全 文 ：·论　　著 ·
　　[ 收稿日期] 2007-04-15;[ 修回日期] 2007-06-07
[ 基金项目] 河北省自然基金资助项目(课题号 C2006000791)
[ 作者简介] 苏建(1980-),男,河北秦皇岛人 ,河北医科大学药
学院理学硕士研究生 ,从事中药质量控制与研究。
＊通讯作者。 E-mail:zhang lang tong@263.net
夜交藤药材 RP-HPLC色谱指纹图谱研究与评价
苏　建1 ,袁志芳1 ,张文雄2 ,吴一兵3 ,张兰桐1＊
(1.河北医科大学药学院药物分析教研室 , 河北 石家庄 050017;2.河北医科大学实验设备处维修科 ,
河北 石家庄 050017;3.河北医科大学药学院新药开发教研室 , 河北 石家庄 050017)
　　【摘要】　目的 建立夜交藤药材的反相高效液相色谱(rever sed phase-high perfo rmance liquid chr omatog raphy ,
RP-H PLC)色谱指纹图谱分析方法 , 为有效控制和科学评价夜交藤药材质量提供新方法。方法 夜交藤用乙酸乙
酯超声处理 ,提取液采用 RP-H PLC 法进行测定。 DiamonsilT M C18色谱柱(250 mm×4.6 mm , 5 μm), 乙腈-0.1%磷
酸梯度洗脱 ,检测波长 290 nm , 流速 1 mL/ min , 柱温30℃。结果 建立了夜交藤药材 RP-HPLC 色谱指纹图谱的共
有模式 ,并对不同产地药材进行相似度比较与评价 , 精密度 、重复性与稳定性实验中各共有峰相对峰面积和相对保
留时间的相对标准偏差均小于5.0%, 符合指纹图谱的技术要求。结论 该方法简便 、可靠 , 为夜交藤药材的鉴别和
质量控制提供了依据 ,可作为不同产地夜交藤药材的质量评价标准。
【关键词】　首乌藤;色谱法 , 高压液相;皮肤纹;图谱
【中图分类号】　R284.1　　　【文献标识码】　A　　　【文章编号】　1007-3205(2008)01-0058-04
STUDIES ON THE FINGERPRINT FOR CAULIS POLYGONI MULTIFLORI
SU Jian1 ,YUAN Zhi-fang1 ,ZHANG Wen-xiong2 ,WU Yi-bing3 ,ZHANG Lan-to ng 1＊
(1.Department of Pharmaceutical Analy sis , the School o f Pharmacy , Hebei Medical University ,
Shi jiaz huang 050017 , China;2.Department of Maintenance ,Of f ice of Equi pment , Hebei Medical University ,
Shij iazhuang 050017 , China;3.Department of New Drug Development , the School o f Pharmacy ,
Hebei Medical Univ ersity , Shi jiaz huang 050017 , China)
ABSTRACT:Objective To establish reversed phase-high perfo rmance liquid chromatog raphy
(RP-HPLC)f ing erprint fo r cont rol the quali ty of Caul is Polygoni Multif lori.Methods Caul is
Polygoni Multif lori w as ex tracted by supersonic w ave wi th ethy l acetate.The chromatog raphic
pro cedure fo r f ing erprint w as carried out using Diamonsi lTM C18 as an analy t ical co lumn g radient
eluted w ith a mixture consisting of acetonit rile and 0.1% pho spho ric acid.The de tect ion w ave
leng th w as 290 nm.The f low rate w as 1 mL/min and the column tempreture was 30 centig rade.
Results The mutual mode of RP-HPLC fingerprint w as se t up and the similar deg rees of the crude
drug s f rom dif ferent places w ere compared.The RSD of relative peak areas and re tention time of
common peak in precision , repea tability , and stability did no t reach 5.0%.Conclusion This simple
and reliable me thod can be used fo r the fingerprint assay and quality cont rol fo r Caulis Polygoni
Multi flo ri.It provides a new method as a comprehension quali ty contro l item for Caulis Polygoni
Multi flo ri.
