全 文 ： 药理药化
收稿日期:2008-03-26;　修订日期:2008-09-20
作者简介:沈　岚(1975-),女(汉族),上海人 ,现任上海中医药大学副教
授 ,博士学位 ,主要从事中药活性成分 、新剂型新技术研究工作.
反相高效液相色谱法测定三七花中
人参皂苷 Rb1的含量
沈　岚1 ,冯　怡 1 ,徐德生2 ,苑素云 3 ,周　端 3
(1.上海中医药大学 ,上海　201203;　2.上海中医药大学附属曙光医院 ,上海　200021;
3.上海中医药大学附属龙华医院 ,上海　200230)
摘要:目的 为三七花质量标准研究打下基础。方法 采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法对三七花中人参皂苷 Rb1
含量进行测定。结果 人参皂苷 Rb1含量在 8h内基本稳定;精密度RSD为 0.55%,重复性 RSD为 4.12%, 高 、中 、低浓度
组的回收率分别为 102.88%, 97.87%, 103.57%。结论 方法学考察结果符合质量分析的要求 , 可用于三七花中人参皂
苷 Rb1含量测定。
关键词:三七花;　人参皂苷 Rb1;　反相高效液相色谱法
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2009)06-1482-02
StudyonDeterminationthePanaxGinsengSaponinRb1 inNotoginsengBudbyRP-
HPLC
SHENLan1 , FENGYi1 , XUDe-sheng2 , YUANSu-yun3 ,ZHOUDuan3
(1.ShanghaiUniversityofTCM, Shanghai201203, China;2.ShuguangHospitalofShanghaiUniversityof
TCM, Shanghai200021, China;3.LonghuaHospitalofShanghaiUniversityofTCM, Shanghai200230, Chi-
na)
Abstract:ObjectiveTogivethefoundationofqualitystandardofNotoginsengbud.MethodsRP-HPLCwasestablishedto
determineRb1 ofNotoginsengbud.ResultsThestabilitytimewas8h.Linearity, precisionandreproducibilityofthemethod
weregood.ConclusionThismethodaccordswiththeanalysisrequirement.ItcanbeusedindeterminingthecontentofRb1 in
Notoginsengbud.
Keywords:Notoginsengbud;　Rb1;　RP-HPLC
　　三七花是传统名贵中药五加科植物三七的花蕾 , 盛产于
我国西部云南 、广西 、西藏等地 , 作为药材 , 民间用于治疗高血
压病 、咽痛音哑 、津伤口渴等 。经前期药效研究表明 , 其抗高
血压病的有效部位为总皂苷 。有研究报道 [ 1] , 从三七花中分
得 10种化合物 , 经化学和光谱方法确定为 β -谷甾醇 、胡萝
卜苷 、三七皂苷 、绞股蓝皂苷 -Ⅸ 、人参皂苷 Rg1 、人参皂苷Rb1和人参皂苷 Rb3等。 三七花中人参皂苷含量最高 , 以人
参二醇苷为主 , 其中又以人参皂苷 Rb1较多 [ 2] 。 对于人参皂
苷 Rb1的含量测定方法有高效液相色谱法 、薄层扫描法 、气相
色谱法等 [ 3] , HPLC法中 CN柱和反相柱均可得到较好的分
离 。目前 , 关于三七的研究大都集中在其块根 , 块根也是现阶
段三七产业的基本原料药物。 由于三七花使用区域受限 , 使
其药材资源的经济价值未被充分利用 , 因此研究也较为薄弱。
本研究采用 RP-HPLC方法作为三七花药材中人参皂苷 Rb1
的含量测定方法 , 以期为其质量标准的建立打下基础。
1　仪器与试剂
高效液相色谱仪(1100化学工作站 ,美国安捷仑科技公司);
色谱柱 AlltechPlatinumC18 100A5μm 250 mm×4.6 mm;试剂均
为色谱纯。人参皂苷 Rb1对照品(中国药品生物制品检定所 ,供
