全 文 ：表 1 黄芩苷加样回收率试验结果
取样量
(g)
样品中
含量(mg)
对照品加
入量(mg)
测得值
(mg)
回收率
(%)
RSD
(%)
0.270 2 1.125 7 1.026 8 2.101 5 95.04
0.264 1 1.100 2 1.026 8 2.089 3 96.33
0.254 3 1.059 4 1.026 8 2.085 9 99.97 1.29
0.257 2 1.071 5 1.026 8 2.086 7 98.87
0.263 2 1.096 5 1.026 8 2.091 0 96.85
平均回收率为 97.41%,结果表明 ,方法可行。
2.10 样品测定 精密吸取对照品溶液与供试品溶
液各 10μL ,注入色谱仪 ,依法测定 3批样品 ,黄芩苷
含量分别为1.249 ,1.346 ,1.314 mg 片 。
3 讨论
本品是由 18味中药组成的复方制剂 ,成分复
杂。因方中黄芩苷含量高 ,方法成熟 ,有对照品 ,所
以在复方参羚片制剂中选择了黄芩苷为定量指标 ,
以控制该产品的质量 。
黄芩苷为黄酮苷 ,根据其溶解性 ,分别选择了甲
醇 、75%甲醇及 50%甲醇提取 ,提取方法采用回流法
及超声提取 ,结果回流法由于加热提取 ,故杂质含量
较超声法多 ,故选择超声提取;通过比较 3种提取溶
剂 ,结果显示 75%甲醇提取效率较高 ,故 75%甲醇
作为提取溶剂。
黄芩苷 280 nm波长处有最大吸收 ,故在本试验
选择 280 nm波长为测定波长。参考文献资料 ,曾以
甲醇-水(40∶60)、甲醇-0.5%磷酸溶液(40∶60)及甲
醇-0.2%磷酸溶液(44.5∶55.5)为流动相 ,结果以甲
醇-0.2%磷酸溶液(44.5∶55.5)为流动相 ,供试品溶
液中的黄芩苷才能与相邻峰分开 ,根据计算结果理
论板数按黄芩苷峰计算应不少于2 500。
[参考文献]
[ 1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典[ S] .一部 , 北
京:化学工业出版社 , 2005.附录 VID.
乌骨藤药材中绿原酸的含量测定方法研究
王月敏＊ ,夏素霞 ,于绍军 ,王淑清
(辽宁省中医药研究院 ,辽宁 沈阳 110034)
[ 摘要] 目的:建立乌骨藤药材中绿原酸的高效液相测定方法。方法:采用 Hypersil ODS2 色谱柱(5 μm , 4.6 mm×200
mm);流动相:乙腈-0.4%磷酸(9∶91);流速:0.9 mL min;检测波长 327 nm。结果:绿原酸色谱峰得到很好的分离 , 在0.051 2 ～
0.819 2 μg范围内线性关系良好(r=0.999 1), 回收率 97.59%。结论:该方法精密度高 ,重复性好 , 可用于控制药材的质量。
[ 关键词] 绿原酸;乌骨藤;高效液相色谱
[ 中图分类号] R284.1 [文献标识码] B [ 文章编号] 1005-9903(2007)07-0012-02
乌骨藤具有抗肿瘤 、平喘等作用。乌骨藤制成
的制剂消癌平片中绿原酸含量的测定研究已有报
道[ 1] 。虽然在消癌平注射液基础上已有消癌平片 、
消癌平颗粒 、消癌平胶囊 、消癌平软胶囊等多种制剂
已经获得生产许可或正在申报 ,但乌骨藤药材的标
准中却无含量测定项 ,加之乌骨藤因产地 、采收季节
[ 收稿日期] 2006-11-13
[ 通 讯 作 者 ] ＊王月敏 , Tel:(024) 86112937; E-mail:
WYMMOON66@sina.com
等原因 ,质量差异较大 ,因此本文对乌骨藤药材中绿
原酸含量测定的方法进行了研究 。结果显示本方法
重复性好 ,稳定 ,可作为控制本品质量的标准。
1 仪器 、试剂与试药
仪器:江申 LC-10P 液相泵 ,LC-10 UV检测器 ,天
津 HS3120超声波清洗器;岛津 UV-260分光光度计;
试剂:甲醇为色谱纯。其它试剂为分析醇 ,水为
重蒸馏水。
药材:乌骨藤药材购于辽宁省药材公司 ,经曲以
瞬鉴定为萝摩科植物乌骨藤 Marsdenia tenocissima
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第 13卷第 7 期
2007年 7 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.13 , No.7
Jul., 2007
DOI :10.13422/j.cnki.syf jx.2007.07.006
(Roxb.)Wight et Arn.的干燥藤茎。
绿原酸对照品来源于中国药品生物制品检定所
(批号:110753—200212),供含量测定用 , 经纯度检
查 ,含量为 99.64%。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件与系统适应性 Hypersil ODS2(5 μm
