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长春七超临界提取物镇痛、镇静和抗炎作用的研究



全 文 :天然产物研究与开发 Nat Prod Res Dev 2011,23:428-431
文章编号:1001-6880(2011)03-0428-04
收稿日期:2010-06-03 接受日期:2010-09-09
基金项目:2004 年陕西省自然科学基金项目(2004C240-3) ;2007
年陕西省中医管理局项目(2007-90)
* 通讯作者 Tel:86-29-82655136;E-mail:shijuan@ mail. xjtu. edu. cn
长春七超临界提取物镇痛、镇静和抗炎作用的研究
石 娟* ,赵林涛,傅 强,宋 杰,康 军
西安交通大学医学院药学系,西安 710061
摘 要:研究长春七超临界提取物(SELB)的镇痛、镇静和抗炎作用。镇痛实验采用小鼠热板法和扭体法;镇静
实验采用与戊巴比妥钠协同催眠法和小鼠自主活动法;抗炎实验采用大鼠足跖肿胀法和小鼠耳肿胀法。结果
显示:SELB高、中、低剂量组均能显著提高热板致痛小鼠的痛阈和醋酸致痛小鼠的扭体抑制率;高、中剂量组与
戊巴比妥钠有协同作用,能显著延长小鼠睡眠时间,高、中、低剂量组能显著减少小鼠自主活动次数;高、中剂量
组能显著抑制蛋清致大鼠的足跖肿胀率,高、中、低剂量组均能显著抑制二甲苯致小鼠的耳肿胀度。SELB 具有
的镇痛、镇静和抗炎作用与长春七的功能主治及临床应用相符。
关键词:长春七;超临界提取物;镇痛作用;镇静作用;抗炎作用
中图分类号:R284. 2 文献标识码:A
Analgesic,Sedative and Anti-inflammatory Effects of the
Supercritical Extract from Libanotis buchtormensis
SHI Juan* ,ZHAO Lin-tao,FU Qiang,SONG Jie,KANG Jun
Pharmacy Department,Medical College,Xian Jiaotong University,Xi’an 710061,China
Abstract:The aim of this study was to investigate the analgesic,sedative and anti-inflammatory effects of the supercriti-
cal extract from Libanotis buchtormensis (SELB). Analgesic experiments were assessed by hot-plate test and turning test
in mice. Sedative experiments were assessed by sleep-promotion test in combination with pentobarbital sodium and auto-
nomic activities test in mice. Anti-inflammatory effects were assessed by the methods of albumn induced toes inflamma-
tion of rats and xylene induced ear edema of mice. The results showed that all dose groups of the SELB improved the
pain threshold and inhibition ratio of stretching significantly in mice. In addition,the high and meddle dose groups of the
SELB could significantly enhance hypnotic effect of pentobarbital sodium while all dose groups of the SELB inhibited the
autonomic activities time notably in mice. And the high and meddle dose groups of the SELB inhibited toes tumefaction
causing by albumen significantly in rats while all dose groups of the SELB could significantly inhibit the auricular edema
causing by dimethylbenzene in mice. The SELB has analgesic,sedative and anti-inflammatory effects,which is coinci-
dent with the viewpoint of the Chinese Traditional Medicine and the clinical application of L. buchtormensis.
Key words:Libanotis buchtormensis (Fisch)DC.;supercritical extract;analgesic;sedative;anti-inflammatory
长春七〔Libanotis buchtormensis (Fisch)DC.〕为
伞形科岩风属植物,又名长虫七,药用其干燥的根和
根茎,具有发散风寒,祛风湿,镇痛,健脾胃,止咳,解
毒之功效,临床主治感冒风寒,周身疼痛,咳嗽,头
痛,牙痛,关节肿痛,跌打损伤,风湿筋骨疼痛等。在
陕西、甘肃、四川等地有分布[1]。长春七为陕西有
名的“七药”之一[2],在陕西民间应用广泛,长春七
的药理作用研究已有文献报道[3,4],本文首次对长
春七超临界提取物的镇痛、镇静和抗炎作用进行了
研究。研究结果将为长春七的临床合理用药提供参
考,同时也将为该品种的进一步开发利用提供依据。
1 仪器与材料
1. 1 仪器
YLS-1A多功能自主活动测定仪(山东省医学
科学院设备供应维修站) ;AY120 分析天平(日本岛
津 SHIMADZU) ;TD12001 电子天平(余姚市金诺天
平仪器有限公司) ;HH-4 数显恒温水浴锅(国华电
器有限公司)。
1. 2 药物与试剂
DOI:10.16333/j.1001-6880.2011.03.008
长春七超临界提取物(Supercritical Extract of L.
