全 文 ： 药理药化
收稿日期:2007-09-11;　修订日期:2007-12-30
基金项目:湖北省自然科学基金(No.2007BZY07013)
作者简介:向梅先(1975-),女(汉族),湖北天门人 ,现为华中科技大学在
读博士研究生 ,中南民族大学生命科学学院讲师 ,主要从事制剂及药材的
质量标准研究工作.
反相高效液相色谱法测定水红花子中槲皮素的含量
向梅先1, 2 , 苏汉文 3 , 闫云君1
(1.华中科技大学生命科学学院 ,湖北 武汉　430074;
2.中南民族大学生命科学学院 ,湖北 武汉　430074;　3.武汉大学人民医院 ,湖北 武汉　430060)
摘要:目的 建立水红花子含量的测定方法。方法 采用高效液相色谱法测定水红花子中的含量槲皮素 , 以 C18柱为色谱
柱 , 甲醇 -0.4%磷酸溶液(42∶58)为流动相;检测波长为 375nm。按外标法进行检测。结果 线性范围 0.12 ～ 1.2 μg(r
=0.999 9),平均回收率 99.1%, RSD=3.1%。结论 此方法简便 , 准确。
关键词:高效液相色谱法;　水红花子;　槲皮素
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1590-01
DeterminationofQuercetininFruitsofPolygonumorientaleL.byHPLC
XIANGMei-xian1, 2 , SUHan-wen3 ,YANYun-jun1
(1.HuazhongUniversityofScienceandTechnology, Wuhan430074, China;2.South-centralUniversityfor
Nationalities, Wuhan430074, China;3.PeoplesHospitalofWuhanUniversity, Wuhan430060, China)
Abstract:ObjectiveToestablishamethodforthedeterminationofquercetinfromthefruitsofPolygonumorientaleL.Methods
QuercetinwasdeterminedbyHPLC.ThemobilephasewasMethanol-0.4%Phosphorusacidglacial(42∶58).Thedetection
wavelengthwassetat375 nm.Theexternalstandardmethodwasused.ResultsThequercetinsamplesizeshowedagoodlinear
relationshipattherangeof0.12 ～ 1.2 μg(r=0.999 9).Theaveragerecoveryoftheaddedsamplewas99.1%, RSDwas
3.1%.ConclusionThemethodissimple, accurate.
Keywords:HPLC;　FruitsofPolygonumorientaleL.;　Quercetin
　　水红花子为红蓼的成熟果实 ,具有散血消癥 、消积止痛之功。
用于癥瘕痞块 , 瘿瘤肿痛 ,食积不消 ,胃脘胀痛等症。在前人对水
红花子有关现代药理研究的基础上 , 本文对水红花子 [ 1]的含量
进行了相关研究 , 以期探讨该药材的指纹图谱研究 , 为该药材制
定质量标准奠定基础 。
1　材料
Agilent1100高效液相色谱系统 [美国 Agilent公司 ] , CIV-
240IPC紫外分光光度计(日本 SHIMADZU公司);槲皮素对照品
(中国药品生物制品检定所);水红花子购于湖北省中药材公司 ,
药材经中南民族大学万定荣教授鉴定为蓼科植物红蓼的成熟果
实即水红花子。所用试剂均为分析纯 ,水为注射用水。
2　方法与结果
2.1　色谱条件 色谱柱为 KromasilC18 250 mm×4.6 mm;柱温
30℃;流动相为甲醇 -0.4%磷酸溶液(42∶58);流速 1.0 ml·
min-1;检测波长 375nm;进样量 10 μl。色谱图见图 1。
2.2　对照品溶液的制备 精密称定槲皮素对照品适量 , 置 10ml
量瓶中 , 加甲醇溶解并稀释至刻度 , 制成含槲皮素 0.6 mg· ml-1
的对照品溶液。
2.3 　供试品溶液的制备 取水红花子粉末约 5.0 g, 精密称定 ,
