全 文 ：黄芥子中芥子酶活性的测定及炮制对其活性的影响
谭朝阳，于 静，崔培梧，徐德宏
(湖南中医药大学，湖南 长沙，410208)
［摘要］ 目的:观察不同炮制条件下黄芥子中芥子酶活性的变化。方法:采用高效液相色谱法测定酶促反应后底物黑
芥子硫苷酸钾的剩余量，Kromasil C18(4. 6mm × 250mm，5μm)色谱柱，流动相为 5mmol /L 四甲基溴化铵溶液∶乙腈 = 1∶ 0. 02，检
测波长 227nm。结果:芥子酶的活性可准确测定。结论:随着炮制温度的提高和炮制时间的延长，黄芥子中芥子酶活性急剧降
低，芥子酶灭活的炮制条件应不低于 140℃。
［关键词］ 芥子酶;黄芥子;酶活性;炮制
［中图分类号］Ｒ284. 1 ［文献标识码］A ［文章编号］1003 － 7705(2015)05 － 0175 － 02
第一作者:谭朝阳，男，副教授，硕士研究生导师，研究方向:中药质量与资源的研究
Determination of myrosase activity in Brassica juncea (L. )Czern. et Coss.
and effect of processing on myrosase activity
TAN Zhao － yang，YU Jing，CUI Pei － wu，XU De － hong
(Hunan University of Chinese Medicine，Changsha 410208，Hunan，China)
Abstract:Objective:To observe the changes in myrosase activity in Brassica juncea (L. ) Czern. et
Coss. under different processing conditions. Methods:High － performance liquid chromatography was used to deter-
mine the residual amount of potassium myronate (substrate)after enzymatic reaction;the Kromasil C18 column
(4. 6mm ×250mm，5μm)was used as a chromatographic column;the mobile phase was 5mmol /L tetramethyl am-
monium bromide － acetonitrile (1 ∶ 0. 02);the detection wavelength was 227nm. Ｒesults:The activity of myrosase
can be accurately determined. Conclusion:The activity of myrosase in Brassica juncea (L. )Czern. et Coss. was
sharply reduced as the processing temperature increases and the processing lasted，and the processing temperature
should be not less than 140℃ for the inactivation of myrosase.
Key words:myrosase;Brassica juncea (L. )Czern. et Coss;activity;processing
芥子为十字花科植物白芥 sinapis alba L. 和芥 Brassica
juncea (L.)Czern. et Coss. 的干燥成熟种子，前者习称白芥
子，后者习称黄芥子［1］。芥子味辛温，能温肺豁痰利气，散
结通络止痛，临床上常用来消肿毒及袪痰等。芥子内服多
用炮制品，炮制的主要目的之一是杀酶保苷，灭活芥子酶以
防止白芥子苷的降解。后者在体内可缓慢水解，释放白芥
子油而产生治疗效果［2］。本文通过测定黄芥子中芥子酶的
活性，并研究不同炮制条件下对芥子酶的活性影响，从而指
导炮制条件的优选。
1 仪器与试药
1. 1 仪器 日本岛津 LC － 10A高效液相色谱仪。
1. 2 试药 黄芥子购自湖南廉桥市场，经作者鉴定为芥
Brassica juncea (L.)Czern. et Coss. 的干燥成熟种子。黑芥
子硫苷酸钾(Sinigrin hydrate)购于 Sigma 公司，乙腈为色谱
纯，其余均为分析纯。酶提取缓冲液:1mol /L磷酸钾缓冲液
(pH = 7. 2)，含 1mmol /L EDTA，3mmol /L二硫苏糖醇，5%甘
油，在 4℃储存。酶反应体系溶液:33. 3mmol /L 磷酸钾缓冲
液(pH = 7. 2)，贮存于 4℃。
2 方法与结果
2. 1 酶液提取 取黄芥子 1. 5g，加液氮研磨成粉末后，加
入预冷的酶提取缓冲液 10mL，涡旋振荡，取溶液 4℃
12000r /min离心，回收上清液作为酶提取液备用。
2. 2 底物黑芥子硫苷酸钾测定的条件 采用 HPLC 法，色
谱柱为 Kromasil C18 (4. 6mm × 250mm，5μm)，流动相:
5mmol /L 四甲基溴化铵溶液 ∶ 乙腈 = 1 ∶ 0. 02;检测波长为:
227nm;流速:1. 02mL /min;柱温:25℃;进样量:20μL。HPLC
图见图 1。
2. 3 底物黑芥子硫苷酸钾测定的方法学考察