4.6 mm×200 mm)色谱柱;乙腈-0.4%磷酸(9∶91)为
流动相;流速:0.9 mL min;检测波长 327 nm;进样量
10 μL;理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于5 000。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取经五氧化二磷
干燥至恒重的绿原酸对照品适量 ,加 50%甲醇制成
每1 mL含 50μg 的溶液 ,即得 。
2.3 线性关系考察 精密吸取绿原酸对照品溶液
(51.2 μg mL)1 ,2 ,4 ,8 , 12 ,16μL ,分别注入液相色谱
仪中 ,测定峰面积。以峰面积值(A)对进样量(C)进
行回归 ,得标准曲线方程:A =6.318 3 ×106 C -
6.396 4×104 , r=0.999 1。
进样量在0.051 2 ～ 0.819 2μg范围内 ,绿原酸峰
面积与进样量有良好的线性关系。
2.4 供试品溶液的制备 取乌骨藤粉(40 目)0.5
g ,精密称定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加入 50%甲醇
25 mL ,称重 ,超声处理 20 min ,放冷 ,称重 ,用 50%甲
醇补足减失的重量 ,摇匀 ,滤过 ,取续滤液 ,即得。
2.5 精密度考察 吸取同一供试品溶液 10 μL ,注
入液相色谱仪 ,重复 5次 ,测定峰面积 ,结果 RSD=
1.04%。
2.6 稳定性考察 供试品溶液于 0.1 ,2 ,4 ,6 h吸取
10μL ,注入液相色谱仪 , 测定峰面积 ,结果 RSD=
0.71%,表明 6 h内供试品溶液的稳定性较好。
2.7 重复性考察 取药材粉 5份 ,制成供试品溶
液 ,分别吸取每一供试品溶液 10 μL ,注入液相色谱
仪 ,测定峰面积 ,计算含量 ,结果 RSD=1.09%。
2.8 回收率考察 采用加样回收实验方法 ,取己测
得含量的样品(1.89 mg g)共 6份 ,每份 0.25 g ,精密
称定 ,分别加入绿原酸对照品溶液(0.398 mg mL)1
mL 和 50%甲醇 24 mL ,按供试品溶液制备方法 ,测
定绿原酸的含量 ,计算回收率 。其试验结果见表 1。
表 1 绿原酸加样回收率考察结果
取样量
(g)
样品中
含量(mg)
加入对照
品量(mg)
检出总量
(mg)
回收率
%
平均回
收率% RSD%
0.250 2 0.472 9 0.398 0.867 7 99.20
0.249 1 0.470 8 0.398 0.856 3 96.86
0.251 4 0.475 1 0.398 0.865 4 98.07 97.59 1.13
0.248 8 0.470 2 0.398 0.859 5 97.81
0.244 2 0.461 5 0.398 0.850 1 97.64
0.253 6 0.479 3 0.398 0.861 2 95.95
2.10 3批药材的含量测定 我们测定了 3批药材
中绿原酸 的含 量 , 结果 分别 为 0.083 , 0.124 ,
0.203%。
3 结论与讨论
在前期预实验中我们发现 ,药材的提取条件对
绿原酸的含量影响较大 ,特别是提取溶媒的影响 。
故我们对提取方法 、提取溶媒 、提取时间进行了详细
的考察 ,因篇幅所限 ,本文仅报道了不同浓度甲醇的
超声提取部分。比较了超声与回流提取 2种方法 ,
绿原酸的提取效果接近 ,超声方法较回流提取简便 ,
易于操作 ,故选择超声提取方法 。
绿原酸极性较大 ,采用 30%,50%,70%甲醇提
取 ,效果接近 ,因 30%甲醇提取液滤过困难 ,故选择
以 50%甲醇作为提取溶媒为宜。
采用 50%甲醇为提取溶媒 ,考察了超声提取
10 ,15 ,20 ,25 ,30min ,结果超声提取20 min ,绿原酸提
取即已完全 ,故超声提取 20 min即可。
在测定的乌骨藤药材中绿原酸的含量与已报
道[ 1]的结果相差 10倍 ,我们分析原因可能有二:其
一 ,药材产地不同所致含量差异较大 ,我们所测定的
3批药材产于云南 ,而文献中未提到实验所用药材
的产地;另一个原因是提取方法不同所致 ,文献中提
取溶媒采用的是甲醇 ,而我们在提取条件考察中发
现甲醇不能将绿原酸提取完全 ,而致含量偏低 。
[参考文献]
[ 1] 谭朝阳 ,雷玉萍.HPLC 法测定乌骨藤及其制剂消癌平
片中绿原酸的含量研究[ J] .中医药学刊 , 2004 , 22(7):
1354.
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第 13卷第 7 期
2007年 7 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.13 , No.7
Jul., 2007