buchtormensis,SELB) (长春七药材采自陕西太白山,
经西安市药品检验所中药室谢志民主任药师鉴定,
晾干,粉碎,用超临界萃取法提取,使用前用 1%吐
温-80 水溶液配制成各药用浓度) ;戊巴比妥钠〔中
国医药(集团)上海化学试剂公司分装,批号:
F20040816〕;吗啡注射液(沈阳第一制药厂,批号:
040803) ;安定片 (山东省平原制药厂,批号:
20040609) ;阿斯匹林泡腾片(阿斯利康制药有限公
司,批号:200409039) ;所用试剂均为分析纯。
1. 3 实验动物
ICR小鼠(体重 18 ~ 22 g)和 SD大鼠(体重 180
~ 220 g)均由西安交通大学实验动物中心提供。
2 方法
2. 1 镇痛实验[5]
2. 1. 1 热板法
预先用 55 ± 0. 5 ℃的热板对雌性小鼠进行筛
选,在 5 ~ 30 s内出现舔足反应的小鼠为合格小鼠。
选出 50 只合格雌性小鼠,随机分为 5 组,每组 10
只。动物分组和药物剂量见表 1,空白对照组灌胃
等容量的 1%吐温-80 水溶液,阳性对照组用吗啡腹
腔注射给药(ip∶ 10 mg /kg) ;SELB 高、中、低剂量组
均灌胃给药(0. 2 mL /10 g) ,1 次 /d,连续 4 d。末次
给药后测定基础痛阈值,以小鼠舔后足反应的潜伏
期为痛阈指标,超过 60 s者按 60 s计算。测量给药
后 0. 5、1、2、4、6 h各小鼠的痛阈。
2. 1. 2 扭体法
取小鼠 50 只,雌雄各半,随机分为 5 组,每组
10 只。动物分组和药物剂量见表 2,给药方式及时
间同 2. 1. 1,末次给药 30 min后,各组小鼠分别腹腔
注射 0. 6 %醋酸溶液(ip. 0. 2 mL /20 g) ,30 min 内
记录小鼠扭体 (腹部收缩内凹、伸展后肢、臀部抬
高)次数,计算扭体反应抑制率。
反应抑制率(%)= (空白对照组平均扭体次
数-实验组平均扭体次数)/空白对照组平均扭体次
数 × 100%
2. 2 镇静实验[5]
2. 2. 1 与戊巴比妥钠协同法
取小鼠 50 只,雌雄各半,随机分为 5 组,每组
10 只。动物分组和药物剂量见表 3,空白对照组灌
胃等容量的 1%吐温-80 水溶液;阳性对照组用安定
(4 mg /kg)灌胃给药;SELB 高、中、低剂量组均灌胃
给药(0. 2 mL /10 g) ,1 次 /d,连续 4 d。末次给药 30
min后,各组小鼠分别腹腔注射戊巴比妥钠(ip∶ 35
mg /kg) ,以一分钟内翻正反射消失开始记录睡眠时
间。
2. 2. 2 自主活动测定法
取小鼠 50 只,雌雄各半,随机分为 5 组,每组
10 只。动物分组和药物剂量见表 4,给药方式及时
间同 2. 2. 1。各组小鼠末次给药 30 min后分别放入
自主活动测定仪中,测定 30 min内的活动次数。
2. 3 抗炎实验[5]
2. 3. 1 蛋清致足跖肿胀法
取雄性大鼠 50 只,随机分为 5 组,每组 10 只。
动物分组和药物剂量见表 5,空白对照组灌胃等容
量的 1%吐温-80 水溶液;阳性对照组阿司匹林(100
mg /kg)灌胃给药;SELB 高、中、低剂量组均灌胃给
药(1 mL /100 g) ,1 次 /d,连续 4 d。在每鼠右后肢
踝关节周围用记号笔做一标记,于第一天测定致炎
前的足跖容积,然后在右后足趾皮下注射 10%蛋清
0. 1 mL,30 min 后给药,给药 30 min 后再次测定足
跖容积,以后每天均在给药 30 min 后测定足跖容
积。以致炎前后容积差值与致炎前正常体积之比作
为足跖肿胀率,判断药物对蛋清所致大鼠足肿胀的
影响。
2. 3. 2 二甲苯致耳肿胀法
取雄性小鼠 50 只,随机分为 5 组,每组 10 只。
动物分组和药物剂量见表 6,给药方式及时间同
2. 3. 1。末次给药 30 min 后,每鼠右耳涂二甲苯
0. 05 mL致炎,1 h后颈椎脱臼处死小鼠。左右耳相
同部位用 8 mm打孔器取耳片,用分析天平称重,以
左右耳重量差为肿胀度。
2. 4 统计学处理
实验数据均以 x ± s 表示,采用 SPSS11. 0 统计
软件进行方差分析(One-Way ANOVA)。
3 结果
3. 1 SELB的镇痛作用
3. 1. 1 SELB对热板致痛小鼠痛阈的影响
结果如表 1 所示:与空白对照组比较,给药 30
min后,SELB高、中、低三个剂量组及吗啡组均有明
显提高痛阈的作用(P < 0. 05,P < 0. 01) ;SELB 的镇
