全 文 ：收稿日期:2005-10-14;　修订日期:2006-03-21
作者简介:张宇洁(1979-),女(汉族),陕西宝鸡人 ,现任陕西医学高等专
科学校药学系助教 ,硕士学位 ,主要从事药物分析研究工作.
长春七中蛇床子素的提取方法和含量测定研究
张宇洁 1 ,贺浪冲 2 , 苗延青 1 , 靖　会1
(1.陕西医学高等专科学校 ,陕西 西安　710068;2.西安交通大学医学院 ,陕西 西安　710061)
摘要:目的 建立草药长春七中蛇床子素的提取方法 , 对其中蛇床子素的含量进行测定并与蛇床子中蛇床子素的含量进
行比较。方法 以蛇床子素为指标 ,用反相高效液相色谱法 ,色谱柱:K rom asil C18(150 mm ×4. 6 mm , 5μm), 流动相:甲醇-
水(75∶25), 流速:1m l m in -1 , 二级管阵列检测器选定波长:302 nm。系统考察不同溶剂 、不同提取方式对蛇床子素提
取率的影响 , 并用正交试验法进一步优选提取条件。用最终确定的条件对蛇床子素的含量进行测定。结果 用 6倍量
80%乙醇回流提取 3次(1 h /次)的提取方法可以获得较高的蛇床子素提取率。结论 溶剂种类和提取方式对长春七中蛇
床子素的提取效率有较大影响。
关键词:长春七;　蛇床子素;　反相高效液相色谱法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)08-1457-02
Studies on the Extractive M ethods and Quantitative Analysis of O sthol from
L ibanotis buethorimensis
ZHANG Yu-jie1 , HE Lang-chong2 , M IAO Y an-qing 1 , JING H u i 1
(1. ShannxiMedical College,X ian 710068;Ch ina;TheCollege of Pharmacy, X ian J iaotongUn iversity, X ian
710061 ;China)
Abstract:Objective To e stablish an op tim a l ex tractive m ethod o f ostho l and de term ine its con tent in L ibanotis buethorim ensis,
wh ich is compared w ith tha t inCn id ium monnieri(L. ) Cuss. M ethods RP-HPLC m ethod w as used fo r de term ination o f the o stho l
on theK rom asil C18 colum n(150 mm ×4. 6 mm, 5μm) w ith am obile phase of m ethanol-w ater(75∶25). The flow rate wa s 1. 0
m l m in -1. The UV detec tion w as a t302 nm w ith pho todiode array de tector. The effec ts of d iffe rent so lvents and ex trac tivem ode ls
on ex trac tion ra tio of the o stho lw ere sy stem atica lly investiga ted, and also the o rthogona l te st was fur ther used to optimum ex tracting
cond itions, then dete rm ine ostho l by the optim um ex tracting conditions. Resu lts The ex traction ra te used the re fluen tme thod w ith
80% a lcohol fo r three time s and 1 h each time w ill be six tim es as much as that o f o therm e thods. Conclusion The so lvent k inds
and ex trac tion m ode ls have g reat in fluence upon the ex tracting efficiency o f ostho.l
Key words:Libanotis buethorim ensis;　Ostho l;　RP-HPLC
　　长春七为伞形科岩风属植物长春七 L ibanotis buethorim ensis
的干燥根 , 是秦巴山区特有的草药 , 性温 , 味辛 、甘。 《现代中药