KEY WORDS: caulis polygoni multif lo ri;chromato graphy , high pressure liquid;
dermatog lyphics;collect ion illustration
　　夜交藤(caulis polygoni multif lori , YJT),又
名首乌藤 ,为蓼科植物何首乌的干燥藤茎或带叶藤
茎 ,有镇静和降脂等作用 ,性甘微苦 、平 ,有养心 、安
神 、通络 、祛风 、止痛等功效 ,用于治疗失眠 、劳伤 、多
汗 、血虚 、身痛等[ 1] 。夜交藤药材临床应用多年 ,但
并未收载于中国药典 ,其相关文献的研究报道亦较
·58· 第 29卷第 1期2008年 1月 　 河 北 医 科 大 学 学 报JOURNAL OF H EBEI MEDICAL UNIVERSIT Y　Vol.29　No.1Jan.　2008
少。何首乌与夜交藤虽为同一植物的不同部位 ,但
功效及有效成分却不尽相同。我们研究了何首乌和
夜交藤中的有效成分 ,报道了反相高效液相色谱
( reversed phase-high perfo rmance liquid
chromatog raphy , RP-HPLC)法测定何首乌和夜交
藤中二苯乙烯苷及蒽醌类成分的含量测定方法[ 2] 。
本文对夜交藤药材进行了 RP-HPLC色谱指纹图谱
分析 ,并对不同产地药材进行相似度比较 ,为有效控
制和全面评价夜交藤药材质量提供新方法。
1　仪 器 与 试 药
1.1　仪器与试剂:Waters高效液相色谱仪 ,Waters
Empowe r色谱工作站 ,Waters 2996二极管阵列检
测器 Diamonsi lTM C18柱(250 mm ×4.6 mm ,5μm)。
甲醇 、乙腈为色谱纯(美国迪马公司),其它试剂均为
分析纯 ,水为自制重蒸水 。
1.2 　对照品与供试药材:大黄素(批号 0756-
9908)、大黄素甲醚(批号 758-9803)、二苯乙烯苷
(批号 0844-200003)对照品均购于中国药品生物制
品检定所 ,不同产地夜交藤药材样品来源见表 1(经
生药学鉴定)。
表 1　样品来源
Table 1　Or igins of samples
Sample N o. Origins o f samples Sample No. O rigins o f samples
1 Guangdong P rov ince 11 Henan Province
2 Shanx i Province 12 Henan Province
3 Henan P rovince 13 Guangdong P rovince
4 Anhui P rov ince 14
Shijiazhuang Cit y ,
Hebei P rov ince
5 Guangdong P rov ince 15
Shijiazhuang Cit y ,
Hebei P rov ince
6 Henan P rovince 16 Beijing City
7 Beijing City 17
Anguo County ,
Hebei P rov ince
8
Long zhou County ,
Guangxi P ro vince
18 Hubei Province
9 Guangxi P ro vince 19 Yunnan P rovince
10 Guangdong P rov ince
2　方 法 与 结 果
2.1　色谱条件:色谱柱为 Diamonsi lTM C18柱(250
mm×4.6 mm ,5 μm);乙腈(A)-0.1%磷酸(B)为流
动相进行梯度洗脱 ,梯度洗脱条件见表 2 ,流速为
1.0 mL/min ,柱温为 30℃。
表 2　流动相梯度洗脱条件
Table 2　Gradient elution of flow phase
(%)
Time(t/min)
Acetoni t ri le
(A)
0.1%Ph ospaoric acid
(B)
0 　5 95
5 20 80
60 35 65
95 100 0
2.2　供试品溶液的制备
2.2.1　对照品溶液:取二苯乙烯苷 、大黄素和大黄
素甲醚对照品适量 ,精密称定 ,加甲醇溶解并稀释制
成每毫升中含0.1 mg 的溶液 ,即得。
2.2.2　供试品溶液:精密称取夜交藤药材细粉(过
40目筛)4 g ,加乙酸乙酯 50 mL ,称定质量 ,超声 30
min ,放冷 ,再次称定质量 ,用乙酸乙酯补足减失的
质量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,蒸干 ,用 5 mL 甲醇溶
解 ,用微孔滤膜(0.45 μm)滤过 ,即得 。
2.3　方法学考察
2.3.1　精密度实验:取同一夜交藤样品粉末 ,按2.2
项下方法制备供试液 ,按2.1项下色谱条件 ,重复进
样 5次 ,测得各共有峰相对峰面积和相对保留时间
的相对标准差(relative standard deviation , RSD)均
小于5.0%,结果表明该方法符合指纹图谱的技术要
求 。
2.3.2　重复性实验:取同一夜交藤样品粉末 6份 ,
精密称定 ,按2.2.2项下方法制备供试液 ,按 2.1项
