全 文 ：2010年 1月
第 25卷第 1期
中国粮油学报
JournaloftheChineseCerealsandOilsAssociation
Vol.25, No.1
Jan.2010
杏仁皮中黄酮类化合物抗氧化性的研究
王　将 1, 2　郑亚军 1　冯翠萍2
(中国热带农业科学院 1 ,文昌　571339)
(山西农业大学食品科学与工程学院 2 ,太谷　030801)
摘　要　从清除超氧阴离子自由基 、还原力 、清除 DPPH自由基 、清除羟基自由基等方面 ,研究杏仁皮中
黄酮类化合物的抗氧化性。结果表明 ,杏仁皮中黄酮类化合物的还原能力较强 ,对 DPPH·自由基和羟基自由
基有较强的清除能力 ,对 Fe2+的络合能力和脂质体过氧化反应的抑制作用也较强 ,但对超氧阴离子自由基的
清除能力较弱。因此 ,杏仁皮中黄酮类化合物是一种抗氧化功效较强的活性物质 ,具有很好的保健功能。
关键词　杏仁皮　黄酮类化合物　抗氧化性
中图分类号:S667.4　　文献标识码:A　　文章编号:1003-0174(2010)01-0078-04
基金项目:“十一五 ”国家科技支撑项目(2007BAD76B01)
收稿日期:2009-02-10
作者简介:王将 ,男 , 1980年出生 ,硕士 ,食品营养与安全
通讯作者:冯翠萍 ,女 , 1980年出生 ,博士 , 副教授 ,硕士生导师 ,
食品营养与安全
　　杏仁(Almond)为杏果的干燥种子 ,呈扁心形 ,是
很好的药食兼用植物蛋白源[ 1] 。杏仁的保健功能主
要表现为抗突变 、抗肿瘤 、降血糖 、解表宜肺 、抗炎 、
镇痛等 [ 2] 。 《本草求真 》中记载杏仁能发散风寒 、止
咳平喘 、清热解毒和通便 ,还能加强记忆 、减轻忧郁
失眠 ,防止贫血 ,长期食用能强健体魄 ,润肤养颜 ,延
缓衰老 。杏仁皮为杏仁红棕色或深黄色种皮 ,可入
药 ,且含黄酮 、纤维素等多种活性物质。杏仁的研究
报道多集中在杏仁油和杏仁蛋白质方面 ,关于杏仁
皮的研究报道较少[ 3-4] ,关于杏仁皮中黄酮类化合物
及其抗氧化活性未见报道 。研究杏仁皮中黄酮类化
合物(flavonoidsofalmondbran, FAB)的抗氧化性 ,以
期为杏仁皮的进一步开发利用提供理论依据。
1　材料与方法
1.1　材料
杏仁皮:山西省农科院园艺所;DPPH(1, 1 -二
苯基苦基苯肼)、2 -脱氧核糖 、VE、抗坏血酸(VC)、
Ferrozine铁试剂 、没食子酸(GC)、BHT:美国 SIGMA
公司;D-78532型台式高速冷冻离心机:德国 Het-
tich公司;7320G型可见分光光度计:上海仪器科技
公司。
1.2　方法
1.2.1　标准曲线的制作 [ 5]
精确称取干燥恒重的芦丁 150 mg,甲醇定容至
100 mL,得质量浓度为 1.5 g/L的标准储备液 ,装入
棕色瓶中备用 。准确吸取标准储备液 10 mL于
100 mL容量瓶中 , 用 30%乙醇定容至刻度 , 得到
0.15 g/L的工作液。分别吸取工作液 0.0、1.0、2.0、
3.0、4.0、5.0于 10 mL容量瓶中 ,各加入 5%NaNO2
溶液0.3 mL,摇匀 ,放置 6min后 ,加入 10%Al(NO)3
溶液 0.2 mL,摇匀 ,放置 6 min后 ,加入 1 mol/LNaOH
溶液 4 mL, 用 30%乙醇定容至刻度 , 摇匀 , 放置 20
min,用1 cm比色皿 ,以试剂空白为参比 ,在 510nm处
测定吸光度。以芦丁含量(C)为横坐标 ,吸光度(A)
为纵坐标 ,绘制标准曲线 ,所得回归方程为:
A=11.233 C+0.003 5, R2 =0.999 6。
1.2.2　黄酮类化合物的提取 [ 6]与含量的测定
杏仁皮※清洗※干燥※粉碎※过 60目筛※称
取粉末 100 g※石油醚脱脂※按照 1∶20加入 60%乙
醇提取 2 h,重复三次※过滤※合并滤液※浓缩※干
燥※黄酮类化合物※按照 1.2.1方法测定黄酮含
量。
1.2.3　对超氧阴离子(O-2 ·)清除能力的测定:采
用邻苯三酚自氧化法[ 7]进行。
1.2.4　DPPH·自由基的清除作用:参考文献 [ 8]的
方法进行 ,略有改动 。
配置 6.5×10-5 mol/LDPPH溶液。按表 1加入
反应液 ,摇匀 ,暗处反应 30 min后 ,于 517 nm比色测
第 25卷第 1期 王　将等　杏仁皮中黄酮类化合物抗氧化性的研究
定吸光度 A。样品对 DPPH·的清除能力(scavenging
activity, SA)表示为:
表 1　DPPH·试验加样表
编号 反应液
A0 4mLDPPH+1mL75%乙醇溶液
Ai 4mLDPPH+1mL黄酮类化合物溶液