痛作用较吗啡弱,但吗啡消除较快,SELB 高剂量组
持续性较好,在给药 1 h 和 2 h 仍然有镇痛作用,中
和低剂量组均主要在给药 30 min时有效。
924Vol. 23 石 娟等:长春七超临界提取物镇痛、镇静和抗炎作用的研究
表 1 SELB对热板致痛小鼠的镇痛作用 (x ± s,n = 10)
Table 1 Analagesic effect of SELB on hot-plate-induced pain in mice(x ± s,n = 10)
组别
Group
剂量
Dose
(g /kg)
基础痛阈
Base pain
threshold(s)
用药后痛阈 Pain threshold after administration (s)
0. 5 h 1 h 2 h 4 h 6 h
空白对照组 - 24. 00 ± 4. 67 26. 25 ± 4. 05 30. 45 ± 6. 69 29. 60 ± 3. 78 30. 45 ± 8. 45 28. 15 ± 6. 26
低剂量组 0. 95 22. 80 ± 4. 19 31. 10 ± 10. 22* 30. 70 ± 8. 45 31. 55 ± 6. 54 34. 30 ± 10. 41 33. 50 ± 7. 19
中剂量组 1. 899 24. 40 ± 3. 17 32. 20 ± 6. 43* 31. 70 ± 6. 19 30. 10 ± 4. 51 31. 90 ± 3. 34 28. 30 ± 3. 61
高剂量组 3. 798 24. 00 ± 2. 97 43. 20 ± 7. 64** 42. 70 ± 7. 36** 36. 40 ± 6. 10* 37. 20 ± 9. 90* 29. 40 ± 6. 98
吗啡组 1 × 10-2 21. 50 ± 5. 33 50. 15 ± 10. 19** 31. 95 ± 13. 16 29. 45 ± 8. 30 28. 70 ± 7. 44 27. 40 ± 4. 19
注:与空白对照组比较:* P < 0. 05,**P < 0. 01(下表皆同)
Note:* P < 0. 05,**P < 0. 01vs blank control group (below every tables like this )
3. 1. 2 SELB对醋酸致痛小鼠扭体反应的影响
结果如表 2 所示:与空白对照组比较,SELB高、
中、低剂量组及吗啡组均可显著降低小鼠扭体次数
(P < 0. 01) ,提高小鼠扭体抑制率;随着 SELB 剂量
增大,小鼠扭体次数减少,扭体抑制率提高,说明作
用与剂量有关。
表 2 SELB对醋酸致痛小鼠的镇痛作用 (x ± s,n = 10)
Table 2 Analagesic effect of SELB on acetic acid -induced pain
in mice(x ± s,n = 10)
组别
Group
剂量
Dose
(g /kg)
扭体次数
Times of
writhing
抑制率
Inhibition ratio /
(% )
空白对照组 - 19. 8 ± 4. 4 -
低剂量组 0. 950 15. 0 ± 3. 1** 24. 2
中剂量组 1. 899 6. 2 ± 2. 0** 68. 7
高剂量组 3. 798 5. 3 ± 1. 3** 73. 7
吗啡组 1 × 10-2 0 ± 0** 100. 0
3. 2 SELB的镇静作用
3. 2. 1 SELB与戊巴比妥钠的协同作用
结果如表 3 所示:与空白对照组比较,SELB高、
中剂量组及安定组均可显著延长戊巴比妥钠致小鼠
的睡眠时间(P < 0. 05,P < 0. 01) ,说明各组均与戊
巴比妥钠有协同作用;随着 SELB 剂量增大,睡眠时
间延长,说明协同作用与剂量有关。
3. 2. 2 SELB对小鼠自发活动的影响
结果如表 4 所示:与空白对照组比较,SELB高、
中、低剂量组及安定组均可显著减少小鼠自主活动
次数(P < 0. 01) ;随着 SELB 剂量增大,小鼠自主活
动次数减少。说明作用与剂量有关。
3. 3 SELB的抗炎作用
3. 3. 1 SELB对蛋清致大鼠足跖肿胀的影响
结果如表 5 所示:与空白对照组比较,SELB高、
表 3 SELB与戊巴比妥钠的协同作用(x ± s,n = 10)
Table 3 Synergistic effect of SELB with pentobarbital sodium
(x ± s,n = 10)
组别
Group
