全 文 : 2006, Vol. 27, No. 09 食品科学 ※工艺技术140
杏仁中苦杏仁甙的水提取工艺及其含量的测定
李 强,陈锦屏
(陕西师范大学食品工程系,陕西 西安 710062)
摘 要:本文用水为溶剂提取杏仁中的苦杏仁甙,采用紫外分光光度法,以甲醇为溶剂,在检测波长为219nm
处测定苦杏仁甙的含量,并讨论了料液比、浸泡时间、提取时间以及提取次数对苦杏仁甙的水提取工艺的影响。
结果表明:紫外分光光度法测定杏仁中苦杏仁甙在0.01~0.10mg/ml浓度范围内,线性关系良好(r=0.9996),平均
回收率在99.751%~102.124%,相对标准偏差为0.9749%,可见此测定法快速、简便、稳定、准确、可靠;水
提取杏仁中苦杏仁甙时,影响提取效果的主次顺序为提取时间>料液比>浸泡时间。最佳提取参数为:提取时间
20min,料液比1:10,浸泡时间3min,提取2次。
关键词:苦杏仁甙;提取;测定
Water Extracting Process for Amygdalin in Almond and Its Content Determination
LI Qiang,CHEN Jin-ping
(Department of Food Engineering, Shaanxi Normal University, Xi’an 710062, China)
Abstract :In this paper, amygdalin was extracted by water and determined by ultraviolet spectrophotometry. The solvent was
methanol, the detection wavelength was 219nm. And the effects of the ratio between amygdalin and water as extracting solvent
at different solid-liquid rates, the soaking time and the length of extracting time were discussed. The experimental results indicated
that the concentration is in the range of 0.01~0.10mg/mg with the r as 0.9996. The recovery is from 99.751% to 102.124%, and
the coefficient of variation is 0.9749%. This method is rapid, simple, stable and accurate, reliable; the effectiveness orders with
different ratios of amygdalin and water are: extracting time>soli -liquid atio>soaking time. The optimum technological
conditions are: extracting time 20min, solid-liquid ratio 1:10, soaking time 30min and 2 times extract.
Key words:amygdalin;extraction;determination
中图分类号:R248.2 文献标识码:A 文章编号:1002-6630(2006)09-0140-04
收稿日期:2005-09-30
作者简介:李强(1979-),女,硕士研究生,研究方向为果品蔬菜加工工艺。
杏仁(Semen armeniacae amarae)又叫杏核仁,它
为蔷薇科(Rosaceae)落叶乔木植物杏(Prunus armeniaca L.)
或山杏(Prunus armeniaca L Varansu Masim)等果实的干燥
种子[1]。苦杏仁甙是传统中药杏仁中的有效成分,经证
实它具有镇咳平喘、润肠通便、抗肿瘤等作用[ 2 ],由
于其药用价值高,对杏仁中苦杏仁甙的提取及含量测定
研究具有十分重要的意义。目前已报道的苦杏仁甙含量
测定方法有硝酸银滴定法[3]、薄层扫描法[4]、HPLC法[5]
等。为充分开发利用此药材,控制其质量,本文以水