置索氏提取器中 , 加石油醚(60 ～ 90℃)80 ml, 加热回流 1 h, 滤
过 , 弃去石油醚液 , 药渣加甲醇 80 ml, 加热回流提取至无色 , 滤
过 , 滤液蒸干 ,残渣加甲醇溶解并转移置 10 ml量瓶中 , 稀释至刻
度 , 摇匀 ,用 0.45 μm微孔滤膜滤过 ,取续滤液作为供试品溶液。
2.4　线性关系考察 取配制含槲皮素 0.06 mg· ml-1的对照品
溶液 , 分别进样 2, 4, 6, 8, 10, 20μl测定槲皮素的吸收峰峰面积 ,
以进样量(μg)为横坐标 , 吸收峰峰面积为纵坐标作图 , 得出回归
方程为:Y=18.772X-4.751 7, r=0.999 9。结果表明 , 槲皮素进
样量在 0.12 ～ 1.2 μg范围内呈良好的线性关系。
a-样品　b-对照品　1.槲皮素
图 1　水红花子的高效液相色谱图
2.5　精密度实验 取对上述照品溶液 10 μl, 重复进样 5次 , 按
上述色谱条件进行测定 , 其相对保留时间稳定 , RSD为 0.9%(n
=5), 表明仪器精密度良好。
2.6　稳定性实验 取同一浓度的供试品溶液 ,分别进样 10 μl于
0, 6, 12, 24, 48h进样测定 , RSD为 2.7%(n=5), 表明样品溶液
在 48h内基本稳定。
2.7　重复性实验 取同一批号药材 , 按供试品溶液的制备方法
平行制备 5份 , 按上述色谱条件进行测定 , RSD为 2.5%(n=5),
表明该方法重复性良好。
2.8 　回收率实验 精密称取 5份已知含量的水红花子粉末 , 分
别准确加入适量槲皮素对照品 ,按供试品溶液的制备方法处理并
进行测定 ,结果平均回收率为 99.1%, RSD=3.1%(n=5)。表明
该测定方法可靠。结果见表 1。
2.9　样品含量测定 按上述方法对 3批水红花子粉末 , 按前面
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时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7　
含量测定方法进行测定 , 计算样品中槲皮素的含量 , 分别为
0.025 6%, 0.023 5%, 0.02 24%。
表 1　回收率实验
样品
号
取样量
m/g
含量
m/mg
加入量
m/mg
测得总
含量 m/mg
回收率
(%)
平均回收率
(%)
RSD
(%)
1 4.943 1 0.610 5 0.590 1.180 4 96.67
2 5.173 6 0.638 9 0.661 1.326 4 104.17
3 5.156 8 0.636 9 0.650 1.276 7 98.34 99.1 1.48
4 5.082 7 0.607 7 0.617 1.205 8 96.89
5 5.136 5 0.634 4 0.635 1.264 6 99.25
3　 讨论
为更有效控制本品的内在质量 , 本文采用了 RP-HPLC法
测定其槲皮素的含量 ,其方法简便 , 分离度好 , 专属性强 , 为水红
花子指纹图谱研究奠定了基础。
实验曾分别选用甲醇 -0.5%醋酸溶液和甲醇 -0.4%磷酸
溶液为流动相 [ 2, 3]进行测定 , 结果流动相中加入一定量的磷酸 ,
可改善峰形和分离度。
参考文献:
[ 1 ] 　郑一敏 ,胥秀英 ,傅善权 ,等.高效液相色谱法测定水红花子中芦丁
与槲皮苷的含量 [ J] .中国药学杂志 , 2005, 40(21):1660.
[ 2 ] 　翟延君 ,冯夏红 ,初正云 ,等.水红花子的品质评价研究 [ J] .中国药
房 , 2005, 16(13):1034.
[ 3 ] 　朱丽华 ,蒋国强 ,杨水新 ,等.高效液相色谱法测定菟丝子中芦丁 、
槲皮素及山萘酚的含量 [ J].浙江中医学院学报 , 2001, 25(4):65.
收稿日期:2007-10-16;　修订日期:2007-12-19
基金项目:江苏省科学技术厅科技资助项目(No.BM2006507);
江苏省南京市科技局资助项目(No.200701056)
作者简介:张明霞 (1981-),女(汉族),河南焦作人 ,现为江苏省中国科学
院植物研究所在读硕士研究生, 学士学位 , 主要从事药用植物栽培研究
工作.
＊通讯作者简介:夏　冰 (1960-),男(汉族),云南宣威人 ,现任江苏省中
国科学院植物研究所研究员 ,博士学位,主要从事资源植物表型可塑性与
遗传生态因子的关系研究工作.