大辞典》[ 1]记载其有祛风散寒 、活血止痛的功效。现代药理研究
表明 , 长春七中的中性油和酚酸部分具有镇痛 、镇静作用 ,中性油
尚有一定解热和抗关节炎作用。经细胞膜受体色谱模型 [ 2]筛
选 , 发现长春七中对血管内皮细胞有作用的活性成分是蛇床子
素 , 为此本实验就长春七中蛇床子素的提取方法和含量测定方法
进行了研究。长春七化学成分的研究 [ 3 ～5]和蛇床子药材中蛇床
子素含量的测定已有文献报道 ,但未见对长春七活性筛选和其中
蛇床子素定量检测的报道。本实验中用不同溶剂 、不同提取方法
及正交实验法 , 较为系统地研究了长春七中蛇床子素的提取方
法 , 用高效液相色谱法对长春七药材中蛇床子素的含量进行了测
定并与蛇床子药材进行了比较。
1　仪器与试药
高效液相系统包括:LC-10ATvp色谱泵 , SPD-10Avp紫外检
测器(日本岛津公司)和 7725 i型进样器 (美国 Rheodyne公司 );
ANASTAR色谱工作站(中国奥泰科技有限公司)。
蛇床子素对照品 (中国药品生物制品检定所 );长春七药材 ,
蛇床子药材(西安市药材市场), 经西安交通大学药学院生药教
研室鉴定为正品。 色谱纯甲醇(美国 F ishe r公司), 双蒸去离子
水(实验室自制)。
2　方法与结果
2. 1　对照品溶液制备 取蛇床子素对照品约 50 mg, 精密称定 ,
置于 50 m l量瓶中 , 用甲醇溶解并定容至刻度 , 摇匀。置于冰箱
(4℃)内备用。
2. 2　色谱条件 色谱柱:Krom asil C18(150 mm ×4. 6 mm , 5μm),
流动相:甲醇-水 (75∶ 25), 流速:1 m l m in -1 , 检测波长:302
nm。在此条件下测得蛇床子素对照品及长春七 , 蛇床子总提物
的色谱图如图 1 ～ 3所示。
1.蛇床子素　　 1-1　蛇床子素紫外光谱图
图 1　蛇床子素标准品
1.蛇床子素　　 1-2　蛇床子素紫外光谱图
图 2　长春七总提取物
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 8 时珍国医国药 2006年第 17卷第 8期
1.蛇床子素　　 1-3　蛇床子素紫外光谱图
图 3　蛇床子总提取物
2. 3　标准曲线 分别配制不同浓度的蛇床子素对照品溶液 ,在上
述色谱条件下进行测定 , 进样量为 10 μl。以蛇床子素进样量
(X)对峰面积(Y)进行线性拟合 , 蛇床子素回归方程为:
蛇床子素 Y =89 606X - 918. 05, r=0. 999 4
结果蛇床子素在 0. 5 ～ 5μg范围内线性关系良好。
2. 4　精密度实验 取长春七细粉 0. 2 g,精密称定 , 用 80%乙醇超
声 30 m in, 放冷定容至 10 m l。离心(10 000 r m in -1 )后过滤 ,准
确吸取滤液 10 μl,重复进样 6次 , 测定峰面积积分值 ,蛇床子素
的 RSD 为 1. 65%。
2. 5　重现性实验 取同一份长春七药材 5份 , 平行进行提取测
定 , 求得蛇床子素的 RSD为 1. 90%。
2. 6　回收率实验 准确称取已测知含量的长春七样品粉末 6份 ,
各 0. 1g,分别加入对照品溶液适量 ,按上述方法处理 , 依法测定。
测得蛇床子素平均回收率为 99. 49%, RSD为 1. 93%。
2. 7　提取溶剂选择 取长春七生药 , 粉碎成细粉 , 称取 0. 2 g,精
密称定。分别加入一定体积的 11种不同溶剂 ,超声提取 30 m in。
静置过夜 , 滤过 ,定容至 10 m l, 离心(10 000 r m in -1)后过滤 ,准
确吸取滤液 10μl,进样分析蛇床子素含量(见表 1)。结果表明:
氯仿和 80%乙醇作溶剂的提取率较高 , 考虑实际应用的可行性 ,
选择 80%乙醇作为提取溶剂。
表 1　不同提取溶剂的实验结果 %
提取溶剂 蛇床子素含量
正己烷　 0. 732
石油醚　 0. 649
乙醚　　 0. 529
氯仿　　 1. 345
醋酸乙酯 0. 946
丙酮　　 1. 097
甲醇　　 1. 272
乙醇　　 1. 135
80%乙醇 1. 454
70%乙醇 1. 194
60%乙醇 0. 991
2. 8　提取方式选择 取长春七细粉 0. 2 g,精密称定 , 用 80%乙醇
作为溶剂 , 分别用不同的提取方式进行提取 , 滤过 , 定容至 10
m l。离心(10 000 r m in -1)后过滤 , 准确吸取滤液 10 μl, 进样分
析蛇床子素的含量(见表 2)。结果表明 , 超声和 80%乙醇加热
回流 2 h,蛇床子素的提取率较高 ,因此在含量测定中可选择超声
法 , 但在工艺研究中选择回流方式。
表 2　不同提取方法的实验结果 %
项目 超声
30 m in　60 m in　90 m in
放置
过夜
回流提取
1 h　　　2 h　　3 h
索氏