下色谱条件 ,分别进样 ,测得各共有峰相对峰面积和
相对保留时间的 RSD均小于5.0%,符合指纹图谱
的技术要求 。
2.3.3　稳定性实验:取夜交藤药材粉末 ,精密称定 ,
按2.2项下方法制备供试液 ,按2.1项下色谱条件 ,分
别于 0 、2 、4 、6 、8 、10 、12 、24 、36 、48 h 进样 ,测得各共
有峰相对峰面积和相对保留时间的 RSD 均小于
5.0%,符合指纹图谱的技术要求 。
2.4　不同产地夜交藤药材指纹图谱的比较及相关
技术参数:按供试品溶液的制备方法操作 ,分别取不
同产地夜交藤药材样品制成供试品溶液 ,分别取 20
μL进样 ,将所得色谱图进行比较分析 ,得到 14 个共
有峰 ,并对已知化合物峰进行确认 ,对照品峰见图
1 ,共有峰见图 2 ,计算各共有峰相对于参比峰面积
的比值 ,见表 3 。从表 3可看出 ,相对峰面积比值存
在一定的差异 ,从而可认为不同产地夜交藤药材指
纹图谱存在一定的差异 ,可用来鉴别和区分不同产
地的夜交藤药材。
·59·河北 医科大学学 报　　第 29卷　第 1期
图 1　对照品溶液 RP-HPLC 色谱图
R1.二苯乙烯苷;R2.大黄素;R3.大黄素甲醚
Figure 1　HPLC chromatog rams of the reference subs tances
R1.S ti lbene glycoside;R2.Emodin;R3.Phy scion
图 2　夜交藤共有模式的色谱图
S.大黄素
Figure 2　Mu tu al mode of Cau li s Po ly goni Mul tif lori
S.Emodin
表 3　夜交藤药材指纹图谱共有峰相对峰面积
Table 3　Relative peak areas of common peaks for fingerprint of Caulis Polygoni Multiflori
S am ple
No.
Relat ive peak areas of comm on peak s
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 s 12 13
1 0.004 0.055 0.059 0.157 0.150 1.705 0.324 0.773 0.874 0.823 0.057 1.000 0.052 0.688
2 0.017 0.012 0.013 0.320 0.135 1.311 0.036 0.528 0.490 0.279 0.017 1.000 0.022 0.469
3 0.032 0.018 0.022 0.267 0.142 1.082 0.374 0.425 0.507 0.429 0.016 1.000 0.015 0.637
4 0.095 0.085 0.052 0.031 0.069 0.068 0.067 0.042 0.069 0.047 0.069 1.000 0.098 0.969
5 0.005 0.021 0.059 0.158 0.149 1.706 0.325 0.773 0.875 0.823 0.058 1.000 0.058 0.688
6 0.005 0.009 0.008 0.298 0.137 1.311 0.036 0.529 0.492 0.282 0.016 1.000 0.021 0.472
7 0.032 0.086 0.042 0.181 0.049 0.213 0.181 0.328 0.077 0.171 0.038 1.000 0.023 0.661
8 0.049 0.911 0.031 0.269 0.081 0.144 0.053 0.033 0.047 0.039 0.114 1.000 0.025 0.494
9 0.068 0.077 0.064 0.052 0.103 0.123 0.103 0.242 0.069 0.174 0.029 1.000 0.167 0.646
10 0.062 0.089 0.130 0.466 0.121 1.319 0.052 0.651 0.566 0.499 0.047 1.000 0.051 0.623
11 0.005 0.010 0.008 0.298 0.137 1.311 0.036 0.529 0.492 0.282 0.016 1.000 0.021 0.472
12 0.010 0.035 0.050 0.215 0.019 0.288 0.283 0.324 0.088 0.184 0.036 1.000 0.027 0.657
13 0.025 0.045 0.045 0.772 0.165 1.473 0.091 0.727 0.639 0.569 0.041 1.000 0.067 0.610
14 0.006 0.010 0.009 0.287 0.134 1.307 0.035 0.527 0.491 0.281 0.016 1.000 0.021 0.471
15 0.223 0.167 0.041 0.595 0.167 0.135 0.165 0.151 0.089 0.089 0.089 1.000 0.070 0.592