超声辅助提取忽地笑中加兰他敏的工艺研究
张明霞 , 单　宇 , 冯　煦 , 彭　峰 , 江玉梅 , 王　鸣 , 夏　冰＊
(江苏省中国科学院植物研究所 ,江苏 南京　210014)
摘要:目的 采用正交实验设计探讨超声辅助提取忽地笑中加兰他敏的最佳工艺。方法 忽地笑鳞茎样品碱化后用醋酸
乙酯超声辅助提取 , 用 HPLC法测定加兰他敏含量。结果 最优提取条件为:加入 0.7 ml10%NaOH溶液碱化样品 , 在
65℃, 210W下提取 3次 , 10 min/次 ,共 30 min。结论 超声辅助提取忽地笑中加兰他敏是一种简单 、快捷 、高效的提取
方法。
关键词:忽地笑;　加兰他敏;　正交实验;　超声波辅助提取;　高效液相色谱
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)07-1591-02
StudyontheUltrasound-associatedExtractionofGalanthaminefromLycorisaurea
ZHANGMing-xia, SHANYu, FENGXu, PENGFeng, JIANGYu-mei,WANGMing, XIABing＊
(InstituteofBotany, JiangsuProvinceandChineseAcademyofSciences(NanjingBotanicalGarden, Mem.Sun
Yat-sen), Nanjing210014, China)
Abstract:ObjectiveTostudytheultrasound-associatedextractionofgalanthamineinLycorisaureabyorthogonaldesign.MethodsGalanthaminewasextractedwithethylacetateanddeterminedbyHPLC.ResultsTheoptimalultrasound-associated
extractionconditionswas0.7 ml10%NaOH, extractiontemperature65℃, ultrasonicpower210Wandextracting3 times, 10 mi-
nuteseachtime.ConclusionTheultrasound-associatedextractionmethodofgalanthamineinLycorisaureaissimpleandefi-
cient.
Keywords:Lycorisaurea;　Galanthamine;　Orthogonalaraydesign;　Ultrasound-associatedextraction;　HPLC
　　加兰他敏(Galanthamine, 简称 GAL)是一个叔胺生物碱 , 最
早是在 1952年由 Proskurnina和 Yakovleva从石蒜科植物沃氏雪
花莲 GalanthusworonowiiLosink中分离得到 , 广泛分布于石蒜科
植物中 [ 1] 。有研究表明加兰他敏对小儿麻痹后遗症 、重症肌无
力和外伤性截瘫等病症有效 , 且毒性较小 [ 2 , 3] 。 20世纪 90年代
以后 , 加兰他敏的氢溴酸盐又被用于治疗阿尔茨海默病(Alzhei-
mersDisease, AD), 并因其无心 、肝毒副作用而有望成为治疗该
病的首选药物 [ 4, 5] 。在我国加兰他敏的来源植物中 ,忽地笑 Lyco-
risaureaHerb.鳞茎为石蒜属中提取加兰他敏的良好原料 [ 6] 。此
外 , 忽地笑分布广泛 ,蕴藏量大 , 在长江中下游一带的低山丘陵区
常成大片分布 [ 7, 8] 。
鉴于加兰他敏在医学上的重要应用 ,因此对其进行开发利用
研究具有十分重要的现实意义。本文利用溶剂浸提 ,并借助超声
波辅助提取(Ultrasound-associatedextraction, UAE)这种新的工
艺方法 , 详细研究了忽地笑鳞茎中加兰他敏的最佳提取工艺条
件 , 并采用 HPLC方法测定其中加兰他敏的含量 , 为以后加兰他
敏提取分离新工艺研究提供理论基础。
1　材料与方法
1.1　材料 、试剂与仪器 忽地笑为 2006-06采于南京中山植物园
药物园内 ,原产地为安徽 , 引种至南京中山植物园两年 ,由江苏省
中国科学院植物研究所药用植物研究中心袁昌齐研究员鉴定。
除去根须 , 将鳞茎切成薄片 , 60℃烘干 24 h, 冷至室温后粉碎过
80目筛待用 。
KQ-300DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公
司);美国 Agilient1100高效液相色谱仪;RE-52c旋转蒸发仪
(巩义市英峪予华仪器厂);德国 SartoriusBP221S电子天平。 乙
腈及其他高效液相色谱仪所用试剂均为色谱纯;加兰他敏对照品
为江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究中心自制 , HPLC
检测纯度大于 98%。其他试剂为分析纯。
1.2　方法
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2008VOL.19NO.7 时珍国医国药 2008年第 19卷第 7期