提取
蛇床子素含量 1. 39 1. 45 1. 48 0. 93 1. 34 1. 51 1. 31 1. 38
2. 9　正交实验 表 1的结果表明 80%的乙醇回流提取率较高 ,
因此 , 取长春七细粉 20 g, 采用 3因素 3水平正交实验法对提取
溶剂倍量 、回流时间 、回流次数进行试验研究 (表 3)。将提取液
定容至 500 m l,用 HPLC法测定溶液中蛇床子素含量 , 计算其提
取率(见表 4)。
表 3　因素水平
水平 溶剂量 C /v g-1 回流次数 n 回流 t /h
1 5 1 0. 5
2 6 2 1
3 7 3 2
表 4　正交实验表(L9(34))
序号 因素　A　　　　　　B　　　　　　C　 蛇床子素含量(%)
1 1 1 1 1. 026
2 1 2 2 1. 475
3 1 3 3 1. 246
4 2 1 2 1. 666
5 2 2 3 1. 506
6 2 3 1 1. 662
7 3 1 3 1. 384
8 3 2 1 1. 317
9 3 3 2 1. 742
蛇 K 1 3. 747 4. 076 4. 005床 K 1 4. 334 4. 298 4. 883
子 K 1 4. 443 4. 65 4. 136素 R 1. 087 0. 574 0. 878
2. 10　方差分析 将正交实验结果(表 4)用 SAS软件进行方差分
析。结果见表 5。
以蛇床子素含量(%)为考察指标 , 由表 4中极差 R值大小
显示 , 蛇床子素各因素作用主次为 A >C >B;方差分析结果表
明:A因素的影响具有显著性意义 , 以 A2B3C2 组合为佳 , 即用 6
倍量 80%乙醇加热回流 3次 , 1 h /次。
表 5　蛇床子素方差分析
误差来源 DF 变异 均方 组间均方 /组内均方 P
A 2 0. 202 1 0. 101 0 12. 26 0. 073 8
B 2 0. 055 9 0. 027 9 3. 39 0. 227 8
C 2 0. 149 6 0. 074 8 9. 08 0. 099 2
2. 11　含量测定 取不同批长春七药材 3份 ,蛇床子药材 2份 , 平
行进行提取测定 ,进样分析蛇床子素含量(见表 6)。
表 6　长春七中蛇床子素的含量测定结果　　　　　%
序号 蛇床子素含量
长春七 1 1. 393
长春七 2 1. 296
长春七 3 1. 454
蛇床子 1 1. 894
蛇床子 2 1. 728
3　讨论
3. 1　 用 RP-HPLC法测定长春七中蛇床子素的准确度和灵敏度
较高 , 实验操作相对简单 , 适用于本文的研究。另外 ,虽然蛇床子
素为亲脂性化合物 ,但由表 1可见 , 用极性较小的溶剂提取长春
七药材时 , 只有氯仿的提取率较高 , 其他溶剂蛇床子素提取不完
全 , 随提取溶剂极性增加 , 用甲醇和乙醇提取时 ,蛇床子素的提取
率较高 。综合考虑提取溶剂的实际应用价值选用 80%乙醇为提
取溶剂 ,在此提取体系中 , 由于水介质对长春七药材的溶胀作用 ,
有利于极性溶剂的渗入和溶出 ,从而提高了长春七中蛇床子素的
亲脂性成分提取率。同时 ,在对四种提取方式进行比较研究中发
现用 80%乙醇加热回流提取 ,其实用性 、时效性均可满足要求。
3. 2　 陕西秦巴山区天然药用植物资源丰富 , 有许多特有的药用
品种值得深入研究和开发。细胞膜色谱法(ce ll m em brane chro-
m atography, CMC)[ 2]是一种新的生物亲和色谱方法 , 被分析成分
如果与特定的细胞膜受体有特异性结合 [ 6] ,则可在 CMC模型中
反映出来 ,将 CMC模型与药效实验相结合的活性成分筛选技术
已用于天然植物和中药物质基础的研究之中 [ 7, 8] 。 本实验中报
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时珍国医国药 2006年第 17卷第 8期 LISH IZHEN MED IC INE AND MATERIA MEDICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 8　
道的蛇床子素即是用血管内皮 CMC模型筛选出长春七药材中对
肿瘤生长有抑制作用的有效成分。相较先提取分离 ,再逐一进行
药效实验以确定有效成分的传统天然药物化学筛选有效成分的
方法来说 , CMC模型的应用对加快发现药用植物中的有效成分
具有实际意义。
参考文献:
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分有效成分 [ J] .分析化学 , 2002, 30(1):74 .
收稿日期:2005-09-26;　修订日期:2006-03-18
作者简介:梁恒兴(1978-),男(汉族),四川德阳人 ,现为成都中医药大学
在读博士研究生 ,硕士学位 ,主要从事中药化学成分与质量标准化研究.