16 0.007 0.099 0.044 0.617 0.369 0.217 0.147 0.145 0.095 0.101 0.080 1.000 0.071 0.593
17 0.101 0.096 0.096 0.099 0.083 0.827 0.020 0.325 0.342 0.265 0.331 1.000 0.266 0.676
18 0.074 0.097 0.065 0.054 0.070 0.059 0.093 0.209 0.074 0.140 0.034 1.000 0.129 0.637
19 0.318 0.202 0.101 0.355 0.299 0.325 0.175 0.157 0.221 0.089 0.349 1.000 0.166 0.574
·60· 河北 医科大学学 报　　第 29卷　第 1期
2.5　相似度的计算[ 3] :应用 Excel软件 ,运用公式
分别计算欧氏距离 、相关系数和夹角余弦 ,计算结果
见表 4。
表 4　相似度分析结果
Table 4　Results of similar degrees analysis
Sample No. Euclid
distance
Coef ficient
cor relation
Vectorial
angle cosine
1 0.951 0.842 0.920
2 0.977 0.938 0.964
3 0.982 0.954 0.977
4 0.962 0.694 0.788
5 0.951 0.842 0.919
6 0.978 0.939 0.964
7 0.973 0.829 0.901
8 0.954 0.494 0.699
9 0.967 0.764 0.861
10 0.973 0.930 0.966
11 0.978 0.938 0.964
12 0.975 0.848 0.914
13 0.961 0.881 0.941
14 0.978 0.939 0.964
15 0.966 0.676 0.833
16 0.968 0.724 0.854
17 0.984 0.934 0.967
18 0.967 0.744 0.837
19 0.971 0.738 0.876
3　指纹图谱分析
本实验通过 Excel软件 ,分别计算了欧氏距离 、
相关系数和夹角余弦 ,通过相似度比较对实验结果
进行了验证 ,3种方法计算的相似度结果基本一致 。
由得出的相似度结果可知 ,19个样本间有较好的相
关性 ,但又有区别。3种相似度评价方法各有优势 ,
且针对点不同 ,结合使用能够很好的对实验结果进
行分析 ,欧氏距离 、相关系数和夹角余弦的计算为指
纹图谱的分析提供了强有力的依据 。本研究方法建
立的指纹图谱可快速鉴别区分不同来源的夜交藤药
材 ,对夜交藤药材指纹图谱的综合分析 ,有利于全面
控制药材质量 ,促进夜交藤药材及其制剂研制水平
和质量控制的全面提高 。
4　讨　　论
中药作为多组分复杂体系 ,其化学成分众多 ,而
中药药效一般又是由多种化学成分共同作用产生的
结果。目前 ,中药质量控制方法大多只是对其中少
数已知成分进行分析 ,无法体现中药材的整体性特
点 ,因此 ,中药指纹图谱的出现 ,为发展中药质量控
制的新方法 ,建立中药的现代质量控制标准体系提
供了机遇。
二苯乙烯苷的最大吸收波长在 320 nm ,大黄
素 、大黄素甲醚的最大吸收波长在 254 nm 。为得到
较好的指纹图谱色谱图 ,本实验应用二极管阵列检
测器对样品进行了 200 ～ 400 nm 全扫描 ,最后确定
当检测波长为 290 nm 时能得到峰数较多 、峰型较
好的色谱图 。
本实验比较了不同提取溶剂(水 、95%乙醇 、
70%乙醇 、45%乙醇 、50%甲醇 、甲醇 、乙酸乙酯)的
水浴回流 、索氏提取和超声提取等不同提取方法不
同提取时间的提取效果 ,结果表明 ,以乙酸乙酯为提
取溶剂 ,超声提取 30 min时 ,各色谱峰的响应值不
再增加 ,且方法稳定 ,重现性好。
【参考文献】
[ 1] 　宋毅 ,唐尧 ,张志勇 ,等.夜交藤抗炎抑菌作用的实验研究[ J] .
华西药学杂志 , 2003 , 18(2):112-114.
[ 2] 　苏建 ,袁志芳 ,张兰桐 ,等.RP-HPLC法测定何首乌和夜交藤
中二苯乙烯苷和蒽醌类成分[ J] .中草药 , 2007 , 38(2):278-
281.
[ 3] 　柴逸峰 ,朱臻宇.中药指纹图谱的研究进展[ J] .药学服务与研
究 , 2006 , 6(4):241-245.
重申对文后参考文献著录的要求
本刊作者在撰稿时请按照《<河北医科大学学报>投稿须知》中所列各项办理。特别是文
后参考文献的著录 ,应以中华人民共和国国家标准(GB/T 7714-2005)为准。参考文献顺序
号用阿拉伯数字加方括号标记;文献的作者 , 1 ～ 3 名需全部列出 , 3 名以上只列前 3名 ,后加
“等”或“et al” 、“他” ;列出文献的题目(书籍列书名)和期刊名称(书籍列版次 、出版地 、出版社
名);期刊列出年份 、卷次和期次以及起-止页码(书籍列出年份和起-止页码)。缺少任何一
项 ,均为不规范。
·61·苏　建等　夜交藤药材 RP-HPLC色谱指纹图谱研究与评价