2. 3. 1 标准曲线的绘制 取黑芥子硫苷酸钾，用酶反应体
系溶液配成 0. 25、0. 5、1. 0、1. 5、2. 0mmol /L 的系列浓度，按
2. 2 项下方法测定峰面积积分值。以进样量为横坐标，峰面
积积分值为纵坐标，绘制标准曲线，其回归方程为Y =6. 98 ×
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第 31 卷第 5 期
2015 年 5 月 HUNAN JOUＲNAL OF TＲADITIONAL CHINESE MEDICINE
Vol. 31 No. 5
May 2015
图 1 底物黑芥子硫苷酸钾 HPLC图
106X + 2. 90 × 105，r = 0. 9997。
2. 3. 2 精密度试验 取未炮制的黄芥子生品，按 2. 1 项下
方法提取制成酶液，精密量取 2. 0mL，置沸水浴中加热
5min，精密加入 2. 0mL用酶反应体系溶液配制的 1. 0mmol /L
黑芥子硫苷酸钾溶液，准确反应 5min，用 0. 45μm 微孔滤膜
滤过，作为供试品溶液。精密量取 20μL，连续进样 5 次，按
2. 2 项下方法测定峰面积积分值，结果 ＲSD为 1. 1%。
2. 3. 3 稳定性试验 精密量取供试品溶液 20μL，分别于
0、3、6、9、12h进样，按 2. 2 项下方法测定峰面积积分值，结
果 12h内 ＲSD为 1. 6%。
2. 3. 4 重复性试验 取黄芥子生品酶液 5 份，每份 200μL，
置沸水浴中加热 5min，精密加入 200μL 用酶反应体系溶液
配制的 1. 0mmol /L黑芥子硫苷酸钾溶液，准确反应 5min，用
0. 45μm微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。按 2. 2 项下方法
测定黑芥子硫苷酸钾的量，结果 ＲSD为 2. 1%。
2. 4 酶活性测定方法 精密量取用酶反应体系溶液配制
的 1. 0mmol /L 黑芥子硫苷酸钾溶液 200μL，在 37℃条件下
加入酶液 200μL，准确反应 5min，然后在沸水浴中加热
5min，经 0. 45μm微孔滤膜滤过后，按 2. 2 项下方法，测定剩
余黑芥子硫苷酸钾的量。HPCL图见图 2。
图 2 酶促反应后 HPLC图
2. 5 酶活性的计算 在 PH7. 2、37℃条件下，以单位材料
(鲜重)每分钟降解 1μmol的黑芥子硫苷酸钾所需要的酶量
称为 1 个活力单位(U/g)，计算公式如下:N × VEX
U = VE × t × W
式中:N为反应前后黑芥子硫苷酸钾的改变量(μmol);VEX
为酶提取液总体积(mL);VE 为加入反应的酶液体积(mL);
t为反应时间(min);W为材料鲜重(g)。
2. 6 炮制品的制备 取黄芥子药材 9份，每份 50g，取另 3份
于 140℃分别烘制 5、10、15min，剩余 3 份于 160℃分别烘制 5、
10、15min。其中 3份置烘箱中于 120℃分别烘制 5、10、15min。
2. 7 酶活性测定结果 取各样品，按 2. 1 项下方法提取酶
液，每种酶液各取 3 份按 2. 4 项下方法测定酶活性，结果见
表 1。
表 1 黄芥子各炮制品中芥子酶活性(U/g，n = 3)
炮制温度 5min 10min 15min
120℃ 0. 40 0. 27 0. 04
140℃ 0. 01 0. 01 0
160℃ 0. 02 0 0
注:未炮制的生品，其酶活力经测定为 0. 46(U/g)
4 讨 论
芥子酶即 β －硫代葡萄糖苷酶(EC3. 2. 3. 1)，存在于所
有含 β －异硫氰酸盐的植物中，主要分布于十字花科植物。
芥子酶可以分解硫代葡萄糖苷，生成葡萄糖、异硫代氰酸
盐、硫酸盐、乙腈、硫氰酸盐等物质［3］。
芥子的主要成分之一白芥子苷可在芥子酶的作用下水
解生成硫代异氰酸对羟苄酯(即白芥子油)及酸性硫酸芥子
碱和葡萄糖，白芥子油使药物具有强烈刺激气味。芥子炮
制的主要目的之一是杀酶保苷，灭活芥子酶以防止白芥子
苷的降解，减少服用时药物的刺激性。同时白芥子苷进入
体内后可缓慢水解，释放白芥子油而产生治疗效果［2］。
芥子酶的活性一般通过测定葡萄糖的生成量或底物浓
度的变化来计算［4］。本文参照文献［3］中方法进行酶液提
取和进行酶促反应，所需底物的用量少。但按文献方法采
用紫外分光光度法测定剩余底物量时，由于粗酶提取液中
其他成分的干扰，无法准确测量，故改用 HPLC法进行测定，
可以准确测出剩余底物量。
芥子传统炮制方法是采用清炒的方式，但由于炒制时
温度不易控制，故本文采用烘箱烤制的方法来模拟炒制过
程，以考察炮制温度和时间对芥子酶活性的影响。实验结
果表明，炮制温度在 120℃时，芥子酶的灭活需要 15min 以
上，但温度升至 140℃以上时，只需 5min基本可以灭活。
由于炮制时芥子中的其他成分也易受到破坏，例如芥
子中另一主要成分芥子碱，随着炮制温度的提高和炮制时
间的延长，其含量不断降低(实验结果另文发表)。因此芥
子的炮制条件以 140℃时，炮制 5 ～ 10min 为佳。既能保证
酶被灭活，也可更多地保留芥子碱等成分。
参考文献
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(收稿日期:2015 － 01 － 08)
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