含量测定用)。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱 AlltechPlatinumC18 100A5μm 250 mm×
4.6 mm;流动相为乙腈 -水(30∶70);检测波长为 203 nm。色谱
图见图 1 ～ 2。
2.2　供试品制备条件的考察
2.2.1　甲醇回流时间的考察 考察了甲醇回流时间对人参皂苷
Rb1提取的影响。结果见表 1。依据结果 , 确定甲醇提取时间为
4 h。
图 1　人参皂苷 Rb1 对照品色谱图
图 2　三七花药材色谱图
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时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6
2.2.2　石油醚提取次数考察 样品用甲醇提取后 , 提取液用石油
醚(30 ～ 60℃)萃取除杂 , 10 ml/次 , 考察不同提取次数对人参皂
苷 Rb1提取的影响。结果见表 2。 依据结果 , 为缩短样品处理时
间 , 确定石油醚提取次数为 2次。
2.2.3　水淋洗用量的考察 考察不同水淋洗用量对糖类成分
淋洗程度的影响 。结果见表 3。 依据结果 , 确定水淋洗用量
为 70 ml。
表 1　不同甲醇提取时间对含量测定的影响( x±s)
甲醇回流时间
t/h
人参皂苷 Rb
1
提取量 /mg· g-1生药
1 2 3
平均提取量
/mg· g-1生药
2 3.970 7 4.616 3 4.519 1 4.368 7±0.348 1
3 19.204 6 19.319 1 20.509 2 19.677 6±0.722 4
4 21.465 6 22.155 9 21.183 3 21.601 6±0.500 4
2.2.4　 20%乙醇淋洗用量的考察 考察不同 20%乙醇淋洗用量
对人参皂苷 Rb1提取的影响。结果见表 4。依据结果 ,确定 20%
乙醇淋洗用量为 50ml。
表 2　不同提取次数的比较( x±s)
石油醚
提取次数
人参皂苷 Rb1 提取量 C/mg· (g生药)-1
1 2 3
平均提取量
C/mg· (g生药)-1
2 19.204 6 19.319 1 20.509 2 19.677 6±0.722 4
3 20.544 5 19.264 2 20.142 5 19.983 7±0.654 8
表 3　不同水用量的比较
水淋洗用量 V/ml Molish反应
40 +
50 +
70 -
表 4　不同 20%乙醇用量的比较( x±s)
20%乙醇
淋洗用量 V/ml
人参皂苷 Rb1 提取量 C/mg· (g生药)-1
1 2 3
平均提取量
C/mg· (g生药)-1
40 17.190 4 16.577 0 16.861 7 16.876 4±0.307 0
50 19.204 6 19.319 1 20.509 2 19.677 6±0.722 4
60 3.969 6 4.322 2 4.483 2 4.258 4±0.262 7
2.2.5　 80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量的考察 考察不同
80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量对人参皂苷 Rb1提取的影响。
结果见表 5。依据结果 ,确定 80%乙醇洗脱用量为 80 ml, 收集洗
脱液 70ml。
表 5　不同 80%乙醇洗脱用量及收集洗脱液量的比较( x±s)
80%乙醇
洗脱用量
收集洗脱
液量 C/ml
人参皂苷Rb1提取量 /mg· g-1生药
1 2 3
平均提取量
C/mg· (g生药)-1
60 50 11.514 3 10.205 9 11.423 7 11.048 0±0.730 7
80 70 19.204 6 19.319 1 20.509 2 19.677 6±0.722 4
100 90 21.027 7 20.318 5 21.325 3 20.890 5±0.517 3
2.3　供试品溶液的制备 取三七花药材粉末(过 3号筛)10 g,精
密称定 0.2 g,置索氏提取器中 ,加氯仿 60 ml,加热回流 1h,弃去
氯仿液 , 药析挥去氯仿 ,加甲醇 55ml,加热回流 4 h, 提取液挥干 ,