Aj 4mL黄酮类化合物溶液 +1mL75%乙醇溶液
SA=1-(Ai-Aj)/A0 ×100%
式中:A0为样液与溶剂混合液的吸光度;Ai为
DPPH·与样液反应后的吸光度;Aj为 DPPH·与溶
剂混合液的吸光度。试验重复三次 ,取平均值 。
1.2.5　羟自由基(·OH)的抑制实验:采用 2-脱氧
核糖法 [ 9]进行 。
1.2.6　Fe2+络合能力的测定:参考文献 [ 9]中方法
进行。
1.2.7　还原能力的测定:参考文献 [ 10]中方法进
行 ,以没食子酸 、VE、BHT为对照 ,试验重复三次 ,取
平均值 。
1.2.8　脂质过氧化抑制作用[ 11]
脂质体的制备:卵磷脂 1 g溶解于 50mL磷酸盐
缓冲溶液中(0.02MpH=7.4)充入 CO2封口 ,置于
超声波清洗机中混合均匀 , 4℃保存待用 。
脂质过氧化活性的检测:0.1 mL样品混合于
1 mL脂质体中 ,加入 0.5 mL0.05 mol/L的 FeSO4溶
液 , 1.2 mL磷酸盐缓冲溶液(0.2 mol/LpH=7.4),
37 ℃水浴 2h。加入 1%的硫代巴比妥酸溶液 1mL,
10%的盐酸溶液 1mL, 100 ℃水浴 30 min后冷却 ,加
入 5 mL氯仿 , 3 000 r/min,离心 20min,在 532 nm下
测吸光率。
1.2.9　数据处理软件:采用 DPS统计软件进行 ,多
重比较采用邓肯氏新复极差法进行。
2　结果与分析
2.1　杏仁皮中黄酮类化合物对超氧阴离子的清除
能力
杏仁皮中黄酮类化合物对超氧阴离子自由基有
一定的清除作用 ,在 50 ～ 300μg/mL的范围内 ,随质
量浓度的增加 ,其对超氧阴离子自由基的清除能力
逐渐增强 ,见图 1。
2.2　杏仁皮中黄酮类化合物还原力的测定
杏仁皮中黄酮类化合物的还原力见图 2;可以看
出 ,杏仁皮中黄酮类化合物具有较高的还原能力 。
在 4种抗氧化剂中 ,没食子酸的还原能力显著地大
于其他 3种;而杏仁皮中黄酮类化合物又显著地大
于 BHT和 VE。
2.3　杏仁皮中黄酮类化合物对 DPPH·自由基的清
除能力
由图 3可知 ,杏仁皮中黄酮类化合物对 DPPH·
自由基有较强的清除能力。在 4种抗氧化剂中 ,没
食子酸 、VE和杏仁皮中类黄酮的清除能力之间没有
显著性差异 ,但三者的清除能力都显著地大于 BHT。
图 3　杏仁皮中类黄酮对 DPPH的清除作用
2.4　杏仁皮中黄酮类化合物对羟基自由基的清除
能力
类黄酮对羟基自由基的清除能力见图 4。由图 4
可知 ,杏仁皮中黄酮类化合物对 · OH有很强的清除
作用 ,在 4种抗氧化剂中 ,杏仁皮中黄酮类化合物对
·OH的清除作用显著地大于没食子酸 、VE和 BHT,
而没食子酸的清除能力最小 。
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中国粮油学报 2010年第 1期
注:图中 a, b等不同字母表示样品间还原能力
呈差异性显著(P<0.05)
图 4　类黄酮对羟基自由基的清除能力
2.5　杏仁皮中黄酮类化合物对 Fe2+的络合能力
从图 5可以看出 , 4种抗氧化剂中 ,没食子酸对
Fe2+的络合能力极显著地大于其他 3种 ,而 VE、BHT
和杏仁皮种黄酮类物质三者对 Fe2+的络合能力没有
显著性差异 。这说明杏仁皮中黄酮类化合物有较强
的络合 Fe2+能力 。
注:图中 A, B等不同字母表示样品间络合能力
呈极显著性差异(P<0.01)
图 5　黄酮类物质对 Fe2+的络合能力
2.6　杏仁皮中黄酮类化合物对脂质体过氧化的抑
制作用
生物膜的主要成分是磷脂和蛋白质 ,其中磷脂
中不饱和脂肪酸的含量高 ,最容易受到自由基的攻
击 ,发生脂质过氧化反应 ,脂质过氧化物具有毒性 ,
能够损伤大多数体细胞 ,很多疾病的发生与脂质过
氧化有着重要关系[ 11] 。降低脂质过氧化物的生成或
加速过氧化物的清除 ,以防止过氧化脂质对组织细
胞的损伤作用 ,有利于延缓衰老进程和某些疾患的
防治。以抗坏血酸(VC)、没食子酸(GC)和 BHT为
对照 ,分析杏仁皮中黄酮类化合物对脂质体过氧化
作用的抑制效果 ,结果如图 6。
注:图中 A, B等不同字母表示样品间抑制作用
呈极显著差异(P<0.01)
图 6　杏仁皮中类黄酮对脂质体过氧化的抑制作用
　　从图 6中可以看出 ,没食子酸对于脂质体过氧
化的抑制率极显著地高于杏仁皮中黄酮类化合物 、
VC和 BHT,而杏仁皮中黄酮类化合物和 BHT对于
脂质过氧化的抑制率又极显著地高于 VC。这说明
杏仁皮中黄酮类化合物抑制脂质体过氧化作用的效
果比较明显。
3　讨论与结论
杏仁皮中黄酮类化合物的还原能力较强 , 对
DPPH·自由基和羟基自由基有较强的清除能力 ,对