作为提取剂,研究了提取时不同料液比、不同浸泡时
间、不同提取时间的条件下提取杏仁中苦杏仁甙,以
纯度大于99%的苦杏仁甙为对照品,采用UV法,在
波长291nm处对杏仁中苦杏仁甙进行了含量测定,目前
该法还未见报道。
1 材料与方法
1.1仪器
紫外分光光度计UV-3010 日本日立;SHB-111 循
环水式从用真空泵 郑州长城科工贸有限公司;旋转蒸
发器 RSE-52 AA 上海亚荣生化仪器厂。
1.2材料与试剂
新疆轮台县小白杏杏仁;苦杏仁甙标准品(纯度大
于99%) Sigma公司;石油醚、甲醇(均为分析纯)、
去离子水。
1.3方法
1.31 提取方法
精密称取一定量经粉碎机粉碎并过筛的杏仁,加入
适量石油醚在室温下震荡浸提24h,过滤,滤渣用石油
141※工艺技术 食品科学 2006, Vol. 27, No. 09
醚清洗后挥干,称重,得到去油杏仁粉,将杏仁粉过
100目筛后备用。精密称取1.5g,放入磨口三角瓶中,
用定量的水浸泡提取,过滤,收取滤液,浓缩,定
容至50ml容量瓶中,摇匀得苦杏仁甙提取液。
1.32 分析方法[6]
1.3.2.1苦杏仁甙的紫外吸收光谱
以甲醇为溶剂配制苦杏仁甙标准溶液(0.1mg/ml),
置1cm石英小池,放在紫外分光光度计上,选择200~
300nm波长范围测定吸收A值,并以甲醇作空白记录其
紫外吸收光谱。苦杏仁甙于波长219nm处出现最大吸收
峰(见图1),因此确定检测波长为219nm。
0.50
0.45
0.40
0.35
0.30
0.25
0.20
200 250 300
A
λ(nm)
图1 苦杏仁甙在甲醇溶液中的紫外吸收光谱
Fig.1 UV absorption spectrum of amygdalin
1.32.2标准曲线的绘制
精密称取经105℃干燥至恒重的苦杏仁甙标准品
5mg,用甲醇溶解定容至50ml,制得0.1mg/ml苦杏仁甙
标准溶液。准确移取标准溶液1、2、3、4、5、6、
7、8、9、10ml,用甲醇分别定容至10ml,得到浓度
为0.01、0.02、0.03、0.04、0.05、0.06、0.07、0.08、
0.09、0.10mg/ml的系列标准溶液。用甲醇溶液做参比,
分别放入1cm石英池内,在219波长处分别测定其吸光
度,结果见表 1。
以浓度C为横坐标,吸光度A为纵坐标进行线性回
归,回归方程为A=505679C+0.0141,相关系数r=0.9996
(见图2)。
经查检验相关系数的临界值表得临界相关系数
r(99.9%,n-2)=0.872<r,说明苦杏仁甙浓度在0.01~0.10mg/ml
范围内,在波长219nm处测其吸光度值与浓度呈良好的
线性关系,可按标准曲线法进行定量分析[7]。
1.32.3供试液制备
精密移取一定量苦杏仁甙提取液,水浴加热浓缩至
干,冷却,用甲醇溶解定容至10ml容量瓶中,摇匀,
标样浓度C(mg/ml)0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0.10
吸光度 0.061 0.130 0.178 0.240 0.297 0.350 0.408 0.461 0.514 0.564
表1 吸光度与苦杏仁甙浓度的关系
Table 1 Relationship between absorbency and amygdalin concentrations
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.020.040.060.080.1
A
浓度(mg/ml)
图2 苦杏仁甙标准曲线
Fig.2 The standard curve of amygdalin
作为供试液,备用。
1.32.4供试液的测定
将供试液放入1cm石英池内,用甲醇溶液做参比,
在219波长处分别测定其吸光度,重复3次,根据回归
方程计算溶液浓度,进而计算出苦杏仁甙含量。测得
新疆小白杏杏仁中苦杏仁甙含量为3.084%。
1.32.5精密度实验
用苦杏仁甙对照品溶液(0.5mg/ml)于一日内在
219nm波长下重复测量吸光值6次,得日内精密度,
RSD=0.4089%,n=6;用同一份溶液连续测量6日,得
日间精密度,RSD=0.4978%,n=6。
1.32.6重现性实验
精密称取经去油处理后并过100目筛的杏仁粉6份,
每份1.5g,精密移取0.5ml经提取、定容后的样品测定
液,用甲醇定容至10ml容量瓶,在219nm波长下测量
