全 文 ：2009年 9月第 29卷第 5期
Sep.2009　Vol.29 　No.5
现　代　中　医　药
ModernTraditionalChineseMedicine · 79　·
药 物 研 究
乌骨藤药材中绿原酸的含量测定研究
王文骊　　张雪慧
(陕西中医学院附属医院 ,陕西 咸阳 712000)
摘要:目的 建立 RP-HPLC测定乌骨藤药材中绿原酸含量的方法。方法 采用 C18柱 ,流动相:乙腈 -0.4%
磷酸(10:90),流速:1.0mL/min, 检测波长:327nm。结果 绿原酸在 0.126 ～ 0.840μg的范围内线性关系良好 ,
相关系数为 0.9996;平均回收率为 98.13%;RSD为 1.13%。结论 本方法简便快速 , 分离度好 ,结果准确可靠。
关键词:乌骨藤;绿原酸;高效液相色谱法
中图分类号:R284　　文献标识码:B　　文章编号:1672-0571(2009)05-0079-02
ChlorogenicAcidContentAssayinGlaucescentFissistigmaRoot
WangWenli　　ZhangXuehui
(TheAfiliatedHospitalofShaanxiUniversityofChineseMedicine, Xianyang, Shaanxi, 712046)
Abstract:ObjectiveToestablishthemethodofassayingchlorogenicacidinglaucescentfissistigmarootwithRP-
HPLC.MethodsC18column, mobilephase:acetonitrile-0.4% phosphoricacid(10:90), flowrate:1.0mL/min,
detectionwavelength:327nm.ResultsChlorogenicacidshowedagoodlinearrelationshipintherangeof0.126 ～ 0.840
μg, correlationcoefficientwas0.9996;theaveragerecoveryratewas98.13%;RSDwas1.13 %.ConclusionThis
methodiseasyandquickwithgoodseparationdegreeandaccurateandcredibleresults.
KeyWords:glaucescentfissistigmaroot, chlorogenicacid, higheficiencyliquidchromatography
　　乌骨藤具有清热解毒 、止咳平喘等功效 ,用于
肺炎 、咳喘等 ,收载于 《中国药典 》(1977版)。现代
药理研究表明 ,具有明显的抗肿瘤活性 。其含有多
种甾体酯苷 、生物碱 、有机酸 、多糖 、树脂及色素等
化学成分 ,且各种成分的含量均较低 ,活性成分亦
不明确 [ 1] 。为有效控制药材的质量 ,选择指标性成
分绿原酸作为质量控制的定量指标 。绿原酸的含
量测定方法 ,以高效液相色谱法报道居多 ,本文参
照 《中国药典 》[ 2]与文献[ 3-5]建立乌骨藤药材含量
测定方法 ,且方法简便 、灵敏 、稳定 、可靠。
1　仪器与试药
1.1　美国 Waters600高效液相色谱仪 , 配 Wa-
ters600泵;Waters2487紫外检测器;Milennium32色
谱工作站 , UV-2550紫外可见分光光度计 。SB-
3200DT超声波清洗器 , BT-25S型电子天平;绿原
酸对照品(批号 110753-200212,中国药品生物制
品检定所),乙腈为色谱纯 ,水为重蒸馏水 ,其余试
剂均为分析纯。
1.2　检测波长的选择　采用 UV-2550紫外 -可见
分光光度计 ,对绿原酸对照品溶液在 200 ～ 400nm波
长范围内进行扫描 ,结果在 327nm波长处有最大吸
收 ,因此 ,选定 327nm为检测波长。
2　方法与结果
2.1　色谱条件与系统适应性试验　色谱柱为 Kro-
masilODS(5μm, 4.6mm×250mm);流动相:乙腈
-0.4%磷酸(10:90);检测波长:327 nm;流速:1
mL/min;柱温:室温。在此色谱条件下 ,样品中绿
原酸色谱峰与其它色谱峰分离度好 ,理论塔板数以
按绿原酸峰计算不低于 5000。
2.2　线性关系考察　取绿原酸对照品适量 ,精密
称定 ,置于 5mL的容量瓶中 ,以甲醇溶解并稀释至
刻度 ,得浓度为 0.42mg/mL的绿原酸对照品溶液 ,
备用。取此对照品溶液以流动相稀释 10倍 ,分别
精密吸取稀释溶液 3、5、10、15、20μL,按上述色谱
条件注入色谱仪 ,测定峰面积。以峰面积 A对绿原
酸进样量 C(μg)进行回归 ,得回归方程 A=3.12×
10
6C+2.24×105 ,相关系数 r=0.9996,绿原酸在
0.126 ～ 0.840μg范围内线性关系良好。
2.3　供试品溶液的制备　取乌骨藤药材 ,粉碎 ,过
40目筛 ,精密称取 0.5 g,置锥形瓶中 ,精密加入
50%甲醇 20mL,密塞 ,称定重量 ,超声提取30min,
放冷 ,称定重量 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤
过 ,取续滤液 ,即得 。
2.4　精密度试验　精密吸取供试品溶液 10μL,连
续进样 5次 ,记录绿原酸峰面积 , RSD为 1.45%,