加水 10ml溶解 ,加石油醚(30 ～ 60℃)提取 2次 , 10 ml/次 , 弃取
醚液 , 水液通过 D101型大孔吸附树脂柱(内径 1.5 cm, 长 15
cm),以水 70 ml洗脱 ,弃去水液 , 再用 20%乙醇 50 ml洗脱 ,弃去
20%乙醇洗脱液 , 继用 80%乙醇 80 ml洗脱 , 收集洗脱液 70 ml,
蒸干 , 残渣加甲醇溶解并定量转移至 10 ml量瓶中 , 加甲醇至刻
度 , 摇匀 ,即得。
2.4　标准曲线的建立 取人参皂苷 Rb1对照品约 11 mg, 精密称
定 , 用甲醇定容至 10 ml容量瓶中 , 配制成浓度为 1.16 mg· ml-1
的对照品溶液。用甲醇逐级稀释成一系列浓度的标准液。按上
述色谱条件进样 HPLC分析 ,以峰面积(A)对含量(Y)进行线性
回归 , 得标准曲线回归方程为 Y=0.004 6A+0.112 9 r=
0.999 9,线性范围为 0.58 ～ 11.6 μg。
2.5　精密度实验 取同一人参皂苷 Rb1对照品溶液 ,连续进样 6
次 , 精密度为 0.55%。
2.6　稳定性实验 取同一供试品溶液 , 于 0, 2, 4, 6, 8h分别进样 ,
精密度为 0.83%。
2.7　重复性实验 取相同制法制备的同一批次 5份样品进行测
定 , 结果 RSD为 4.12%,表明重复性良好。
2.8　回收率实验 于三七花粉末中加入适量人参皂苷 Rb1对照
品标准液形成高 、中 、低 3个浓度的样品 , 按 “ 2.3”处理后进行
HPLC分析 , 计算人参皂苷 Rb1的方法回收率 , 得回收率分别为
102.88%, 97.87%, 103.57%。结果见表 6。
表 6　回收率实验结果( x±s)
浓度 药材含量C/mg· (g生药)-1
加入量
m/mg
实测量
m/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
25.22 4.03 9.23 104.04
低 26.41 4.03 9.38 101.71 102.88±1.17
24.91 4.03 9.13 102.88
25.22 5.10 10.08 98.76
中 26.41 5.10 10.19 96.32 97.87±1.35
24.91 5.10 10.01 98.53
25.22 6.31 115.54 103.02
高 26.41 6.31 11.83 103.77 103.57±0.48
24.91 6.31 11.54 103.91
　
2.9　三七花药材含量测定 取三七花药材粉末 10 g, 精密称定
0.2 g,按上述测定方法进行 HPLC测定。结果见表 7。
表 7　三七花药材含量测定结果( x±s)
mg· (g生药)-1
样品号 Rb1含量
1 2 3
平均含量
云南文山 25.22 26.41 24.91 25.51±0.79
广西靖西 20.01 21.58 21.39 20.99±0.86
3　讨论
本文曾以三七块根研究中常用的人参皂苷 Rg1作为测定指
标建立含量测定方法 ,但在实验中发现三七花中 Rg1含量远少于Rb
1
, 以其作为测定指标有所不妥 , 与文献报道相符。
由于三七花中所含组分较多 , 包括黄酮类 、挥发油类 、多糖
类 、氨基酸类等 , 且含有块根所没有的大量叶绿素 ,极易对测定造
成干扰 ,故在供试品制备中选用 D101型大孔吸附树脂 , 先用水
洗去多糖 ,再用 20%乙醇洗去黄酮类物质 , 最后收集 80%乙醇洗
脱液 , 结果表明可起到较好的纯化作用。
从研究结果看 , 云南文山的三七花总皂苷含量高于广西靖
西 , 表明不同产地的药材有一定差异 , 选材时必须加以考虑。
参考文献:
[ 1 ] 　刘　刚 ,鲍建材 , 郑友兰 , 等.三七化学成分研究进展 [ J].人参研
究 , 2004, 2:10.
[ 2 ] 　田国才.三七花治疗心律失常的探讨 [ J] .中国民族民间医药杂志 ,
2000, 44:147.
[ 3 ] 　周迎春 ,赵怀清 ,梁　宁 ,等.高效液相色谱法同时测定三七总皂苷
中人参皂苷 Rg1、Re、Rb1 和三七皂苷 R1 含量 [ J] .沈阳药科大学
学报 , 2003, 20(1):27.
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2009VOL.20NO.6 时珍国医国药 2009年第 20卷第 6期