吸光度A,计算RSD=0.2940%,n=6。
1.32.7稳定性实验
用同一份杏仁提取液放置48h,分别于以下时间
0.5、1、2、4、8、12、24、36、48h测定其吸光
度,计算RSD=0.3565%,n=9。实验结果表明,在实
验条件下,苦杏仁甙供试液的吸光度在48h内基本保持
不变。
1.32.8回收率实验
取已知苦杏仁甙含量的样品,共6份,每份约1.5g,
分别加入苦杏仁甙对照品,按样品测定液的制备项下提
取、定容后,精密移取0.5ml用甲醇二次定容至10ml容
量瓶,并在219nm波长下测定苦杏仁甙含量,计算平
均回收率,结果见表2。
2 结果与分析
2006, Vol. 27, No. 09 食品科学 ※工艺技术142
在苦杏仁甙的提取工艺中,诸多因素影响苦杏仁甙
的提取得率,经初步实验选定料液比、浸泡时间、提
取时间为主要因素,分别对以上因素做单因素试验。
2.1 单因素试验结果
2.1.1料液比对苦杏仁甙提取得率的影响
浸泡时间为30min,提取时间为15min,料液比
(g:ml)分别为1:4、1:6、1:8、1:10、1:12、1:14时,其
提取效果如图3所示。
项 样品含量 标准品加入量 回收量 回收率 平均回收率 RSD
目 (mg) (mg) (mg) (%) (%) (%)
1 80.5025.857 86.396100.632
2 80.8916.528 87.41899.985
3 81.0035.776 86.854101.298
100.94580.97494 80.6765.218 85.88199.751
5 80.3576.027 86.512102.124
6 79.9815.463 85.547101.885
表2 回收率实验结果(n=6)
Table 2¡ ¡Results of recovery experiment(n=6)
3.0
2.8
2.6
2.4
2.2
2
1.8
1:4 1:6 1:81:101:121:14
提
取
得
率
(
%
)
料液比(g/ml)
图3 料液比对提取得率的影响
Fig.3 Effect of solid-liquid ratio on yield
由图3可以看出,苦杏仁甙的提取得率与料液比有
关。当料液比为1:10时苦杏仁甙的提取得率(2.971%)要
比料液比为1:4时的提取得率(2.227%)高0.744%。这是因
为随着水量增加,会降低水中苦杏仁甙的浓度,增加
苦杏仁甙与水的接触面,从而使苦杏仁甙的溶解率增
大,但当料液比大于1:10时,苦杏仁甙的一次浸提率
趋于稳定,即一定比例的水已将有效成分基本溶出完
全。故从节约溶剂量和降低后续工序的成本等方面综合
考虑,选择料液比为1:10。
2.1.2浸泡时间对苦杏仁甙提取得率的影响
料液比(g:ml)为1:10,提取时间为15min, 浸泡时间
分别为0、10、20、30、40、50min时,其提取效
果如图4所示。
由图4可以看出,用95℃以上的沸水直接提取苦杏
仁甙时的提取得率(2.577%)比用常温水浸泡10min后提取
的提取得率(2.717%)要高出0.140%,这可能是因为在一
定时间内沸水更容易使杏仁中的苦杏仁甙溶出,但随着
3.0
2.8
2.6
2.4
2.2
2.0
1.8
0 10 20 30 40 50
提
取
得
率
(
%
)
浸泡时间(min)
图4 浸泡时间对提取得率的影响
Fig.4 Effect of soak time on yield
浸泡时间的增加,苦杏仁甙在常温水中的溶解率逐渐增
高,直至浸泡30min时,溶解率达到最高,之后溶解
率趋于稳定,提取得率也不在增加。
2.1.3提取时间对苦杏仁甙提取得率的影响
料液比(g:ml)为1:10,浸泡时间为15min, 提取时间
分别为0、10、20、30、40、50min时,其提取效
果如图5所示。
3.0
2.8
2.6
2.4
2.2
2
1.8
5 10 15 20 25 30
提
取
得
率
(
%
)
提取时间(min)
图5 提取时间对提取得率的影响
Fig.5 Effect of extrat time on yield
由图5可知,杏仁中苦杏仁甙的提取得率在5min时
较低,仅为2.197%,5~20min范围内苦杏仁甙得率随
提取时间的延长而明显提高,当提取时间20min 时,提
取得率达到最高值(2.983%)。当提取时间在20min以上
时,提取效果随时间的增加有所下降,这是因为在高