结果表明 ,本方法精密度良好。
2.5　重复性试验　取同一批乌骨藤药材 5份 ,按供
试品制备方法制备样品 ,进样 ,依法测定含量 ,含量
分别为 0.0109%、0.0113%、0.0107%、0.0115%、
0.0110 %(n=5), 平均含量 0.0111%, RSD为
2.88%,表明本方法重复性良好。
2.6　稳定性试验　称取本品适量 ,按供试品制备
DOI :10.13424/j.cnki.mtcm.2009.05.036
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方法制备供试液 ,分别于 0、2、4、8、10 h不同时间
进样 10μL测定面积 , RSD为 1.94%,结果表明 ,
本品在 10h内稳定 。
2.7　回收率试验　采用加样回收法 ,取已知含量
的乌骨藤供试品 6份(含量:0.0113 %),每份约
0.5g,精密称定 ,分别精密加入对照品溶液 4mL
(C绿原酸 =0.42mg/mL),按 2.3项下方法制备
供试品溶液并进行含量测定 ,按下式计算回收率 ,
绿原酸对照品的平均回收率为 98.13 %, RSD为
1.13%。说明本法回收率好 ,方法可行 。
2.8　药材含量测定　依据 2.3项下供试品制备方
法 ,按选定的色谱条件测定 3批药材峰面积 ,计算 ,
结果见表 1。
表 1　乌骨藤药材中绿原酸的含量测定结果
试验号 绿原酸含量(%) 平均含量(mg/g)
1 0.0115
2 0.0112 0.0115
3 0.0117
　　根据上述测定结果 ,暂规定本品含绿原酸(C16H18O9)不得少于 0.008%。
3　讨论
曾选择甲醇 -水 -冰醋酸 、甲醇 -磷酸二氢钠
缓冲溶液 、乙腈 -磷酸二氢钠缓冲溶液等溶剂系统
作为流动相 ,结果均难以达到基线分离 ,笔者通过
大量摸索最终确立乙腈 -0.4%磷酸(10:90)为流
动相 ,结果方法学考察精密度 、重复性 、回收率均良
好 ,故以此法建立了乌骨藤药材含量测定方法 ,从
而更好得控制药材质量。
参考文献
[ 1]蔡兴东 ,刘新 , 钟国跃 ,等.抗癌中药乌骨藤的研究进展
[ J] .井冈山学院学报 , 2005, 26(2):123-124.
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部)[ M] .北京:化学工业出版社 , 2005:6.
[ 3]刘峰群 ,崔燕 , 金城 ,等.高效液相色谱法测定乌骨藤注
射液中绿原酸的含量 [ J] .中医药学刊 , 2004, 22(2):
375-376.
[ 4]苏天安 ,岳正刚 , 郭耀武 ,等.高效液相色谱法测定消癌
平片中绿原酸的含量 [ J] .陕西中医学院学报 , 2005, 28
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[ 5]赵子剑 , 赵启鹏 , 刘敏 , 等.HPLC测定复方石淋通片中
绿原酸的含量 [ J] .现代中医药 , 2005, 25(5):69-70.
(收稿日期:2009-05-04)
复方制剂中多糖含量测定方法研究
杨莲芳 1　　刘　珍2
(1.陕西省中医医院 ,陕西 西安 710003;2.陕西省中医药研究院 ,陕西 西安 710003)
摘　要:目的 建立复方中药复方制剂中多糖含量测定方法。方法 采用紫外分光光度法测定中药复方制剂
中总多糖的含量 , 比较样品不同处理方法多糖含量测定结果。结果 经方法学考察 , 葡萄糖浓度在 10 ～ 120 μg/
mL范围内与吸光度呈良好的线性关系。结论 本方法重现性好 , 平均回收率 97.51 %, RSD=1.33%, 可客观反
映中药复方制剂中多糖含量。
关键词:复方制剂;多糖;紫外分光光度法
中图分类号:R284　　文献标识码:B　　文章编号:1672-0571(2009)05-0080-02
　　多糖的含量测定方法一般采用苯酚 -硫酸法
或蒽酮 -硫酸法 ,其原理为多糖类在浓硫酸作用下
先水解为单糖分子 ,并迅速脱水生成糠醛衍生物 ,
糠醛衍生物再与苯酚结合成有色化合物 ,以紫外分
光光度法在适当波长测定多糖含量 。这两种显色
方法用于原料药还可以 ,如果用于中药复方制剂的
话 ,由于复方制剂所含成分复杂 ,硫酸显色作用广
泛 ,可能会有干扰 ,从而影响测定结果。传统的观
念认为多糖生理活性不强 ,在中草药提取制备过程
中常将多糖作为杂质除去 ,自 20世纪 70年代以来
陆续发现多糖及多糖复合物参与了细胞生命的代
谢和调节 ,中草药多糖在增强机体免疫功能及抗肿
瘤 、抗肝炎 、抗溃疡 、调血脂 、降血糖 、抗衰老方面有
作用[ 1] ,已逐渐成为当今新药开发的方向之一 ,因
此 ,在对中草药及其制剂进行研究的过程中 ,在重
视其他化学成分的同时亦应关注多糖的含量 ,本文
对复方制剂中多糖的含量测定方法作一概述 。
1　仪器 、材料与试剂
1.1　仪器与材料　UV-7504型紫外分光光度计;
D101大孔吸附树脂(天津制胶厂)
1.2　试剂　D-葡萄糖(中国药品生物制品检定
所 ,批号 110833-200503),甲醇 、苯酚 、硫酸均为
分析纯 ,水为蒸馏水 。
2　对照品溶液的制备
精密称取 105℃干燥至恒温重的无水葡萄糖
对照品 40mg,置 100mL量瓶中 ,加水溶解并稀释
至刻度 ,摇匀 ,即得。
3　方法学考察
3.1　测定波长的选择　精密吸取葡萄糖标准溶液 、
蒸馏水各 0.5 mL, 加入新配制的 5 %苯酚溶液