Fe2+的络合能力和脂质体过氧化反应的抑制作用也
较强 ,但对超氧阴离子自由基的清除能力较弱。这
表明 ,杏仁皮中黄酮类化合物既具有抑制自由基生
成作用 ,又能够在有害物质对细胞造成伤害后起到
修复再生作用[ 9] 。由此可见 ,杏仁皮中黄酮类化合
物既适合做预防型抗氧化剂 、也适合做自由基清除
型抗氧化剂 ,同时也有修复再生细胞的机能。但杏
仁皮中黄酮类化合物物质的组成 、各成分的分子结
构以及各成分在发生抗氧化作用时各自的作用机理
等目前还不清楚 ,需要进一步的研究。
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AntioxidantEfectofFlavonoidsfromAlmondBran
WangJiang1, 2　ZhengYajun1　FengCuiping2
(ChineseAcademyofTropicAgricultureScience1 , Wenchang　571339)
(FoodscienceandtechnologycolegeofShanXiagricultureunversity2 , Taigu　030801)
Abstract　Theantioxidantefectofflavonoidsfromalmondbranwasstudiedthroughexaminationsoftheirsuper
oxideradicalscavengingactivity, reducingpower, DPPHradicalscavengingactivity, hydroxylradicalscavengingac-
tivityandsoon.Resultsshowthattheflavonoidsofalmondbranhavehighreducingpower, DPPHradicalscavenging
activityandhydroxylradicalscavengingactivity, andalsohighactivityinmetalchelatingandlipidoxidationinhibi-
ting.Itmeansthatflavonoidsofalmondbranhavehighcapacityofantioxidationandgoodfunctioninhealthcare.
Keywords　almondbran, flavonoids, antioxidation
(上接第 59页)
SynthesisofPhytosterolsLinolenatebyDirect
EsterificationwithoutSolvent
ZhangPin　DengQianchun　HuangQingde　HuangFenghong
(InstituteofOilCropofCAAS, Wuhan　430062)
Abstract　Amethodofsynthesizingphytosterolslinolenatebydirectesterificationofphytosterolsandα-linole-
nicacidwithoutsolventwasstudied.Theinfluencingfactorswerestudiedbysinglefactortests, suchasmassratio,
catalystdose, reactiontimeandtemperature.Throughorthogonaltest, theoptimalsyntheticconditionswerecon-
firmedasfolows:vacuum0.03 ～ 0.04 Mpa, massratioofα-linolenicacidtophytosterols4∶1, catalystdose
2.5% ofrawmaterialweight, reactiontemperature140℃, andreactiontime8h.Undertheseconditions, thedegree
ofesterificationisupto(98.88±0.984)%.Thedevelopedprocessforsynthesizingphytosterolslinolenatecouldbe
consideredasgreen, safeandhighlyeficient.
Keywords　phytosterol, α-linolenicacid, directesterification, phytosterolslinolenate
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