温下提取,时间过长部分杏仁蛋白变性,使得苦杏仁
甙不易溶入水中,而且长时间加热也会使部分苦杏仁甙
被破坏,提取得率下降,故从效益考虑,确定浸提时
间为20min最佳。
2.2 正交试验设计
在单因素试验的基础上,为了考察多因素的综合效
应,选择料液比、浸泡时间、提取时间为考察因素,
以测得的杏仁中苦杏仁甙含量为考察指标,每个因素选
3个水平,选用L9(34)正交表对芦笋中总黄酮提取工艺进
行研究,以确定较佳的工艺条件。各因素的试验安排
及苦杏仁甙的提取得率结果见表3。
143※工艺技术 食品科学 2006, Vol. 27, No. 09
因素
料液比 浸泡时间 提取时间
提取得率试验
(g:ml) (min) (min)
空列
(%)A B C D
1 1(1:8) 1(20) 1(10) 1 1.999
2 1 2(30) 2(20) 2 2.171
3 1 3(40) 3(30) 3 1.788
4 2(1:10) 1 2 3 2.888
5 2 2 3 1 1.924
6 2 3 1 2 2.069
7 3(1:12) 1 3 2 1.873
8 3 2 1 3 2.084
9 3 3 2 1 2.143
∑I 5.958 6.160 6.1526.066
∑II 6.281 6.179 6.6026.113
∑III 6.100 6.000 5.5856.160
K1 1.986 2.053 2.0512.022
K2 2.094 2.060 2.2012.038
K3 2.033 2.000 1.8622.053
R 0.108 0.060 0.3390.031
表3 正交试验设计及试验数据(完全随机模型)
Table 3 Design and data of orthogonal test(totally random
model)
变异来源 平方和 自由度 均方 F 显著水平
第1列 0.017472 0.0087411.864640.07773
第2列 0.006442 0.003224.376190.18601
第3列 0.173142 0.08657117.57040.00843
第4列* 0.001472 0.00074
误差 0.001502 0.00074
总和 0.19853
表4 正交设计方差分析表(完全随机模型)
Table 4 The table of variance analysis of orthogonal test
注:此正交试验方差分析是用DPS数据处理软件所做,当显著水平值
<0.05时为极显著,0.1<显著水平值<0.5时为较显著,显著水
平>0.1时为不显著(*表示空列)。
根据表3中的数据进行方差分析,结果见表4。由
表4可知,因素C (提取时间)影响极显著,因素A(料
液比)较显著,因素B(浸泡时间)不显著。各因素对杏仁
中苦杏仁甙水提工艺的影响大小次序为:提取时间>料
液比>浸泡时间;综合各因素K值并直观比较,得出
杏仁中苦杏仁甙水提工艺理论上的最佳工艺条件为
A2B2C2,即提取时间为20min,料液比为1:10,浸泡
时间时间为30min。
2.3 提取次数对苦杏仁甙提取得率的影响
选用正交试验所得最佳工艺条件,分别提取1、2、
3、4次,提取效果如图6所示。
3.2
3.0
2.8
2.6
2.4
2.2
2.0
1 2 3 4
提
取
得
率
(
%
)
提取次数(次)
图6 提取次数对提取得率的影响
Fig.6 Effect of extrat times on yield
由图6可知,提取次数越多,提取得率越高。但
是提取2次与3次所得到的苦杏仁甙量差别不大,可见
提取2次后杏仁中苦杏仁甙已基本提取完全,再增加提
取次数,提取率无显著增加。
3 结 论
3.1以纯度大于99%的苦杏仁甙为标准品,采用紫外
分光光度法,在波长为219nm处测定杏仁中苦杏仁甙的
含量,准确度与硝酸银滴定法基本一致。本法不仅稳
定,灵敏度高,方法简便,而且节约测定时间和试剂,
为测定杏仁中苦杏仁甙的含量提供了良好的方法。
3.2从杏仁中提取苦杏仁甙时,影响提取效果的主次
顺序为提取时间>料液比>浸泡时间。提取时间和料液
比对提取效果有显著影响,提取中应该严格控制。
3.3 由试验可知,水提取杏仁中苦杏仁甙时,最佳提
取参数为:提取时间20min,料液比1:10,浸泡时间
3min,提取2次。
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