剂量 Dose
(g /kg)
睡眠时间
Hour of
sleep (min)
空白对照组 - 63. 1 ± 21. 2
低剂量组 0. 950 84. 5 ± 13. 0
中剂量组 1. 899 100. 3 ± 20. 2*
高剂量组 3. 798 147. 1 ± 36. 7**
安定组 4 × 10-3 297. 3 ± 67. 2**
表 4 SELB对小鼠自主活动的影响(x ± s,n = 10)
Table 4 Effect of SELB on autonomic activities in mice (x ± s,
n = 10)
组别
Group
剂量 Dose
(g /kg)
活动次数
Times of
activity
空白对照组 - 475. 8 ± 96. 0
低剂量组 0. 475 227. 8 ± 60. 6**
中剂量组 0. 950 218. 4 ± 68. 7**
高剂量组 1. 899 206. 4 ± 62. 9**
安定组 4 × 10-3 254. 7 ± 79. 0**
中剂量组和阿司匹林组均能显著抑制蛋清致大鼠足
跖肿胀率(P < 0. 05,P < 0. 01) ;随着 SELB 剂量增
大,大鼠足跖肿胀率减少,说明作用与剂量有关。
表 5 SELB对蛋清致大鼠足跖肿胀的影响(x ± s,n = 10)
Table 5 Effect of SELB on toes tumefaction causing by albumen
in rats (x ± s,n = 10)
组别
Group
剂量
Dose
(g /kg)
肿胀率 Tumefaction ratio (%)
1 day 2 day 3 day
空白对照组 - 27. 8 ± 9. 8 7. 7 ± 2. 3 13. 4 ± 3. 5
低剂量组 0. 67 23. 4 ± 6. 9 6. 0 ± 1. 9 8. 7 ± 3. 3
034 天然产物研究与开发 Vol. 23
中剂量组 1. 34 18. 5 ± 6. 9* 1. 8 ± 0. 7**3. 6 ± 1. 3**
高剂量组 2. 68 17. 2 ± 3. 2* 1. 4 ± 0. 5**2. 0 ± 0. 5**
阿司匹林组 0. 10 14. 1 ± 13. 9* 0. 9 ± 0. 1**0. 5 ± 0. 1**
3. 3. 2 SELB对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
结果如表 6 所示:与空白对照组比较,SELB高、
中、低剂量组和阿司匹林组均能显著抑制二甲苯致
小鼠耳肿胀度(P < 0. 05,P < 0. 01) ;随着 SELB 剂
量增大,小鼠耳肿胀度减少,说明作用与剂量有关。
表 6 SELB对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响(x ± s,n = 10)
Table 6 Effect of SELB on auricular edema causing by dimeth-
ylbenzene in mice (x ± s,n = 10)
组别
Group
剂量
Dose
(g /kg)
肿胀度
Degree of
edema (mg)
空白对照组 - 0. 86 ± 0. 28
低剂量组 0. 95 0. 40 ± 0. 16*
中剂量组 1. 899 0. 30 ± 0. 12*
大剂量组 3. 798 0. 14 ± 0. 06**
阿斯匹林组 0. 200 0. 29 ± 0. 11*
4 讨论
实验结果显示:SELB能显著提高热板致痛小鼠
的痛阈和醋酸致痛小鼠的扭体抑制率;与戊巴比妥
钠有协同作用,可显著延长小鼠睡眠时间,并且可显
著减少小鼠自主活动次数;能显著抑制蛋清所致的
大鼠足跖肿胀,显著降低二甲苯所致的小鼠耳肿胀。
证明 SELB具有显著的镇痛、镇静和抗炎作用。
已有的研究结果表明:长春七的脂溶性部位具
有生物活性[3,4],考虑到使用有机溶剂提取有效部
位的方法存在残留溶剂和环境污染等问题,以及超
临界萃取法具有环保及适合工业化生产的特点,本
文对 SELB的药理作用进行了研究,证实了 SELB的
镇痛、镇静和抗炎作用。
SELB的镇痛、镇静和抗炎作用与长春七具有的
祛风湿,镇痛等功效相符,也与其临床应用相一致。
长春七的镇痛、镇静和抗炎作用机理有待于进一步
研究。
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