反相高效液相色谱法测定复方大黄颗粒中
大黄素和大黄酚的含量
梁恒兴 , 岳　玲 , 蔡徐骄
(成都中医药大学 ,四川 成都　611730)
摘要:目的 建立反相高效液相色谱(RP-HPLC)法测定复方大黄颗粒中大黄素和大黄酚的含量。方法 A lltim a C18色谱柱(5 μm , 150 mm ×4. 6 mm);柱温:30℃;流动相:甲醇-0. 1%磷酸(87∶13);流速:1 m l /m in;检测波长:254 nm。结果 大
黄素的线性范围为 0. 096 ～ 0. 576μg(r=0. 999 9), 平均回收率为 99. 29%, RSD 为 0. 63%;大黄酚的线性范围为 0. 078 4
～ 0. 470 4 μg(r=0. 999 8),平均回收率为 100. 08%, RSD为 1. 52%。结论 该方法灵敏度高 、操作简便 、重现性好 、效率
高。可作为样品的检测方法。
关键词:复方大黄颗粒;　大黄素;　大黄酚;　高效液相色谱法
中图分类号:R284. 2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2006)08-1459-02
Determ ination of Emod in and Chrysoplhanol in Compound Rhubard Granula by
RP-HPLC
L IANG H eng-xing, YUE L ing, CA IX u-jiao
(ChengduUn iversity of TCM , Chengdu　611730, China)
Abstract:Objective To deve lop an RP-HPLC m e thod for de te rm ina tion o f emodin and chry sophano l in Com pound Rhubard
G ranu la. Methods The sam ples we re determ ined by RP-HPLC w ith a A lltim a C18 co lumn(5μm , 150 mm ×4. 6 mm) and UV de-
tector a t 254 nm. The mobile pha sew as m e thona l∶0. 1%H3PO 4(87∶13)a t a flow ra te o f 1. 0 m l /m in. The column tem pe ra ture
w as 30℃. Resu lts The calibration cu rve of emodin w as linear ove r the ranges of 0. 096μg～ 0. 576 μg (r=0. 999 9), ave rage re-
covery w as 99. 29, RSD w as 0. 63%;The calibration curve o f chry sophano lw as linear ove r the ranges of 0. 078 4 ～ 0. 470 4 μg
(r=0. 999 8), ave rage recove ry was 100. 08%, RSDw as 1. 52%. Conc lu sion This me thod is simp le, reliable, e fficient, and it
prov ides a reliab le m ethod fo r de term ination of emodin and chry sophano l in C om pound Rhuba rd G ranu la.
Key words:Compound Rhubard G ranu la;　Emodin;　Chry sophano l;　H PLC
　　复方大黄颗粒由大黄 、牡丹皮 、丹参 、延胡索等多味中药组
成 , 具有清热凉血 、活血化淤 、消肿止痛等作用。 大黄能逐瘀通
经 、凉血解毒 、清热泻火 , 为方中君药 , 现代药理研究证明其主要
有效成分大黄素 、大黄酚等成分具有抗病原体 、抗炎 、免疫调节 、
改善微循环等药理作用 [ 1] 。为了有效地控制药品质量 , 本实验
建立了用反相高效液相法测定复方大黄颗粒中大黄素和大黄酚
含量的方法。现将结果报道如下。
1　仪器与试剂
岛津高效液相色谱仪(SPD-10A VP UV-V IS DETECTOR, LC-
10AT VP LIQU ID CHROMATOGRAPH, CTO-10AS VP COLUMN
OVEN, 渐大智达 N2000色谱工作站 ), Sa rto rious CP225-D型电子
天平(万分之一 ,德国 Sa to riU s公司)。
复方大黄颗粒 (本实验室自制 , 批号 20041201, 20041202,
20041203);大黄素对照品购自中国药品生物制品检定所(供含
量测定用 ,批号:110756-200110);大黄酚对照品购自中国药品生
物制品检定所(供含量测定用 , 批号:110796-200306)。甲醇为色
谱纯;水为重蒸水;其它试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2. 1　色谱条件 色谱柱:A lltim a C18色谱柱(5 μm , 150 mm ×4. 6
mm);柱温:30℃;流动相:甲醇-0. 1%磷酸 (87∶13);流速:1 m l /
m in;检测波长:254 nm;灵敏度 0. 1 AFUS。
2. 2　对照品溶液的制备 精密称取大黄素对照品 12. 0 m g,置 25
m g容量瓶中 , 加甲醇使溶解 ,并定容至刻度 , 摇匀 , 得对照品贮备
液。再精密吸取大黄素对照品贮备液 1 m l, 置 10 m l量瓶中 , 加
甲醇定容至刻度 , 摇匀 , 作为大黄素对照品溶液 (浓度为:
0. 048 m g /m l);另取大黄酚对照品 9. 8 mg, 置 25m g容量瓶中 , 加
甲醇使溶解 , 并定容至刻度 , 摇匀 ,得对照品贮备液。再精密吸取
大黄酚对照品贮备液 1 m l, 置 10 m l量瓶中 , 加甲醇定容至刻度 ,
摇匀 , 作为大黄酚对照品溶液(浓度为:0. 039 2 m g /m l)。
2. 3　供试品溶液的制备 取同批号复方大黄颗粒 5袋 ,混匀后, 碾
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LISH IZHEN M EDIC INE AND MATER IA MED ICA RESEARCH 2006 VOL. 17 NO. 8 时珍国医国药 2006年第 17卷第 8期