５６８－５７１．
［３］　沙红，廖康．药用植物洋甘菊的组织培养研究［Ｊ］．新疆农业大学学报，２００４，２７（４）：１６－１８．
［４］　周伯庭，李新中．母菊的化学成分研究［Ｊ］．湖南中医学院学报，２００１，２１（１）：２７－２８．
［５］　Ｈｅｉｄａｒｉ　Ｍ　Ｒ，Ｄａｄｏｌａｈｉ　Ｚ，Ｍｅｈｒａｂａｎｉ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ａｎｔｉｓｅｉｚｕｒｅ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ｍａｔｒｉｃａｒｉａ　ｒｅｃｕｔｉｔａ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｉｎ　ｍｉｃｅ
［Ｊ］．Ａｎｎａｌｓ　ｏｆ　ｔｈｅ　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００９，１１７１：３００－３０４．
［６］　Ａｖａｌｏｎｅ　Ｒ，Ｚａｎｏｌｉ　Ｐ，Ｋｌｅｉｎｓｏｈｎｉｔｚ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ　ｐｒｏｆｉｌｅ　ｏｆ　ａｐｉｇｅｎｉｎ，ａ　ｆｌａｖｏｎｏｉｄ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｍａｔｒｉｃａｒｉａ
ｃｈａｍｏｍｉｌ［Ｊ］．Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，２０００，５９（１１）：１３８７－１３９４．
［７］　贾佳，谢静莉，许学书．芹菜苷体外活性的研究［Ｊ］．食品科学，２００８，２９（１２）：９９－１０１．
［８］　陈静萍，尹梦晨，陈亮，等．湖南芹菜中芹菜苷和３’－甲氧基芹菜苷含量的测定［Ｊ］．湖南农业科学，２００９，２５（９）：３３－３５，４５．
［９］　徐静，郭长江，韦京豫，等．蔬菜中类黄酮物质的高效液相色谱测定法［Ｊ］．营养学报，２００５，２７（４）：２７６－２７９．
［１０］　王克勤，罗军武，陈静萍，等．高效液相色谱法测定芹菜中芹菜素含量［Ｊ］．食品与机械，２００９，２５（２）：７４－７７．
［１１］　谢程，李琳，段书涛，等．ＨＰＬＣ测定海风藤药材中海风藤酮的含量［Ｊ］．天然产物研究与开发，２０１０，２２（６）：
１０７７－１０８０．
１４第１期 陈丽春，等：液相色谱法测定洋甘菊中芹菜苷质量浓度研究